《免疫组化结果判断及常见问题的分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫组化结果判断及常见问题的分析（47页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、免疫组化结果判断 及常见问题分析武汉大学病理学教研室 杨飞肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性， 肝细胞呈不同层次阳性。pan CK（AE1/AE3） 在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。一、特异性染色的判断1.特定的定位 细胞阳性根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性表现为细胞外着色，局限性或弥散性 2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少 3.排除人为造成的非特异性染色切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。 4.颗粒性显色DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。免疫组化标准化
2、照片CK10CD44v6ER合格的免疫组化染色切片 是正确判断染色结果的基础和前提不合格的免疫组化染色切片 容易导致误判C-erbB-2优良中差4321ER子宫内膜PR染色，修复不足 子宫内膜PR染色，修复良好 PR编号阳性片待检片阴性对照结论 1 2 3 4 5 操作失误，抗体失效 非特异性着色 阳性片不含靶抗原 待检片不含定位抗原 待检片含定位抗原二、染色结果的判断PCNA S-P400S-P4001-day CM4-day CM阳性强度2010视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例
3、：5% （）5%30% （）30%50% （ ）50% （ ）PCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色） 1（浅黄色）2（棕黄色） 3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%10%）2（11%50%）3（51%80%）4（80%）评分=AB0分：阴性14分：弱阳性4分：强阳性胶原染色阳性面积百分比4010视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考 面积的百分率。CD34Weidner法（MVD计数）1.孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。2.低倍镜下找到组织内密度最高区域。3.4010视野下计数微血管数目。K-rasVEGF附：定量分析图象处理系统1、图象处理：利用仪器按照不同的
4、目的进行图象的修正、变 换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸 变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进 行测量。2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出3、图象处理系统功能几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比； 细胞分布密度、个数； 血管、腺体的面积、密度；间质的面积免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA 含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色
5、及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗35min内源性过氧化物酶3H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥内源性生物素肾小管 内源性生物素淋巴结转移性甲状腺腺癌蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色 嗜酸性粒细胞中细胞色素显色 吞噬细胞内 含铁血黄素 坏死组织着色：AE1/AE3坏死组织着色 交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色 灶状着色：机械原因着色Cyclin D1 套细胞淋巴瘤全片着色全片着色边缘着色“
6、阴阳脸”着色气泡非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗35min内源性过氧化物酶3H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥非特异性着色及其对策无信号片CD302. 染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当（固定、浸蜡）改善条件，重取材一抗与二抗种属连接错误确定抗体种属无误抗体失效不得使用过期的试剂盒显色系统不相适配更换适配的显色系统操作不当，遗漏重要步骤严格遵守操作规程无色或浅色片MCL理想的 CD5着色。所有的瘤 细胞都着色很强。散在的T细胞 着色比瘤细胞深。MCL的CD5染色不足 (一抗浓 度太低)。 MCL瘤细胞几乎都 没有着色。3. 染色过弱原因及其对策染色过弱原因对策抗体浓度过低，孵育时间过短提高浓度，延长时间滴加试剂时缓冲液未沥干滴加试剂前沥干多余水分过度蛋白封闭缩短封闭时间抗原被破坏新鲜组织及时固定，固定 时间不要超过24小时 室温太低，15适当延长孵育时间
