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1、第三章 经典液相色谱法 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称。 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀常压下输送流动相常压下输送流动相柱效较低柱效较低 分析周期长分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀高压下输送流动相高压下输送流动相柱效较高柱效较高分析周期短分析周期短一、液-固吸附色谱（一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）吸附剂和流动相的选择（一）分离原理各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质1. 硅胶 2. 氧化铝3. 聚
2、酰胺1. 硅胶（SiO2H2O）结构：内部硅氧交联结构多孔结构表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心特性：1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键物质极性，吸附能力强极性吸附中心，不易洗脱吸附活性次序：活泼型束缚型游离型2）吸水失活105110OC烘干30分钟(可逆失水)吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)活性丧失，无吸附力适用适用：分析酸性或中性物质 续前2. 氧化铝碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质3. 聚酰胺氢键作用氢键能力强，组分越后出柱 （三）吸附剂和流动相的选择：依据被测组分、吸
3、附剂和流动相的性质1. 被测组分性质（极性大小）： 烃 - - - - - - - - 羧酸，醇 2. 吸附剂的活性：吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能力强强极性物质选择弱吸附剂弱极性物质选择强吸附剂 3. 流动相的极性：流动相极性大，对被测组分的洗脱能力大“相似相溶”原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性 ，选择适当极性的流动相续前4. 三者关系图示：组分 吸附剂 流动相极性 活性小 极性非(弱)极性 活性大 非极性或 弱极性二、薄层色谱法（一）概述 （二）定性参数 （三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备 （六）定性与定量分析（一）概述1定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板
4、上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2操作过程：见图示 铺板 活化 点样 展开 定位(定性)/洗脱(定量 ) 3分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻 ） 4特点：分析快速、灵敏、显色方便 5应用：药物杂质检查、纯度测定 next图示图示L0L1L2（二）定性参数1. 比移值Rf续前讨论Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱 基本定性参数，说明组分的色谱保留行为续前1）K大，Rf小2）薄层板一定，对于极性组分展开剂极性大，Rf大（容易洗脱）展开剂极性小，Rf小 （不容易洗脱）3）Rf范围：0 Rf 1（组分迁移速度和
5、距离小于展开剂迁移速度和距离）Rf = 0.20.8（常用）0.30.5（最佳）续前 2. 相对比移值Rs 讨论参考物与被测组分在完全相同条件下展开可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关， 范围可以大于或小于1（三）吸附剂的选择根据被测物极性和吸附剂的吸附能力被测物极性强弱极性吸附剂被测物极性弱强极性吸附剂（四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择）根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性（五）薄层板的制备定性分析窄条 定量分析1020cm （六）定性与定量分析定性分析日光，紫外光，显色定量分析洗
6、脱法，薄层扫描法硅胶硅胶GG自含粘和剂自含粘和剂 硅胶硅胶HH不含粘和剂，铺板时另加入不含粘和剂，铺板时另加入CMCCMC 硅胶硅胶FH254FH254含荧光剂，含荧光剂，254nm254nm紫外光照发绿光紫外光照发绿光 硅胶硅胶FH365FH365含荧光剂，含荧光剂，365nm365nm紫外光照发光紫外光照发光四、纸色谱法将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、 定性、和定量的液-液分配色谱法固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：同液-液分配色谱定性参数：讨论讨论：R Rf f与组分性质、流动相及溶解度有关与组分性质、流动相及溶解度有关极性组分极性组分易保留易保留，R Rf f 小（流动相极性小（流动相极性 ， R Rf f ）非极性组分非极性组分易流出，易流出，R Rf f大（流动相极性大（流动相极性 ，R Rf f ）
