实验五 血红蛋白含量的测定、血型鉴定

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1、实验五 血红蛋白含量的测定、血 型鉴定实验目的l掌握血红蛋白的测定方法；l学习鉴定血型的基本方法，观察红 细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定 的原理。测定血红蛋白的意义n人血红蛋白参考值 成年男性：13-15克/dl ；成年女性：11-14克 /dl ；儿童：（依年龄而异）12-14克/dl。n临床意义：大致与红细胞增减相似。高原地区居民的血红蛋白浓度一 般比平原居民为高，这是机体对低气压环境的一种适应现象。一般来 说，在疾病状况下，血红蛋白的增减是与红细胞的改变相平行的，即 引起红细胞增多的疾病，也会使血红蛋白含量增加。使红细胞减少的 疾病，也使血红蛋白含量减少。在贫血时，血液中的红细胞数量和

2、血 红蛋白浓度都有不同程度的下降，但不一定按相同的比例变化。有时 红细胞数量可以减少很多，而血红蛋白的浓度的降低却相对地不那么 显著，见于大细胞性贫血，由于单个红细胞所含的血红蛋白量较正常 者为多。相反，也有的红细胞减少得不很多，而血红蛋白浓度却显著 降低，例如缺铁性贫血，这是由于每个红细胞的血红蛋白含量比正常 明显减少，故血红蛋白减低的程度较红细胞减少更为显著。 依据检验 结果，分析病因，做到准确的诊断和治疗都是很必要的。 基本原理 n血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋

3、白外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。n测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子为13.1g。 实验原理-血型鉴定n血型一般指红细胞的血型，是根据红细 胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于 红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的 ，这种抗原或凝集原是由遗传决定的。n抗体或凝集素存在于血清

4、中，与红细胞 的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶 解，由于这种现象，临床上在输血前必 须注意鉴定血型，以确保安全输血。ABO血型鉴定实验原理n抗原抗体反应在ABO血型系统中，红细 胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分 抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗 原加抗B抗体，则产生凝集现象从而测知受 试者红细胞膜上有无A或/和B抗原判断血型n抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭 桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图IgM抗体凝集红细胞示意图IgM抗体凝集红细胞示意图IgGM在盐水介质中产生凝集实验材料n血红蛋白计、0.1mol/L盐酸溶液；n载玻片、刺血针、牙签、一次性采血管 、A型和B

5、型标准血清、生理盐水、酒精 棉球等。方法与步骤-血红蛋白测定n于测定管内加入0.1mol/L盐酸溶液至百分刻度20处 。n取20l被检血液, 迅速将吸血管插入测定管底部盐 酸液中，缓慢挤出血液，再吸取上部清液，反复冲 洗吸血管23次，并混匀，静置10min。n沿着管壁加入蒸馏水，逐步稀释至与标准色柱色调 一致后，读取重量（或百分）刻度值报告结果。v 标准制换算：血红蛋白(g/L)=血红蛋白(g/dl)10方法与步骤-血红蛋白测定 n血红蛋白计包括标准比色架，架的两侧镶 有两个棕色标准玻璃色柱。血红蛋白稀释管，有方形 也有圆形的。两侧有刻度， 一侧以g为计数单位，对侧 以百分率计，按我国情况，

6、是以每100ml血液内含血红 蛋白14.5g为100%。20mm3 血红蛋白吸管，还有玻璃棒 、滴管。n用滴管加0.1mol/LHCl于血 红蛋白稀释管内，到刻度10 处。n用刺血针刺破指尖采血，血 滴宜大些。用血红蛋白吸管 的尖端接触血滴，吸血至刻 度20ul处（0.02ml）。 方法与步骤-血红蛋白测定 n用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红 蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入 并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的 血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置 10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。n把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中

7、，使无刻度 的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。n用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌）， 边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀 释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数 。n从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理 盐水的小试管内，混匀，即得约5红细 胞悬液。采血时应注意先用75酒精消 毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细胞 （约0.20.5 ml）用生理盐水洗涤3次， 然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。方法与步骤-血型鉴定方法与步骤-血型鉴定n（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净， 在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B 标准血

8、清一滴。n（2） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻 片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。n（3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用 来混合A型和B型标准（4）观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或 小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉 眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集 反应，可见红细胞聚集成团。n（5） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标 准血清所凝集，判断其血型。 血型判定正定型反定型 结结果 抗A 抗BA型RBC B型RBC O型RBC- -+ + - O + - + - A- + + - - B+ +- - - AB注意事项 n吹血液入稀释

9、管及洗净吸管时，不宜用 力过猛。n蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以 免稀释过量。每次比色时，应将搅拌用 的玻璃棒取出，以免影响比色。n由于操作过程过长而造成吸管内血液凝 固，堵塞管孔时，则要按下列溶液的顺 序重复冲洗吸管，即用水95%酒精 乙醚或丙酮。五 注意事项n玻片、试管都要标记！， A及B标准血清绝对不能相混,不 要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！n所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。n红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一 侧就不能去接触另一侧。n一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清 。n离心时间、速度严格要求，以防假阳 性或假阴性结果。n试验用血清和试剂红细胞都应标准化。n要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应 注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录 观察结果。