尿液自动化分析(5)1

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1、第七节尿液分析尿液分析仪检验仪检验检验医学教研室1自动尿液分析系统尿液干化学分析仪 尿沉渣分析仪计算机联控分析报告2尿液检验流程3尿液自动化分析4第一节 尿液干化学分析仪目前临床广泛使用尿干化学分析系统，将 检测尿液各种成分的试剂附着在纸（或胶片） 上做成试纸（或干片），采用反射光原理检测 试剂颜色变化 。具有操作简便、效率高，100 -360份样本/h作为尿液的过筛检查。5尿液干化学分析的发展尿液干化学分析的发展n1956年：美国人Ames和Lilly发明了尿糖干化学试带n1957年：利用“蛋白质误差”的原理推出尿蛋白检测试带，n1958年：推出尿糖、尿蛋白二联试带n1959年：推出尿糖、尿

2、蛋白、尿pH三联试带n20世纪70年代：第一台干化学分析仪问世现代尿液分析自动化的标志n试带逐步发展到多项，八联、十联、十一联、十二联n从目测发展到自动化仪器检测，由半自动化到全自动化国产试剂代替进口试剂。6一、尿干化学分析仪分类n按自动化程度分1.半自动尿液分析仪：2.全自动尿液分析仪：n按检测项目分8项：pH、PRO、GLU、KET、BIL、URO、BLD、NIT 10项：8项 + LEU、SG 11项：10项 + VitC 12项：10项 + 颜色、透明度7各种尿干化学分析仪8尿干化学试带种类n单项试纸：PRO、GLU、BLD、BIL等n多联试纸：3A、8A、10A、11A、12A等。9

3、二、尿干化学分析仪与试带的基本结构（一）尿干化学分析仪基本结构1.机械系统：将试带传送到检测区，检测后再将试带送到废物盒。半自动尿仪:支架式、传送带式全自动尿仪：浸入式加样、点式加样2.光学系统：光源、单色光处理、光电转换（CCD技术） 3.电路及计算机系统：光电转换系统、I/V转换系统、CPU、显示器、面板。10二、干化学尿液分析仪的原理和特点种类较多，目前国产尿仪质量也很稳定。【原理】光学系统采用球面积分仪、双波长反射式光度计， 整个光学系统在试纸条表面上移动，逐次测量试纸面上 反射光与参比光的比例。三个光电管和特定波长滤光片 ，分别进行测量。参比光为深红色滤光片（720nm）；测量光电管

4、中加有 绿色滤光片（550nm）对NIT、KET、BIL、URO进行测量； 另一个加红色滤光片（620nm），对PH、GLU、PRO、BLD 进行测量。经电荷耦合（CCD）技术进行光电转换，再经 数字模拟转换，用微电脑进行处理后输出（显示屏、打 印机、外接电脑等）。 11尿液自动分析仪结构图CPU12(二)试带的结构塑料基质载体吸水层试剂层2（碘酸盐层）尼龙保护膜透明膜试剂层1试带的多层膜结构 13尿试带的多层膜结构（1）过滤层：尼龙膜，起保护作用，防止大分子物质对反应的影响 （2）反应层：绒制品，包括过碘酸盐区（有的无此区）和试剂区，过碘酸盐区可破坏VitC的干扰；试剂区含有试剂成分主要与所

5、测物质发生反应，产生颜色反应 （3）吸水区：可使尿液均匀快速深入，并能抑制尿液流到相邻反应区。 （4）支持层：不被尿液浸润的塑料片做支持层。空白块：用于消除尿自身颜色在试剂块上产生颜色的干扰。14三、尿干化学分析仪原理与试带反应原理（一）检测原理试带上试剂块分别与尿中相应的成分发生化学反应并呈现不 同的颜色，颜色深浅与尿液中相应成分含量成正比。空白快作 为“补偿区”。试带上的模块被双波长（参考波长720nm、测定波长 620nm/550nm）光照射， 色块颜色越深，吸收光亮越大，反射光亮越小，反射反射率越小 色块颜色越浅，吸收光亮越小，反射光亮越大，反射反射率越大检测试块反射率、空白反射率、总

6、反射率计算R试剂=Tm/Ts R空白=Cm/Cs R总=TmCs/(Ts Cm）R:反射率；T:试块; C:空白块；m:测量波长反射强度；s:参考波长反射强度 15（二）尿试纸法的项目和反应原理项 目 代号 反应原理 试剂主要成分酸碱度 pH pH指示剂 甲基红、溴麝香草酚蓝蛋白质 PRO 指示剂的蛋白质误差法 溴酚蓝、枸橼酸钠、表面活性剂葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶 葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、色原受体隐血 BLD Hb类过氧化酶法 过氧化氢茴香素或过氧化氢枯烯、色原受体胆红素 BIL 偶氮反应法 2, 4-二氯苯胺重氮盐尿胆原 URO 醛反应法 对二甲氨基苯甲醛或对甲氧基苯重四氟化硼酮体 K

7、ET 亚硝基铁氰化钠法 亚硝基铁氰化钠亚硝酸盐 NIT 亚硝酸盐还原法 氨基苯砷酸、1,2,3,4-四氢并喹啉-3酚白细胞 LEU 酯酶法 吲哚酚酯、重氮盐比密 SG 多聚电解质离子解离法 甲氧乙烯顺丁烯二酸、溴麝香草酚蓝抗坏血酸 VitC 吲哚酚法 2,6-二氯酚靛酚钠 16(二)试带使用注意事项1. 严格按操作说明书要求进行操作； 2. 试带要在有效期内使用； 3. 试带从冷藏变成室温前不要打开瓶盖，用后盖 紧瓶盖；开过盖的试带瓶不建议放在冷藏温度， 可放阴凉、干燥、避光处。 4.禁止用手触摸试剂区， 5. 不同厂家的同类试纸，其原理、方法、结果 不相同，不可混用。17尿干化学方法学评价n

8、优点：具有操作简便、检测快速、同时获得多项结果n缺点：影响因素多，必须结合尿理学检查、显微镜检查，互相验证、综合分析 目前国内采用方法：干化学法LEU、BLD、PRO、NIT四项皆（-），可不镜检。其中任一项出现异常时，则必须镜检。 注意事项：以尿沉渣作为诊断依据或观察疗效时，不宜用干化学过筛尿外观与尿沉渣有关，当尿外观异常时，应注意镜检干化学干扰因素多，且有一定的假（-），因此无论干化学结果如 何，必要时需做镜检有泌尿系统疾病，不宜用干化学过筛，应全部进行镜检。18(三) 试纸分析的假阳性和假阴性1. 尿中含高浓度VC,可使试纸法葡萄糖和隐血结果呈假(一);2. 尿蛋白试纸是利用PH指示剂的

9、蛋白质误差原理,白蛋白的反应性最强,球蛋白的反应性弱,一些高分子化学物(如聚乙烯吡咯酮)可产生假(+);3. 某些药物（如氯丙嗪、酚噻嗪、吩嗪类药物）可使尿BIL、URO等呈假（+）；4. 尿PH超过8.0以上，PRO呈假(+)；19尿试纸法产生假（+）、假（-）的常见原因项目假（+）假（-） pH尿液久置，使结果升高浸入尿中时间过长，使结果偏低 SG高蛋白质、酸性尿使结果偏高碱性尿使结果偏低PRO尿pH8.0、氯乙烯、磷酸盐、季胺 类消毒剂大量青霉素尿、庆大霉素尿、 pH8.0GLU强氧化剂次氯酸钠、过氧化物VitC500mg/L KET肌酐、酞、苯丙酸试剂带潮解、标本防止时间过长 BIL大

10、量氯丙嗪、盐酸苯偶氮吡啶VitC500mg/L、亚硝酸盐、光照 URO胆色素原、吲哚、吩噻嗪类、Vit K亚硝酸盐、光照 BLDMb、菌尿、氧化剂、不耐热的触酶PRO、GLU、 VitC100mg/LNIT陈旧尿、亚硝酸盐及偶氮剂污染、含 硝酸盐丰富的食物 VitC、尿量过多、食物含硝酸盐过低、尿于膀胱 中储存4h，不含硝酸盐还原酶的细菌感染LEU甲醛、氧化剂、高浓度BILPRO、GLU、 VitC、大量庆大霉素、呋喃妥因VitC硫代硫酸钠、内源性酚碱性尿20三、 干化学分析仪的局限性1. 试剂条的因素2. 尿本身的因素：如标本采集不不合格等3. 操作原因：如仪器的校准、维护、环境温度。4.

11、皆为定性分析，只能做过筛试验。其次是不能检测尿有形成分，因而不能代替尿沉渣检查。21第二节 尿沉渣分析仪尿沉渣分析仪是用显微镜或专用设备对尿液有形成分检查的仪器，摆脱了繁琐和费时的操作程序，做到尿沉渣分析的标准化、自动化。目前使用的尿沉渣分析仪，主要有：图像识别法、流式细胞仪法，以及尿液分析工作站等几种类型。22运用流式细胞术及特殊荧光染色的原理，将尿标本染色后进入鞘液流动池时，每个有形成分单个纵列通过流动池中心轴线，每个粒子均被氩激光光束照射，并各自发出不同的荧光强度(信号)。信号表达为3类：即前向散射光、荧光和电阻抗。（一）流式细胞式尿沉渣分析仪23流式细胞式尿沉渣分析仪原理激光束 (=4

12、88m)荧光强度fl：前向散射光强度：细胞大小RND、DNA强度 前向散射光脉冲宽度 ： 细胞长度荧光脉冲宽度(F1w)： 细胞染色质长度电阻抗： 反映细胞体积24流式细胞式尿沉渣分析仪原理n 前向散射光强度(Fsc)：细胞大小前向散射光脉冲宽度(Fscw)：细胞长度n荧光信号 荧光强度(Fl)：细胞染色质(DNA/RNA)的强度荧光脉冲宽度(Flw)：细胞染色质长度n电阻抗：反映细胞体积前向散射光信号25仪器将这种荧光，散射光和电阻抗的信号转变为电信号，综合分析这些电信号，得出细胞大小、长度、染色强度和染色部分长度以及细胞的体积资料，并给出每类细胞的散射图和直方图，并计算出每微升尿中各种细胞

13、的数量进行报告。26SYSMEX UF-100 尿沉渣分析仪27UF-100尿沉渣分析系统原理28UF-100尿沉渣分析系统散点图29UF-100尿沉渣分析系统散点图30流式细胞术尿沉渣分析仪检测n需采集尿液标本约 9mln最少需尿标本 4ml，n实际吸样量 0.8ml，n检测尿标本量 9l,n相当于显微镜检测尿沉渣 50个高倍视野，n每小时检测 100个样本，n检测总粒子数 0-40000个。31流式细胞术尿沉渣分析仪检测参数n红细胞(RBC) 均一性红细胞（Isomorphic RBC）%非均一性红细胞（Dysmorphic RBC）%非溶血性红细胞数量（Non-Lysed RBC#）非溶

14、血性红细胞百分比（Non-Lysed RBC%）n白细胞（WBC）n上皮细胞（EC）、小圆上皮（SRC）n管型（CAST）,病理管型（Path.CAST）n细菌（BACT）n酵母细胞（YLC）n精子细胞（SPERM）n结晶（XTAL）n尿液电导率（conductivity） 32尿沉渣分析仪检测参数参考范围nRBC：男性010/L；女性024/LnWBC：男性010/L；女性026/LnEC： 015/LnCAST： 02/LnBACT： 08 000/ LnConductivity： 1325 ms/ cm33UF-100尿沉渣分析仪检测窗口34治疗前后散点图对比35病 例n张某，男，39岁，急性肾小球肾炎。图示该患者尿液标本UF- 100分析仪测试结果。n尿干化学分析结果： SG： 1.025 KET： neg NIT： neg LEU：25/l BIL： neg GLU： norm PRO：5.0g/L pH： 7.0 UBG： norm ERY：250 /l n镜检结果： WBC：5-10/HP RBC：满视野/HP EC