食品中志贺氏菌的检验

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1、食品中志贺氏菌的检验GB/T 4789.5-2003 志贺氏菌属是无鞭毛、无芽孢的革兰氏阴 性杆菌,可引起细菌性痢疾,是一种常见 的肠道传染病菌 志贺氏菌在食品中的存活时间较短,在检 验时无理想的增菌方法 (一)、设备:培养皿 9cm 均质机 接种针、接种环 显微镜 培养箱(二)、培养基与试剂 GN培养基 HE琼脂平板 SS琼脂培养基 三糖铁琼脂 麦康凯琼脂 氰化钾培养基 氨基酸脱羧酶试验培养基 伊红美兰琼脂(EMB) 半固体管 葡萄糖铵琼脂 尿素琼脂 西蒙氏柠檬酸盐琼脂 糖发酵管 乳糖发酵管 蛋白胨水、靛基质试剂 志贺氏菌属诊断血清(三)操作步骤 1、增菌 以无菌操作取检样25克(毫升),加

2、入装有225毫升GN增菌液的广口瓶内, 固体食品用均质器以8000r/min10000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨 碎,粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化,于36培养6h8h。培养时 间视细菌生长情况而定,当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 2、分离和初步生化试验 (1)取增菌液1环,划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个;另取一环 划线接种于麦康凯琼脂或伊红美蓝琼脂平板一个,于36培养18h24h,志 贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。 (2)挑取平板上的可疑菌落,接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。一般 应多挑几个菌落,以防遗漏,经36培养18h24h,

3、分别观察结果。 (3)下述培养物可以弃去: a)在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物; b)在18h24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物; c)不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物; d)产气的培养物; e)有动力的培养物; f)产生硫化氢的培养物。 (4)凡是乳糖、蔗糖不发酵,葡萄糖产酸不产气 (福氏志贺氏菌6型可产生少量气体),无动力的 菌株,可以做血清学分型和进一步的生化试验。 即:凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者(斜 面产碱或不变色,底层产酸,H2S(-),产气(- ),但福氏6型产生少量气体)、无动力;在半固 体管内沿穿刺线生长的菌株,疑是志贺氏菌,可 做血清凝集试验和进一步的生化试验。

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