实验酵母RNA的分离及组分鉴定

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1、实验六酵母 RNA 的分离及组分鉴定【实验目的】了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。【实验原理】酵母核酸种RNA 含量较多。 RNA 可溶于碱性溶液， 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。由此即得到RNA 的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。鉴定依据： 磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。【实验器材】150 ml 锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管 8、试管及试管架9、烧杯 、离心机、漏斗【试剂和材料】1、 0.

2、04 mol/L 氢氧化钠溶液；2、酸性乙醇溶液：将0.3 毫升浓盐酸加入30 毫升乙醇中；3、95%乙醇；4、乙醚；5、1.5 mol/L 硫酸溶液；6、浓氨水；7、0.1 mol/L 硝酸银溶液；8、三氯化铁浓盐酸溶液：将 2 ml 10% 三氯化铁溶液 （用 FeCl3 6H2O 配制） 加入到 400 ml 浓盐酸中；9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g 苔黑酚于100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；10、定磷试剂：（1）17% 硫酸溶液：将19 ml 浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 ml水中（ 2）2.5% 钼酸铵溶液：将2.5 g 钼酸铵溶于100 ml

3、水中（ 3）10% 抗坏血酸溶液：10 g 抗坏血酸溶于100 ml 水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸） 。临用时将上述3 种溶液与水按如下比例混合。17% 硫酸溶液： 2.5% 钼酸铵溶液： 10% 抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V) ；11、酵母粉。【实验操作】1、溶解 RNA 将 5 g 酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液于150 ml 锥形瓶中， 在沸水浴中加热30 分钟，制成碱提取液，将其冷却。2、解聚 RNA 将冷却的碱提取液离心（6000/min） 5 分钟，将上清液用乙酸调节pH 至酸性（pH56 ）

4、）缓缓倾入30 ml 乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（6000/min）5 分钟。弃去清液。3、洗涤沉淀，抽滤得RNA 采用倾倒法用95% 乙醇洗涤沉淀两一次，即得 RNA 。4、RNA 各组分鉴定（1）水解液制备取 200 mg 提取的核酸， 加入 1.5 mol/L 硫酸溶液10 ml，在沸水浴中加热10 分钟后即得核酸水解液。（2）组分鉴定 嘌呤碱的鉴定取水解液 1 ml 加入过量浓氨水，然后加入约1 ml 0.1 mol/L 硝酸银溶液， 观察有无嘌呤碱的白色银化合物沉淀。 核糖的鉴定取 1 支试管加入水解液1 ml ，三氯化铁浓盐酸溶液2 ml 和苔黑酚乙醇溶液0.2 ml。放沸水浴中10 分钟。溶液变成绿色，说明核糖的存在。 磷酸的鉴定取 1 支试管加入水解液1 ml 和定磷试剂1 ml ，在水浴中加热，溶液变成蓝色，说明有磷酸的存在。