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1、医学细胞生物学实验徐志浩 遗传遗传 与基因工程教研室 院系楼西侧侧一楼 2016年1.掌握细胞冻存与复苏的原理。2.熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。3.掌握细胞计数的一般方法。医学细胞生物学实验实验目的细胞冻存的必要性冻存温度冻存操作对细胞的损伤：冰晶损伤、溶液损伤冻存保护剂冻存复苏的原则：慢冻速融实验原理1、细胞冻存医学细胞生物学实验1ml鸡血+1ml生理盐水1500rpm离心5min(配平)弃上清加2ml冻存液混匀 (空气吹打法) 分装至1ml的冻存管标记液氮罐口（-60-70 ）10min 液氮中冻存10min （-196 ）。 无菌操作; 保护剂； 细胞浓度； 梯度降温（慢冻）； 防止
2、冻伤； 防爆； 冻存管做好标记。2、细胞复苏与计数医学细胞生物学实验取出冻存管 37水浴1min融化转入离心管加至5ml培养液混匀 1500rpm离心5min弃上清加1ml培养液混匀取0.5ml 加入等体积台盼蓝染色1min 计数 计算细胞活力和细胞浓度。如何区别死细胞和活细胞？细胞活力（率）：活细胞所占的比率。3、细胞计数板的使用医学细胞生物学实验 计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计数方法。 使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。 先盖盖玻片，再滴细胞悬液。 压线细胞：计上不计下、计左不计右。 计数方向：按一定顺序。1mm1mm0.1mm0.1mm310-4ml7.5cm3.5cm医学细胞生物学实验细胞活力(率)=四大格活细胞数 100%四大格总细胞数细胞浓度(个/ml)=四大格总细胞数 104 N(稀释倍数)4 冻存复苏操作。 染色时间。 计数时间。复苏细胞活力影响因素作业1. 列出细胞冻存与复苏的主要操作步骤。2. 计算细胞浓度和细胞活力，并分析影响细胞活力的原因。医学细胞生物学实验
