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1、地中海贫血基因检测 在临床诊断上的应用亚能生物技术（深圳）有限公司http:/ 地中海贫血l地中海贫血，又称海洋性贫血，是一种常见的 单基因遗传性溶血性血液疾病。l广泛分布在全世界沿海地区。l中国常见于东南沿海、西南地区以及台湾地区。地中海贫血的分布地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血l地中海贫血的共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，致使血红蛋白的组成成分改变。l地中海贫血分为-地中海贫血和-地中海贫血。人类不同时期血红蛋白的组成l胚胎期血红蛋白：lHb Gower 1 （x2 e2 ）lHb Gower 2 (2 e2)lHb P
2、ortland (x2 2) 即Hb Portland 1l另有少量Hb Portland 2 (x2 2)，Hb Portland 3 (x2 d2)l胎儿期主要血红蛋白：lHbF （2 2 ） l成人主要血红蛋白：lHbA （ 2 2）约占血红蛋白总量96.597.5%lHbA2 （2 d2 ） 约占血红蛋白总量2.53.5%lHbF （ 2 2）约占血红蛋白总量1%以下。血红蛋白分子示意图血红蛋白2221 Chromosome 16Chromosome 11-globin gene cluster-globin gene clusteredPredominant HaemoglobinE
3、MBRYONICFETALADULT2e222(2d2)Hemoglobin-地中海贫血l-地中海贫血（简称-地贫）是一种由于-珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病。多由-珠蛋白基因的缺失突变所致。l研究发现中国地区常见的3种 -地贫主要由 -SEA、-3.7、 -4.2缺失(左缺失）引起。-50kb -10kb 0kb 10kb 20kb 30kb(-SEA) Deletion (- 4.2) Deletion(- 3.7) Deletion 2 1导致地贫的不同类型的基因缺失-地贫基因缺失示意图-3.7-4.2-SEA 2 1211非缺失型-地贫n概念：基因发生点突变或少
4、数几个碱基的缺失。n中国常见的非缺失型突变：lHb CS 2 CD 142 TAACAA (Gln) Terminator mutation lHb QS 2 CD 125 CTGCCG (LeuPro) Unstable HblHb WS 2 CD 122 CACCAG (HisGln) Unstable Hbn特点：常发生于2基因，比缺失型导致更严重的珠蛋白 链合成的减少。-地中海贫血l-地中海贫血是一种由于-珠蛋白基因突变导致肽链合成减少或缺乏而产生的单基因遗传血液病，多由-珠蛋白基因点突变所致。 l在中国人群中常见的突变位点有CD41-42M， -28M， IVS-II-654M，CD
5、71-72M等 突变类型l编码区的移码突变、无义突变和起始密码突变：如CD41-42，CD71-72 ，CD17突变后形成终止子，表现为0。 l非编码区IVS-1和IVS-2突变如IVS-II-654突变影响mRNA的拼接，表现为。l影响转录的突变：如-28，-29的突变影响基因的转录，表现为 。世界上不同种族的常见地贫突变类型种 族 突变类型地中海人 IVS-1, position 110 (G A)CD39, nonsense (CAG TAG)IVS-1, position 1 (G A)IVS-2, position 745 (C G)IVS-1, position 6 (T C)IV
6、S-2, position 1 (G A)黑人 29, (A G); 88, (C T)Poly(A), (AATAAA AACAAA) 东南亚人,中国人 CD 41-42, Frameshift (CTTT)IVS-2, position 654 (C T)28, (A G); Hb E (G A)CD17, nonsense (AAG TAG)IVS-1, position 5 (G C)亚洲印地安人 IVS-1, position 5 (G C)CD 8-9, Frameshift (+G)IVS-1, position 1 (G T)CD 41-42, Frameshift (CTTT
7、)世界上不同种族的常见地贫突变类型种 族 突变类型珠海韶关广州汕头湛江广东省五个地区地中海贫血 遗传流行病学调查西南东北中Journal of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22. 中国南方地中海贫血人群携带率地区携带率(%) 地贫 地贫广东 8.532.54广西 14.956.78四川 1.922.18台湾 4.201.10香港 5.023.41Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5. 广东省人群中地贫的携带者频率基因变异等
8、位基因数频率(%) 地贫染色体4788.53(- SEA) 缺失2324.14(- 3.7) 缺失1743.10(- 4.2) 缺失530.95(- CS) 突变100.18(-THAI) 缺失20.04(- QS) 突变20.04(-11.1) 缺失10.021CD118 (+TCA)10.02-gene 缺失10.02未知突变20.04基因变异等位基因数频率(%) 地贫染色体1982.54CDs 41-42 (-CTTT)720.92IVS-2-654 (CT)490.6328 (AG)330.42CD 26 (GA)100.13CD 17 (AT)80.10CDs 71-72 (+A)7
9、0.09CD 43 (GT)70.09-29 (AG)40.05CDs 27-28 (+A)40.05-gene deletion10.01未知突变30.04广东省人群中地贫的携带者频率地中海贫血的临床特征小细胞低色素性溶血型贫血(中、重度)黄疸肝脾肿大 (脾大明显)骨髓扩增发育迟缓合并感染Barts 水肿胎(地贫,宫内或出生后半小时内死亡)地中海贫血的血液学表型特征 RBC 参数MCV MCH 细胞形态变化 Hb电泳分析Hb A2 () 或 () Hb Barts Hb H () Hb E () 地贫的基因型与表现型Normal (/) 正常+ thal trait (/-3.7) (/-4
10、.2) 静止型单一基因缺失或丧失功能临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅平均红细胞体积(MCV) 位于正常值下限。地贫的基因型与表现型Hb H disease (- 3.7/-SEA) (- 4.2/-SEA)o Thal trait ( /-SEA) ( - / - )血红蛋白H病3个基因缺失或丧失功能肝脾肿大，中度贫血。小细胞，低色素，HbH含 量较高，易发生溶血，有些病例需不定期输血， 症重者甚至需切除脾脏。 标准型2个基因缺失或丧失功能临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大小不均一，平均红细胞体积(MCV) 及平均血红蛋白含量(MCH)明显偏低。地贫的基因型与表现型Hb Ba
11、rts Hydrops (-SEA/-SEA) Hb Barts 水肿胎儿综合症 4个基因缺失或丧失功能患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成亚基，脐血血红蛋白（ Hb Barts ，4）含量高。中国南方HbH病基因的主要构成省份例数非缺失型缺失型T/、T /T-3.7 /-4.2 /-2.7 /nn%n%n%n%广西1366044.13525.73928.721.5广东1362719.97152.23827.9-四川551934.52749.1916.4-江西27829.6829.61140.8-香港38513.22668.4718.4-台湾22511450.
12、79441.8177.5-合计61723337.826142.312119.620.3地贫疾病严重程度的单倍型顺序21T 2 12T1 1T 地贫的基因型与表现型 重型-地中海贫血所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中海贫血面容”，生长发育迟缓。红细胞体积小且低色素。过剩的游离链形成链包涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。/ 、0/ 0 、0/ （纯合子或双重杂合子） 轻型-地中海贫血患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色素，MCV、MCH较低。A/ 、A/ 0 （杂合子）地贫的基因型与表现型 中间型-地中海贫血患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发
13、育迟缓，黄疸等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。/ 、/ 0 （纯合子或双重杂合子 ）中国南方高发区的主要突变类型突变类型广州台湾香港广西四川贵州湖北福建n%n%n%n%n%n%n%n%CD41-4218440.720236.34547.98344.21723.61740.51229.31441.265410022.122840.72021.3126.4912.5716.71741.51338.3-286714.8447.977.43619.268.312.437.312.9CD17419.1386.899.53619.22433.41638.137.3411.8CD71-72153.330.5
14、0042.111.40012.400Cd26112.491.611.1-29102.210.211.142.179.712.437.312.9CD43920.10.2-31.611.40024.912.9广州市主要出生缺陷的发生率 (1998-2001)排序出生缺陷例数发生频率 (/10000)1先天性心脏病26019.662重型地贫20815.733多指20015.124肢体短缩1118. 395唇裂/腭裂1098.24n根据-地贫基因缺失特点 ，利用多重GAP-PCR技术 可同管检测三种缺失型及 正常四种基因型。通过电 泳条带大小来判断。n操作简便快捷，结果直观 可靠。-地中海贫血基因检测试剂盒-地中海贫血基因诊断l可同时检测 -SEA、-3.7、-4.2等3种缺失型-地中海贫血。l可检出无临床症状的静止型-地贫（/ -3.7、 /-4.2），l应用：婚前检查、产前检查及产前诊断。 -地中海贫血基因诊断操作流程待测样品DNA的制备l全血DNA快速提取试剂盒l应用l全血DN
