《微生物学检验细菌的生物化学实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物学检验细菌的生物化学实验（59页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、常用细菌生化反应试验糖醇类代谢试验 糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化发酵试验（O/F试验） 七叶苷水解试验 半乳糖苷渗透酶试验糖发酵试验 原理多糖单糖丙酮酸酸性产物( 或产酸产气)pH 指示剂呈酸性 变色(若产气者有气泡出现) 培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微 量发酵管 试剂：酚红、溴甲酚紫等 结果:培养基呈酸性变色 应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常 用于肠道杆菌的鉴定糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解糖产酸、产气酸性变色、无气泡分解糖产酸、不产 气培养基不变色不分解糖甲基红试验 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步 生成大量混合酸，使培养基pH维持在4
2、.4 以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色 反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色： 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌伏普试验（V-P试验） 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色： 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH
3、降至4.4以下甲基红试剂培养基变红甲基红试验葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红VP试验脱酸葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红脱酸蛋白质类代谢试验 靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验靛基质试验 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： 应用：用于肠道杆菌的鉴定靛
4、基质试验原理色氨酸酶色氨酸靛基质 （吲哚）玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）对二甲基氨基苯甲醛硫化氢试验 原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸 ，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁 盐或铅盐结合生成黑色络合物。 培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴 性 应用：常用于肠道杆菌的鉴定苯丙氨酸脱氨实验 原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶， 可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯 丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿 色化合物。 培养基：苯丙氨酸琼脂 试剂：10三氯化铁 结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳 性 应用：多用于肠道杆菌的鉴定苯丙氨酸脱氨试验原理苯丙氨酸苯丙氨酸脱氨酶苯丙酮酸
5、 10三氯化铁绿色化合物尿素酶试验 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+ 培养基不变色 应用：肠杆菌科属间鉴定尿素酶试验原理尿素 尿素酶氨+CO2培养基pH升高酚红呈碱性变色枸橼酸盐利用试验 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯 一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。 培养基：枸盐酸盐培养基 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色） 结果：培养基变蓝：+培养基不变
6、色： 应用：肠杆菌科属间鉴别枸橼酸盐利用试验原理枸橼酸盐铵盐碳酸盐氨培养基pH下降溴麝香草酚蓝呈碱性变色培养基变蓝培养基糖发酵试验甲基红试验靛基质试验血清学试验 血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的 抗原 血清学诊断： 用已知抗原检测血清中的特异性抗体血清学鉴定 试剂（诊断血清） ：含抗体 检测对象：特异性抗原 方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿 胀试验伤寒杆菌诊断血清 （含抗伤寒杆菌抗体）+ 待检测细菌细菌凝集玻片凝集试验：阳性报告：检出伤寒杆菌血清学诊断 试剂：含已知抗原 应用：检测待检者血清中有无相应的抗 体以及抗体的效价球 菌 种类: 革兰阳性葡萄球菌属、链球菌属（链球菌
7、、肺炎 链球菌）、肠球菌属、微球菌属等 革兰阴性奈瑟菌属、布兰汉菌属四种革兰阳性菌的比较葡萄球菌属微球属链球菌属气球菌属排列方式葡萄串状、四联或成 对链状成双或四联触酶试验+-弱+氧化/发 酵发酵氧化发酵发酵厌氧生长+不生长+弱葡萄球菌属 最常见的化脓性球菌 医务人员的葡萄球菌带菌率高 革兰阳性、葡萄串状排列 产生不同的脂溶性色素 触酶试验阳性 发酵葡萄糖 金黄色葡萄球菌是主要致病菌形态染色 革兰阳性球菌、葡萄串状排列 无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜葡萄球菌革兰染色镜下图染色性：形态：排列：培养特性生长条件 需氧、兼性厌氧 营养要求不高，普通培养基上生长良好 耐盐，1015NaCl上能生长培养
8、特性生长现象 液体培养基：均匀混浊、少许沉淀 固体培养基：中等大小菌落、圆形、凸 起、边缘整齐、光滑、湿润的S型菌落常用培养基及菌落特征 血平板（营养培养基）：中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素 、透明溶血环（致病葡萄球菌） 高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）：淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌） 卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）：菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌 ）生化反应 触酶试验：+ 葡萄糖氧化发酵试验：发酵+ 甘露醇分解试验：+（致病菌株）抗原构造葡萄球菌A蛋白（SPA） 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性 结合，应用于协同凝集试验 抵抗吞噬细胞的吞噬
9、多糖抗原 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊 断分类和分型葡萄球菌包括32种及亚种 根据产生色素的不同分类 根据产生凝固酶与否进行分类 按噬菌体分型法分类葡萄球菌传统分类金黄色 葡萄球菌表皮 葡萄球菌腐生 葡萄球菌 产生溶血毒素+产生凝固酶+产生耐热DNA酶+产生SPA+新生霉素敏感性SSR致病性强弱无金葡菌噬菌体分型 分型：分五个群，共22型 意义：追踪传染源抵抗力 是抵抗力最强的无芽孢细菌 耐干燥 对龙胆紫敏感 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌（MRSA）已成为医院感染最常见 的致病菌致病物质 凝固酶 葡萄球菌溶素 杀白细胞素 肠毒素 剥脱毒素 毒性休克综合征毒素1凝固酶 游离凝
10、固酶：采用试管法检测 结合凝固酶：采用玻片法检测 金葡菌凝固酶试验均为阳性 凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志游离凝固酶协同因子凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白血浆凝固结合凝固酶（位于菌体表面）纤维蛋白原纤维蛋白细菌凝集所致疾病 侵袭性疾病 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎 、脑膜炎、败血症等 毒素性疾病： 食物中毒、假膜性肠炎等免疫性 有一定天然免疫力 病后获得的免疫力作用不强、不持久微生物学检验细菌鉴定的基本程序标本直接涂片 革兰染色镜检分离培养取可疑菌落鉴定试验和药敏试验结果报告标本采集 根据病种不同，采集不同标本脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿 液、痰液、脑脊液、粪便检验程序脓、穿刺液、尿液
11、、痰脑脊液血液粪便、呕吐物增菌培养分离培养分离培养分离培养直接涂片染色鉴定试验和药敏试验菌落涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶药敏试验其它试验报告金葡菌脓标本检验程序脓标本分离培养(血平板)直接涂片染色鉴定试验和药敏试验报告血浆凝固酶耐热核酸酶药敏试验其它试验涂片染色检验方法直接镜检 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 初步报告:“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑似 葡萄球菌”“查见革兰阳性球菌”检验方法分离培养 脓、痰、脑脊液标本接种血平板 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性 色素、透明溶血环（-溶血环）检验方法分离培养 粪便标本高盐甘露醇平板 菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色 菌落检验方法分
12、离培养 血标本增菌（葡萄糖肉汤）分 离培养（血平板） 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血金葡菌的鉴定依据 血平板上金黄色色素、-溶血环 血浆凝固酶 + 发酵甘露醇 + 耐热核酸酶 +凝固酶阴性葡萄球菌（CNS） 条件致病菌 医院内感染的重要病原菌 对多种抗生素耐药 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS ）是院内感染的重要病原菌之一，MRSA 、MRCNS对多种抗生素耐药，MRSA不仅 对青霉素类、头孢菌素类等内酰胺类抗 菌药物耐药，同时也对四环素、红霉素、 氯霉素、克林霉素及庆大霉素等常用抗菌 药物耐药，对利褔平和磺胺的耐药率也达 30，但通常对万古霉素敏感。MRSA、 MRCNS常常引起院内感染与播散，且难于 治疗和控制，病死率高。 有资料表明两者的耐药谱及机理都有许 多相似的地方，其传播方式是患者 医护人员患者之间的传播，特别是 医护人员手的传播，这些带菌者是有可 能成为传染源，推测病房医护人员 MRSA,MRCNS带菌可能是由于长期工 作在病房，接触患者较多所致。鉴定试验：血浆凝固酶试验 玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便 快速 试管法：检测游离型血浆凝固酶，灵敏生理盐水待检细菌新鲜兔血浆协同凝集试验金葡菌SPASPA 细胞膜细胞质细胞壁
