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1、实验五 微生物大小测定、显微镜直接计数 及微生物的生理生化反应 一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤主主 页页 学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大 小的方法 掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类 学基本要求，增强对微生物细胞大小的感 性认识。返返 回回目镜测微尺外观镜台测微尺外观镜台测微尺放大0 10 20 30 40 50目镜测微尺放大刻度超下，安 装于右目镜中0 10 20 30 40 50目镜测微尺镜台测微尺微生物细胞目镜测微尺的标定两条重合线间镜线间镜 台测测微尺的格数 目镜测微尺每格长度/m = 10两条重合线间目镜测微尺的格数返返 回回光线不宜太强放置镜台测
2、微尺目镜测微尺每格长度的计算菌体大小的测定低倍镜 高倍镜装目镜测微尺测定结束返返 回回酵母菌 取少量菌液，加在载玻片 上，盖上盖玻片，进行观察；随机选 取10个细胞进行测量，计算平均值一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤主主 页页 学习并掌握使用血球计数板测定微生物细 胞或孢子数量的方法返返 回回显微镜直接计数法 利用血球计数板直接在显微镜下计数微生 物的细胞（或孢子）数目 优点：直观、快速、操作简便 缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运 动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察计数公式1ml菌液中的总菌数=（5个中方格的总菌数/5）16104
3、 稀释倍数或1ml菌液中的总菌数=（5个中方格的总菌数/5）25104 稀 释倍数1ml菌液中的总菌数=平均每小格的菌数400104 稀 释倍数本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右 即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格 的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中 见图：即本格中计数细胞为3个。返返 回回返返 回回清洗计数器自然晾干观察计数室加样品酵母菌 取适量菌液，进行系列稀释 （已稀释100倍）低倍镜 高倍镜菌悬液制备显微镜计数用移液器吸取少量摇匀后的菌悬液，从盖玻片 边缘滴加10 ul样品（自然虹吸）,静置5min如遇酵母菌出芽，芽体大小达到母 细胞一半，即作为两个菌体计数一、实验目
4、的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤主主 页页一、大分子物质水解试验 二、糖发酵试验三、IMVC试验四、本次实验所用培养基和菌种五、报告要求实验原理大分子物质微生物 细胞胞外酶 小分子物质淀粉 培养基 碘 液 碘液 明 胶 培 养 基25以下 实验步骤 淀 粉 水 解 试 验倒平板 分区标记 接种 培养 观察 加卢戈氏碘液，观察无色透明圈 制固体淀粉培养基 1-枯草杆菌 5-大肠杆菌所接种的细菌菌名代号、组别、日期 实验步骤 明 胶 水 解 试 验标记明胶培养基试管 穿刺接种 培养 观察 观察明胶液化情况 制明胶培养基 所接种的细菌菌名代号、组别、日期 1-枯草杆菌 5-大肠杆菌糖
5、发酵试验实验原理糖类物质 细菌 有机酸气体溴甲酚紫指示剂 黄色pH6.8pH5.2德 汉 氏 小 管实验步骤 糖 发 酵 试 验接种 培养 观察 各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡 标记 所接种的细菌代号 5大肠杆菌 1枯草杆菌IMVC 吲哚(indol test)试验 甲基红(methyl red test)试验伏-普(Voges-Prokauer test)试验柠檬酸盐(citrate test)试验这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查 IMVC实验原理蛋白胨中 的色氨酸 吲哚 丙酮酸 对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚 细菌 色氨酸酶 吲哚产生吲哚试验原理葡
6、萄糖 有机酸 甲基红指示剂 pH6.3 红色 pH4.2 甲基红试验（M.R.试验）葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 蛋白胨中精氨酸的胍基 红色化合物 OH乙酰甲基甲醇（V.P.）试验原理NH2NH2柠檬酸盐 和磷酸铵 碱性化合物 1溴麝香草酚蓝指示剂 pH6.0-7.0 蓝色pH大于7.6 柠檬酸盐利用接种 培养 结果观察 5-大肠杆菌 7-产气肠杆菌葡萄糖蛋白胨水培养基 各2支 柠檬酸盐斜面培养基 各1支IMVC实验步骤甲基红试验 甲基红试剂（5滴） 伏-普试验 40KOH（510滴）5a-荼酚溶液（等量）37温箱中保温（1530min） 柠檬酸盐试验 ？现象观察反应名称培养基名称接种
7、菌名淀粉水解淀粉培养基平板（1块）1、5明胶液化明胶培养基试管（2个，半固体）1、5糖发酵乳糖发酵培养基（2个，紫色）1、5甲基红试验葡萄糖蛋白胨水培基（2个，黄色）5、7伏-普试验葡萄糖蛋白胨水培基（2个，黄色）5、7柠檬酸盐试验柠檬酸盐培养基斜面（2个，绿色）5、7（一）写出目镜测微尺的标定结果物镜 目尺格数 台尺格数 目尺标定值（ m ） 10 40 （二）分别列表10个酵母菌的长和宽，并计算其平均值1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值长 宽结果计算 长m平均格数校正值 宽m平均格数校正值 大小表示：宽m长m实验结果及思考题（三）显微计数结果各中格菌数5个中 方格 中总 菌数
8、菌液 稀释 倍数两室 平均 值菌数 /ml12345酿酒 酵母第1室第2室（四）生理生化反应结果记录表淀粉水解 试验明胶水解 实验乳糖发酵 实验甲基红实 验伏-普实 验柠檬酸盐 实验1：枯草 芽孢杆菌5：大肠 杆菌7：产气 肠杆菌思考题1.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时 ，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进 行校正？2. 假如某些微生物可以有氧代谢葡萄糖，葡 萄糖发酵实验应该出现什么结果？实验名称实验时间授课时间代课教师抗植物病原真菌的 枯草芽孢杆菌筛选 及鉴定2015.11.2- 11.1111月2日下午2:30 3115微生物实验室孙燕抗植物病原真菌的 假单胞菌筛选及鉴 定2015.11.11- 11.2211月11日下午2:30 3115微生物实验室李治高效石油降解菌的 筛选及初步鉴定2015.11.23- 12.211月23日下午2:30 3115微生物实验室马小魁氮素生理群实验2015.12.2- 12.1312月2日下午2:30 3115微生物实验室梁健植物内生真菌的分 离2015.12.14- 12.2312月14日下午2:30 3115微生物实验室魏希颖2015年微生物综综合实验时间实验时间 安排
