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1、荧光分析法简 述化学四班 苏世烟 03081124在我的的在分析课本中提到分子光谱法有 吸光光度法 荧光法 拉曼光谱法某些物质经紫外线照射后，能立即放 出能量较低（亦即波长较长）的光。 当照射停止后，如化合物的发射在 10-9秒钟内停止，则称荧光 超过此限度即称为磷光。 荧光的波长与被照射物质有 关。以紫外线作激发光源， 所发射的荧光常在可见光区 。 测量荧光强度以确定物质含量的方 法叫做荧光分析法， 所使用的仪器叫荧光计 一.原理 设IF为荧光强度； I0入射紫外线强度； It为透过溶液后紫外线强度； Ia为溶液吸收紫外线； C为溶液中被测物质的浓度； l为溶液层的厚度。 被溶液吸收的紫外线
2、强度为： Ia=I0-It据朗伯-比尔定律代入上式得：经数学推导，当浓 度很小时：荧光强度IF与物质吸收紫外线的 强度成正比 当紫外线的强度一定，溶液的厚度一定， 对同一物质而言 2.3 KI0l为常数，以A表 示,故:IF=AC这说明浓度与荧光强度成正比，这 就是荧光定量分析的理论基础。所以只要测出样品溶液的荧光 强度和标准溶液的荧光强度， 就可按正比关系计算样品溶液 的浓度。 CX为样品溶液浓度 CS为标准溶液浓度 IFX为样品溶液荧光 强度； IFS为标准溶液荧光 强度 二荧光计 荧光分析中有两种光线：紫外线和 荧光,故: 在比色计中光源、比色杯和光电源 三者排列成一条直线 在荧光计中三
3、者需排成三角形，通 常呈直角三角形，如下图所示 两种装置的不同(1)比色计中光源是普通的钨丝灯荧光计中的光源则必须是产生紫外 线的汞灯，常用的是高压汞灯， 它发射的是线状光谱； 能透过汞灯玻璃套管的主要射线波 长是365钠米 两种装置的不同(2)比色计中只有一种光源，只需要一个滤光板 荧光计中有两种辐射、三个滤光板:滤光板1用于过滤紫外线，除去其中可见 光滤光板2用于过滤荧光，以去除其他颜色 的杂光；滤光板3可滤去荧光中夹杂的紫外线 三，荧光分析的操作1.标准曲线法先配制一第列浓度由大到小的标 准管C1，C2、C3、C1 为浓度最大的标准管作为起始浓度，置荧光计透光率 为100，调节光栅使检流
4、计指零然后再测一系列浓度较低的标准管 的透光率，以浓度对透光率作标准 曲线。标准曲线的另一作法是以空白溶液 为起始浓度，置荧光计透光率于10 或20处，调节光栅使检流计指零， 然后再测一系列浓度较高的标准管 的透光率，作出标准曲线。2.比较法先配一标准溶液，其浓度应略大 于样品溶液;浓度越接近，误差越 小以此标准溶液为准，调节透光率 在2060之间的某一数值上然后测定样品溶液及空白溶液的 透光率。 由下式求得:C标准透光率为60 C样品的透光率为X 空白溶液的透光率为Y 四.荧光分析的注意事项1.荧光的减退荧光物质经紫外线长时间照射及空气 的氧化作用，会使荧光逐渐减退. 2.试剂的浓度有些试剂
5、能吸收紫外线，有颜色的试 剂还有吸收荧光的作用，因此分析时 所加试剂的量不可太多。3.pH的影响大多数荧光反应都受溶液酸碱度的 影响，故荧光分析需在适合的酸碱 度溶液中进行。最适当的酸碱度必 须由实验来确定。所用酸的种类也 影响荧光的强度，例如，奎宁在硫 酸溶液中的荧光较在盐酸中的要强 些。4.溶剂许多有机物及金属的有机络合物 ，在乙醇溶液中的荧光比在水溶液 中强。乙醇、甘油、丙酮、氯仿及 苯都是常用的溶剂。荧光分析所用 的有机试剂，在有机溶剂中大多有 荧光，应设法避免；一般避免的办 法是稀释，或加入一部分水。5.盐类的影响能与试剂发生反应的其他金属盐类都 应事先除去。碱金属与铵盐虽不参与 反
6、应，但量太大亦有妨碍；强氧化剂 、还原剂及络合剂均不应存在于溶液 中。6.荧光强度达到最高点所需要的时间不 同有的反应加入试剂后荧光强度立即达 到最高峰有的反应需要经过1530分钟才能达到 最高峰7.有机溶剂中常有产生荧光的杂质， 可用蒸馏法提纯。橡皮塞、软木塞 及滤纸中也常有能溶于溶剂的一些 带荧光的物质。 六.总结荧光分析法灵敏度高，仪器设备相对简单，休积小，操作较简便反应时间也较快 20世纪90年代曾有两位瑞 士化学家提出一个叫-TAS 的概念-TAS 就是把整个实验室的功能，包括 采样、稀释、加试剂、反应、分离、 检测等集成到尽可能小的操作平台上 。 -TAS 的进样量只有纳升级(10-6L) 甚至皮升级(10-12L)。 当然这就要求检测反应有高的灵敏度。 而荧光法是目前公认的最灵敏的检测方 法之一,它正适应分析设备微型化、集 成化、与便携化的发展趋势。 但是它也有一些先天的不足限制了它的 应用，那就是只有少数化合物能发射 荧光。这就要靠这座的各位精英们以 后多多努力了 革命尚未成功，同志仍需努力啊！ ！ 参考文献: 中国医学科学院卫生研究所 编 彭崇慧 冯建章 张锡瑜 李克安 赵凤林 中国化学会 中国科学院院箕应用化学研究所主 办
