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1、 纸片法药敏试验一、目的要求1、 通过本次实验，了解药敏试验在实际生产中的意义。2 、掌握药敏试验的基本原理。3、掌握纸片法药敏试验的操作程序和结果判定方法。二、原理药敏片上含有的抗菌药物向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，在药敏片周围形成抑菌圈，依据抑菌圈的大小确定药物抗菌能力强弱。三、在生产中的应用 检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最 有效药物，用于临床治疗，对控制细菌传 染病的流行至关重要。 四、实验材料 1、菌种 ： 葡萄球菌，培养1618h的幼龄 菌液；大肠杆菌，培养1618h的幼龄菌液 。 2、药敏片：阿莫西林、氟苯尼考、丁胺卡 那、氧氟沙星。 3、器
2、材： 生化培养箱、 灭菌营养琼脂培 养基、水浴锅、灭菌平皿、 镊子、记号笔 、灭菌棉拭子、酒精灯、直尺。抗菌药物纸片的制备 1、打纸片并灭菌 将优质的滤纸用打孔机 打成直径6mm的圆片，每100片放入一小 瓶内，150干热灭菌1小时，或用高压灭 菌（121 ，20min）后在60条件下烘 干。 2、配制抗菌药液 抗菌药物的浓度 可参考以下标准青霉素200IU/ml 其它抗菌素1mg/ml磺胺类药物10mg/ml 中草药制剂1g/ml 抗菌药物纸片的制备 3、用抗菌药物溶液浸泡纸片 吸取抗菌药 物溶液1ml，加入100片纸片中，置冰箱内 浸泡12小时。 4、烘干药片 如立即试验可不烘干，若保 存
3、备用，可用下法烘干:将浸有抗菌药液的 纸片摊平在培养皿中，于37温箱内保持 23小时即可干燥。 5、保存 将制好的各种药物纸片装在无菌 小瓶中，置冰箱内保存备用 五、实验方法步骤 1、制备琼脂平板 首先将灭菌的营养琼脂培养基 溶化，然后倒入灭菌培养基内，厚度为34mm。 2、涂菌液 用无菌1ml注射器吸取培养1018小 时的幼龄菌液0.1ml，注入琼脂平板或鲜血琼脂平 板表面，用灭菌的L形涂布棒涂抹均匀。 3、贴药敏片 用灭菌镊子夹取药敏片，分别贴到 上述培养基表面，并用镊子轻按下纸片。两个纸 片间距大于30mm，纸片离培养基边沿大于 20mm。操 作 方 法五、实验方法步骤 4、标记 每贴一
4、个纸片后，用记号笔在平板底上 做标记；在平板盖上标记菌种名称。 5、培养 将平板底部向上，倒置于37恒温温 箱中，培养18小时后观察结果。 6、结果判定在药敏片周围出现一个无菌生长的圆圈，称为抑菌 圈。用直尺或游标卡尺量取抑菌圈直径。结果判定 青霉素的敏感标准 ：抑菌圈直径小于 10mm 耐药 ， 1020mm中度敏感 ， 大于 20mm敏感。 其它抗菌素及磺胺药的敏感标准 ：抑菌圈 直径小于10mm 耐药 ， 1115mm中度敏 感 ， 大于15mm敏感。 中药的敏感标准 ：抑菌圈直径小于15mm 耐药 ， 15mm中度敏感 ， 1520mm敏感 。结结 果果 分分 析析抑菌圈六、注意事项 1、应在无菌条件下操作，实验完毕后及时 灭菌处理，防止散毒。 2、营养琼脂平板的厚度，太厚，抑菌圈变 小；太薄，水分蒸发，细菌不生长。 3、营养琼脂平板应完全凝固后再接种细菌 ，最好在4冰箱中放置一段时间。六、注意事项 4、细菌接种量 细菌接种量应恒定，如太 多，抑菌圈变小。 5、药敏片之间的间距及药敏片与平皿边沿 的距离。？思考题 药敏试验中为什么要用幼龄菌作试验？七、实验作业 1、写出纸片法药敏试验的操作方法及结果 的判定。 2、纸片法药敏试验操作过程中应注意哪些 问题？
