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1、ABO血型鉴定 不规则抗体筛选n玻片法（正定型）n试管法（正定型,反 定型） n盐水法n聚凝胺法n抗人球法 ABO血型鉴定实验原理n抗原抗体反应在ABO血型系统中，红细 胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分 抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗 原加抗B抗体，则产生凝集现象从而测知受 试者红细胞膜上有无A或/和B抗原判断血型n抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭 桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图IgM抗体凝集红细胞示意图IgM抗体凝集红细胞示意图IgGM在盐水介质中产生凝集试剂 n抗A、抗B试剂血清n5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液n受检者血清n5%的受检者红细胞悬液 (从
2、指尖或耳垂取血 一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀 ，即得约5红细胞悬液。采血时应注意先用 75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者 红细胞（约0.20.5 ml）用生理盐水洗涤3次 ，然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。)四 实验步骤.swfn 1. 玻片法n（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两 端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。n（2） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血 清上，注意勿使滴管与血清相接触。n（3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型标准血清和红细胞悬液n（4）观察结果。如有凝集反应可见到呈红色
3、点状或小片状凝 集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在 低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。n（5） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝 集，判断其血型。 2.试管法(正定型)n A B nA标准血清 2滴nB标准血清 2滴n受试者的红细胞悬液 1滴 1滴n混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。n取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块 ，管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完 全不凝的试管，血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐 ，用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升， 随即成为均匀的悬液;轻微凝集的，必须将液体
4、转到 载玻片上镜检后判定凝集程度。 试管法(反定型)n Ac Bc Oc n受检者血清 2滴 2滴 2 滴 n5%的A型红细胞悬液 1滴n5%的B型红细胞悬液 1滴n5%的O型红细胞悬液 1 滴n立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。n轻轻扣动试管底部，观察结果-同前血型判定swf正定型反定型 结结果 抗A 抗BA型RBC B型RBC O型RBC- -+ + - O + - + - A- + + - - B+ +- - - AB五 注意事项n玻片、试管都要标记！， A及B标准血清绝对不能相混,不 要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！n所用玻片、试管实验前必须清
5、洗干净，以免出现假凝集现象。n红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一 侧就不能去接触另一侧。n一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清 。n离心时间、速度严格要求，以防假阳 性或假阴性结果。n试验用血清和试剂红细胞都应标准化。n要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应 注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录 观察结果。正反定型结果不一致的常 见原因有哪些？n（）人为因素：试剂不标准、失效或污 染；操作中加错样本或试剂、离心速度不 足或过度、细胞与血清比例不当、结果判断 错误等。n（）客观因素：因某些疾病导致抗原减 弱如：白血病，M
6、DS（骨髓增生异常综合征 ）患者血型抗原减弱导致误定血型。受检 者抗体效价低（如婴幼儿、老年人、大量输 液的患者，血浆蛋白低下等）某些药物干 扰如输注右旋糖酐后会干扰血型检定。为什么这次试验没有安排玻片法 的反定型？n因为存在于病人或献血者血清中的 抗及抗，个体差异很大，如果效价 较弱，在玻片上不足以凝集大量抗原阳 性的红细胞，造成假阴牲的结果所以采 用玻片法作反定型的结果常不可靠。而 用试管离心法作反定型，则促进抗原抗 体反应，形成肉眼可见的凝块，使结果 更为可靠 二 实验原理n 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。 在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B 两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体 。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型 血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有 抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知 受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO 血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原 而分为A、B、AB、O四型。 见下表谢谢
