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1、湿热灭菌工艺的验证湿热灭菌工艺的验证 标准与方法标准与方法GMPGMP的新增内容的新增内容63条：任何灭菌工艺在投入使用前，都必须通过物 理检测手段验证其对产品的适用性及灭菌效果，即 每种被灭菌产品和物品的所有部位都达到了设定的 灭菌要求，必要时还应进行生物指示剂试验，作为 灭菌监控的补充手段。 64条：应对灭菌工艺的有效性定期进行再验证（每 年至少一次）。设备有重大变更后，应进行再验证 。应保存再验证的结果和记录。 65条：所有的待灭菌物品均须按规定的要求处理， 以获得良好的灭菌效果，灭菌工艺的设计应确保灭 菌完全。GMPGMP的新增内容的新增内容66条：应通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产
2、品 和物品的装载方式。 67条：应按供应商的要求保存和使用生物指示剂， 并通过阳性对照来确认其质量。使用生物指示剂时 ，应采取严格措施，防止由其所致的微生物污染。 68条：应有明确区分已灭菌产品和待灭菌产品的方 法。每一车（盘或其它装载设备）产品或物料均应 贴签，清晰地注明品名、批号并标明是否已经灭菌 。必要时，可用湿热灭菌指示带加以区分。 69条：每一个灭菌批次都应有灭菌记录。应把灭菌 记录作为该批产品放行的依据。GMPGMP的新增内容的新增内容热力灭菌 监测或记录的温度探头与用于控制的温度探头应分 开 每次灭菌均应记录灭菌过程的时间/温度曲线 应定期将独立的温度显示器的读数与灭菌过程中记
3、录获得的图谱对照。 应监测每种装载方式所需升温时间，且从所有被灭 菌产品或物品达到设定的灭菌温度后开始计算灭菌 时间。 应有措施防止已灭菌产品或物品在冷却过程中遭受 污染。 GMPGMP的新增内容的新增内容 湿热灭菌 参数应包括灭菌时间、温度或压力 应经常对腔室作检漏测试 被灭菌物品应用合适的材料适当包扎 直接接触产品的包装容器、灌装设备、胶塞及可能与 产品接触的工器具等的湿热灭菌应采用纯蒸汽 国际法规和标准国际法规和标准ISO 11135 ISO 17665 PDA No.1 技术文件Validation of Moist Heat Sterilization Processes: Cycl
4、e Design, Development Qualification and Ongoing Control Technical Report No. 1 (2007 Revision) British Standard BS EN 285:2008 Sterilization-Steam sterilizers-Large sterilizers EN 554 FDA CGMP（2004） EU CGMP（2008） 灭菌技术和验证指南日本 其它目的目的 获得有效合理的灭菌参数 证明湿热灭菌设备对被灭菌品的适用性 不同灭菌程序的可靠性和重现性术语术语 初始菌Bioburden 湿热灭菌介质
5、： 饱和蒸汽 空气-蒸汽混合气体 过热水等 D值/Z值 F值（F0值）术语术语 蒸汽的质量 干燥值（Dryness value ） 不冷凝气体（Noncondesable Gases ） 饱和蒸汽（Saturated Steam ） 过度杀灭程序（Overkill Approach） 预真空程序（Prevacuum Process） 蒸汽空气混合气体（Steam- Air Mixture）灭菌 过热水程序（Superheated Water Process） 无菌保证水平（Sterility Assurance Level, SAL） 灭菌法选择的基本原则灭菌法选择的基本原则灭菌法选择的基本原
6、则灭菌法选择的基本原则 过度杀灭法。 假设： N0106 D1211分钟 Z10 将数据代入公式，得L=1，再按计算，达到微生物 残存概率为一百万分之一所需的物理及生物杀灭力 如下： 物理杀灭力FPHY为12分钟， 生物杀灭力 FBIO D121（LogN0Log NF）12分钟灭菌法选择的基本原则灭菌法选择的基本原则 残存概率法 假设产品的生物负荷测试中： N0102 D1211分钟 Z10 经灭菌后，微生物残存概率NF小于10-6 利用上面的数值，可以计算出微生物残存概率小于 10-6所需的FPHY和FBIO如下： F0FPHYFBIOD121（LogN0Log NF）8分 钟灭菌法选择的
7、基本原则灭菌法选择的基本原则 装载类型的界定 考虑到装载的特性及特定装载的方式。例如，多孔/ 固体物品通常包括但不局限于以下物品： 过滤器（薄膜式过滤器、筒式过滤器、预过滤器等） 胶塞和其它聚合物密封件 管道和软管 工作服、口罩 清洁用具 设备更换部件，如药液灌装 液体装载通常包括但不局限于以下物品： 已灌装入最终容器（如小瓶、软包装、玻瓶或安瓿）的产 品（溶液、混悬剂或乳剂） 已检验或加工后剩下的可能含有致病菌的废液。WHO Sterilization by moist heatWHO Sterilization by moist heat6.4 Sterilization by moist
8、 heat is suitable only for water-wettable materials and aqueous formulations. . The temperature recorder should normally be independent of the controller, and there should be an independent temperature indicator, the reading from which should be routinely checked against the chart recorder during th
9、e sterilization period. For sterilizers fitted with a drain at the bottom of the chamber, it may also be necessary to record the temperature at this position throughout the sterilization period. There should be regular leak tests on the chamber when a vacuum phase is part of the cycle.6.4 湿热灭菌法仅适用于水
10、浸 润性材料或水溶液。程序控 制系统应独立于温度记录仪表 ，并配置独立的温度显示器。 灭菌过程中，温度显示器的读 数应与灭菌曲线记录对照。 腔室底部装有排水口的灭菌柜 ，有必要测定并记录该点在灭 菌全过程中的温度数据。如灭 菌程序中含抽真空，则应定期 对腔室进行检漏试验。WHO Sterilization by moist heatWHO Sterilization by moist heat6.5 The items to be sterilized, other than products in sealed containers, should be wrapped in a mater
11、ial that allows the removal of air and the penetration of steam but prevents recontamination after sterilization. All parts of the load should be in contact with water or saturated steam at the required temperature for the required time.6.5 如被灭菌品不是最终灭菌 产品，则应使用合适的材料 将其适当包扎，所用材料及 包扎方式应利于排除空气， 有利于蒸汽穿透并
12、能防止灭 菌后的二次污染。在规定的 灭菌温度和灭菌时间内，所 有被灭菌品应与水或饱和蒸 汽相接触.蒸汽的潜热为540卡/克，有空 气处灭菌效果差，脉动真空水 喷淋等就是要解决潜热问题几种常用的湿热灭菌法几种常用的湿热灭菌法 液体注射剂产品的灭菌 空气蒸汽混合物（SAM） 过热水喷淋法 重力置换法（不推荐）下排式蒸汽灭菌柜（重力置换法）下排式蒸汽灭菌柜 工作原理图1、蒸汽进入2、高温度蒸汽比重 小，在上部3、蒸汽不断进入4、冷凝水及低温度 空气在底部被挤走Gravity Displacement AutoclaveAt equal temperature and pressure, air is
13、 in fact on the average 1.5 times denser than steam.过热水喷淋灭菌柜过热水喷淋灭菌柜- -外形外形热交换器由不锈钢制造、卫生级、双功能（加热及冷却），有效，安全。湍流、速 度、液体循环交换（蒸汽和冷却水）自动实现热交换器内部的清洁。控 制 柜卫生离心泵：保持水的高速循环，这对实现温度的均一性至关重要。CA除菌 过滤器过热水喷淋过热水喷淋/ /温度温度- -压力曲线压力曲线Temperature/Pressure Chart Hot Water Shower ProcessTemperature (C)Pressure (bar)Time (m
14、in)02040601208010000.51.01.52.02.5140 120100806040200排气 FoHot water spray sterilizer 本图为旋转式喷淋灭菌柜 水喷淋-高效热交换，程序短 可用于乳剂、氨基酸等 配外部双管板热交换器 过程：进PW蒸汽加热循环 水 在过压保护条件下 水 喷淋产品 达到灭菌温度-保 温冷却平衡压力-出料 转速：1-5转/分 产品温差可控 -0.07MPa 进蒸汽： 运行3次121保温至 设定的时间 排气抽真空干燥 约15分钟至设定的 灭菌温度进过滤气体 平衡压力程序结束脉动真空蒸汽灭菌程序脉动真空蒸汽灭菌程序温度 脉动真空：抽真空-
15、进蒸汽-抽真空-进蒸汽预真空升温保温干燥降温排气结束123真空Steam-Pulsing Sterilizers100121灭菌工艺的验证及其验证文件灭菌工艺的验证及其验证文件 DQ 在选用蒸汽灭菌器时，首先应根据产品的工艺来考虑蒸汽灭 菌器的选型，主要是装量的大小、灭菌温度与时间的可控制 性、灭菌程序的可选择性、灭菌时腔室内温度的一致性、升 温与降温速率的稳定性、控制及记录系统的可靠性等。 首先对所选灭菌器进行确认（IQ/OQ） 例如： 空气过滤器的泄漏测试 容积、真空度、压力以及泄漏率测试 如有夹层，必须消除运行风险 蒸汽质量测试 传感器的测试 验证设备的校准 其他灭菌工艺的验证及其验证文件灭菌工艺的验证及其验证文件 PQ 空载热分布试验 满载热分布试验 热穿透和生物挑战试验 升温、降温速度对生产工艺、产品的影响； 喷淋冷却速度对被灭菌产品的影响；冷却用水是否 能有效地控制微生物 温度测量系统（包含灭菌器的温度传感器和验证用 多点温度测试仪）是否提供每一个测点的打印数据 ；温度测量系统是否都进行校准；温度测量系统的 校准是否符合相关法规和标准的规定灭菌工艺的验证及其验证文件灭菌工艺的验证及其验证文件 PQ 生物指示剂的使用 对过度杀灭的风险分析及管理； 灭菌后的干燥程序对灭菌效果的影响 研究产品耐受性变更导致的灭菌工艺变化 总体评价并指导最佳灭
