《16 重组dna技术与蛋白质工程1》由会员分享，可在线阅读，更多相关《16 重组dna技术与蛋白质工程1（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务基因重组与基因工程 Genetic Recombination and Genetic Engineering 苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务第 一 节 重组DNA技术DNA Recombination Technique 苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务一、相关概念DNA克隆工具酶目的基因基因载体二、基本原理及操作步骤 本节主要内容苏教版初三语文广告多棱镜专题课件
2、证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务一、重组一、重组DNADNA技术相关概念技术相关概念 克隆(clone) 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning)， 即无性繁殖。（一） DNA克隆苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务DNA克隆应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组D
3、NA (recombinant DNA) 。苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、 酶工程、细胞工程等。目的 分离获得某一目的基因或DNA 获得目的基因的表达产物（蛋白质）基因工程(genetic engineering) 实现基因克隆所用的方法及相关的工作，又称重组DNA技术。苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务（二）工具酶 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶 逆转录酶 T4DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶苏教版
4、初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务重组DNA技术中常用的工具酶工 具 酶功 能限制性核酸内切酶识别识别 特异序列，切割DNADNA连连接酶催化DNA中相邻邻的5磷酸基和3羟羟基末端之间间形成磷酸 二酯键酯键 ，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连连接DNA聚合酶合成双链链cDNA分子或片段连连接 缺口平移制作高比活探针针 DNA序列分析 填补补3末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53 聚合、35外切活性，而无53外切活性。常用于 cDNA第二链链合成，双链链DNA 3末端标记标记 等反转录转录
5、酶合成cDNA 替代DNA聚合酶I进进行填补补，标记标记 或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5羟羟基末端磷酸化，或标记标记 探针针末端转转移酶在3羟羟基末端进进行同质质多聚物加尾碱性磷酸酶切除末端磷酸基苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。GGATCC CCTAGGG CCTAGGATCCG+Bam H苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业
6、文化建设操作实务作用：与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统，限制外源DNA， 保护自身DNA。分类：、类 （基因工程技术中常用的是类）苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写； 第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写； 第四个字母代表株； 用罗马数字表示发现的先后次序。命名：Hin d属 系 株 序Haemophilus influenzae d株 流感嗜血杆菌d株的第三种酶苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务类酶识别序列特点： 回文结
7、构(palindrome)切口：平端切口、粘端切口GGGGA AT TCCCC CCCCT TA AGGGG苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务Bam HGTC CAGG CCTAGGATCCG+GGATCC CCTAGGHind GTCGAC CAGCTGGAC CTG+平端切口粘端切口苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同 ，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同 尾酶。这两个相同的粘性末端称为配伍未端 (compatible
8、end)。Bam Bam HHBg Bg l lGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAG CCTAGGATCCG+A TCTAGGATCTA苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务DNA聚合酶和DNA连接酶DNA连接酶催化5和3端形成磷酸二酯键，底物为带缺口的DNA、黏端DNA或平端DNA。GGATCT CCTAGAG CCTAGGATCTA+Bam H苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务（三）目的基因 cDNA (complementary DNA) ：为具有与某
9、RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA 基因组DNA (genomic DNA)苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务（四）基因载体定义 为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达 有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。常用载体质粒DNA噬菌体DNA病毒DNA苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务克隆载体(cloning vector)为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。表达载体(expression vector) 为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链
10、而特意设计的载体称为表达载体。苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务载体的选择标准 含有复制起始点，能在宿主中独立复制； 分子量小，以容纳较大的外源DNA； 不能插入宿主基因组，易于分离和纯化； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定 ； 有克隆位点（外源DNA插入点），由限制性内切酶的 识别序列组成。苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务1. 质粒 (plasmid)特点: 能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗 传信息, 会赋予宿主细胞一些遗传性状（一般带 有抗
11、生素的抗性基因）。 细菌染色体外 的小型环状双链 DNA分子。苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务噬菌体DNA改造系统 gt系列（插入型，适用cDNA克隆）EMBL系列（置换型，适用基因组克隆）2. 噬菌体(phage) ：适用于大 片段DNA的克隆M13噬菌体DNA改造系统（含lacZ基因）M13mp系列pUC系列苏教版初三语文广告多棱镜
12、专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务3. 柯斯质粒(cosmid)pJB8的物理图谱苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务酵母人工染色体(yeast artificial chromosome, YAC)动物病毒DNA改造的载体腺病毒载体逆转录病毒载体杆状病毒载体其他苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务二、重组DNA技术基本原理目的基因的获取重组DNA导入受体菌外源基因与载体的连接克隆载体的选择和构建重组体的筛选克隆基因的表达 苏教版初
13、三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务以质粒为载体的 DNA克隆过程苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务（一）目的基因的获取1. 化学合成法已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨 基酸序列 。2. 基因组DNA文库(genomic DNA library)3. cDNA文库(cDNA library)4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务1.
14、化学合成法由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务组织或细胞染色体DNA基因片段克隆载体重组DNA分子含重组分子的转化菌限制性内切酶受体菌存在于转化细菌内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合2. 基因组DNA文库苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务限制酶切位点限制酶消化 除去中间片段cos LR coscos L 左臂R cos 右臂真核生物染 色体DNA限制酶部分消化 外源DNA与载体DNA混合 连接反应 体外包装 用重组噬菌体 感染
15、大肠杆菌 20 Kb DNA 片段 cos LR cos20 Kb 外源 DNA 片段 基因文库苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务mRNA cDNA 双链cDNA 重组DNA分子 cDNA文库 反转录酶 载体 受体菌 复制3. cDNA文库 逆转录酶A A A AT T T TAAAASI核酸酶DNA聚合酶碱水解T T T T苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务DNA序列是已知的，或两端已知，可以利用选择性体外扩增DNA的方法PCR。是一种在体外利用酶促反应大量获得特异
16、序列的基因组DNA或cDNA的专门技术，又称为无细胞的分子克隆。4. 聚合酶链反应（PCR）苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务模板DNA引物4种dNTPTaq DNA聚合酶含Mg2+的缓冲液。PCR的反应体系 苏教版初三语文广告多棱镜专题课件证券投资的技术分析理论服务型机器人项目路演文档企业文化建设操作实务（1）变性，加热至95 ，使模板DNA解开成单链；（2）退火，温度降至适宜，使引物与模板互补结合；（3）延伸，温度升至72 ，DNA聚合酶以4种dNTP为底物，在引物的3-OH上，合成与模板互补的DNA新链。PCR的基本反应步骤及原理 苏教版初三语文广告多棱镜
