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1、增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明基因工程制药增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明第一节 基因工程基本概念一.基因工程的概念从生物基因组中分离感兴趣的基因(或人工合成基因)，将之与载体基因在体外重组后，再将重组DNA分子转入适当的受体细胞，获得基因表达的产物。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明基因工程
2、的目的 分离获得感兴趣的基因或DNA 获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 二. 基因工程主要步骤1. 获得具有遗传信息的目的基因从复杂的生物体基因组中，分离出带有目的基因的DNA片段。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 鸟枪克隆法（Shotgun Cloning）提取细胞总DNA，酶切、连接至特定载体上，再转化到宿主细胞中进行扩增，以同源基因为探针，杂交获得目的基
3、因。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明“鸟枪法”提取目的基因的步骤1.用限制酶将供体细胞DNA切成许多片段.2.将许多DNA片段分别载入运载体.3.通过运载体分别转入不同的受体细胞.4.让供体DNA片段在受体细胞内大量增殖.5.找出带有目的基因的细胞，并分离出目的基因. 增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 人工合成法 酶促法：提取编码基因的信息RNA（mRNA），逆转录酶作用下，合成互补DNA（c
4、DNA）；DNA聚合酶作用下形成双链DNA。 化学合成法：根据已知DNA的核苷酸序列，在DNA连接酶作用下，化学合成。 聚合酶链反应（PCR）：先决条件是已知基因的核苷酸序列，并据此设计引物，进行目的基因的扩增。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 2. 选择基因载体 目 的 无合适载体协助，目的基因很难进入受体细胞 ； 欲保证目的基因繁殖，必需将它与载体连接。载体定义载体定义为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。重要特点能自我复制、并带选择性标记的DNA分子。
5、克隆载体(cloning vector)为使插入的外源DNA序列被扩增而设计的载体。表达载体(expression vector)为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而设计的载体。载体的选择标准载体的选择标准n n能自主复制，能自主复制，具有高拷贝数；n外源DNA片段插入载体后，不得使载体的复制功能丧失；n n具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定（和鉴定（筛选阳性克隆）；n n有克隆位点（外源有克隆位点（外源DNADNA插入点），即多个单一酶插入点），即多个单一酶切位点；切位点；n n分子量小分子量小，以容纳较大的外源以容纳较大的外源
6、DNADNA。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 常用克隆载体 质粒是某些细菌中独立于染色体外的共价闭合环状双链DNA。具有自我复制能力，它的存在与否一般对细菌生存没有决定性影响。 噬菌体是一种能感染大肠杆菌的病毒，其DNA中的1/3对噬菌体生长并非绝对需要，因此可被外源性DNA替代。同时，它可在体外包装成病毒颗粒，高效感染大肠杆菌。克隆容量小于23kb。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 常用克
7、隆载体 粘性质粒（Cosmid）人工构建的、兼具质粒与噬菌体双重特性的大容量载体。克隆容量可达45kb。 酵母人工染色体20世纪80年代发展起来的大片段外源基因克隆体系，其克隆容量可达2001000kb。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明载体特点 至少有一个复制起点，可在一种生物体中自主复制。 至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入。 至少应有两个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞。 具有较小分子量和较高拷贝数。注：前三个特点必不可少。增长型发展策略与集团公司手机上网意见
8、PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 遗传标记基因的作用 指示外源DNA分子是否进入宿主细胞可以是选择性的（Ampr ，Tetr ，Kanr）也可以是非选择性的（如lacZ） 指示外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子可以是选择性的（如TcS）也可以是非选择性（如TcS，lacZ)，绝大多数为后者。有的遗传标记基因可以兼任上述两项作用。充任第一作用时，最好是选择性标记基因；充任第二作用时，多采用非选择性基因。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗
9、仪器操作说明标记基因的种类 抗性标记基因可直接用于选择转化子，主要是抗生素抗性基因，如：Ampr ，Tetr ，Cmlr，Kanr，Strr 生化标记基因表达产物可催化某些易检测的生化反应，如lacZ增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明常用遗传标记基因及其作用机制 四环素抗性基因（ Tetr ，Tcr）Tetracycline 可结合在核糖体30s亚基中的一种蛋白质分子上，抑制核糖体的转位过程。四环素抗性基因编码一种399 AAs蛋白质，与细菌细胞膜结合，阻止四环素分子进入细菌细胞。 增长型发展策
10、略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明常用遗传标记基因及其作用机制 氨苄青霉素抗性基因（ Ampr ，Apr）Ampicillin可抑制细菌细胞膜上参与细胞壁合成酶类的活性。Apr抗性基因编码一种分泌到细菌细胞周间质的酶，可特异地切割氨苄青霉素的内酰胺环，使氨苄青霉素失活。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明常用遗传标记基因及其作用机制 氯霉素抗性基因（ Cmlr ，Cmr）Chlorophenicol可结合在核糖
11、体50 S 亚基上，阻止蛋白质合成。Cmr基因编码氯霉素乙酰转移酶，使氯霉素乙酰化，导致乙酰化的氯霉素不能结合在核糖体上。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 常用遗传标记基因及其作用机制 卡那霉素(Kanr), 新霉素(Neor)和G418抗性(G418r)基因Kanamycin，Neomycin和G418均属脱氧链霉胺氨基葡萄糖苷类抗生素，可结合在核糖体上阻止蛋白质的合成。Kanr等抗性基因均可使这类抗生素磷酸化，使之不能进入细胞内。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据
12、时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 常用遗传标记基因及其作用机制 半乳糖苷酶基因（lacZ 和lacZ） - 半乳糖苷酶基因有1021 AAs，基因产物装配为四聚体后才有酶活； 该蛋白质分为链和链。前者负责四聚体装配，后者具- 半乳糖苷酶活性； 仅当两者都存在，才表现酶活性，称-互补作用； 这两个部分可独立存在， 分别由两个基因编码； 为链编码的基因称之为lacZ(编码145 AAs)； 两个基因（LacZ和LacZ）均可作为标记基因。 增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件
13、理疗仪器操作说明lacZ（lacZ）中含有多克隆位点，当无外源DNA片段插入时，质粒表达- 半乳糖苷酶的-肽，与缺失突变体宿主菌（不能编码-肽）表达的lacZ基因产物（ 链）互补，产生有活性的- 半乳糖苷酶，在含有指示剂X-gal和诱导剂IPTG的存在下，菌落呈现兰色；外源基因的插入后，破坏了lacZ -肽基因的结构，细菌内不能产生半乳糖苷酶活性，菌落呈白色。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 半乳糖苷酶基因的优点 酶催化X-Gal水解为兰色产物，检测直观； lacZ编码5-端可容许很大的变化（
14、如加入多克隆位点）而不影响酶活性； 分别表达lacZ链、链的基因，可使载体小而容量大。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明质粒的一般生物学特性 是细菌染色体外的、能自主复制的、环形双链DNA分子。 R质粒编码抗菌素抗性基因的质粒。R质粒可将其抗性转移到缺乏该质粒的适宜受体细胞，使后者也获得同样的抗菌素抗性能力。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 质粒DNA分子可以持续稳定游离于染色体外，但在一定条件
15、下，又会可逆地整合到寄主染色体上，与染色体一起复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒DNA不仅能在细菌中复制，并且在添加真核复制信号和启动子后，可以构建出能在原核和真核细胞中均可复制的穿梭质粒，并在真核细胞中表达，因此这类载体在基因工程中应用广泛。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 质粒的拷贝数 质粒拷贝数 某种质粒在一个细菌细胞内的数目。 根据寄主细胞中质粒拷贝数，将质粒分类为： 严紧型复制质粒（拷贝数少，1-5个） 松弛型复制质粒（拷贝数多，10-200个）作为载体的质粒应该是松弛型的。增长
16、型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明普通型载体 至少有一个以上的克隆位点 两个标记基因：一 个用于转化体选择，另一个用于重组子检测。 用途: 基因文库的构建;外源DNA扩增。 例子: pBR322 和 pUC 载体。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解析思考PPT培训课件婴儿喂养母乳缺点课件理疗仪器操作说明 pBR322载体 分子量较小，为4363bp，利于自身DNA的纯化，可容纳的外源DNA也较大。 具有两种抗菌素抗性基因可供转化子的选择记号。 具有较高拷贝数，经过氯霉素扩增后，每个细胞中可累积1000-3000个拷贝，为重组体DNA的制备提供了极大方便。增长型发展策略与集团公司手机上网意见PPT培训课件关于大数据时代的大数据产品解
