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1、第九章 维生素类药物的分析概 述维生素：是维持人体正常代谢机能所 必需的 微量营养物资。人体不能合成维生素。公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也 就是后来 的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是 后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 1905年-甲状腺肿大被碘治愈。 1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造 成的维生素发展史1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随 后断定这种病是缺乏维D引起的。 1920年-
2、发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。1922年-维E被发现。 1928年-科学家发现维B至少有两种类型。 1933年-维E首次用于治疗。 1948年-大剂量维C用于治疗炎症。 1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。 1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。 1957年-Q10多酶被发现。 1969年-体内超级抗氧化酶被发现。 1970年-维C被用于治疗感冒。 1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的 研究结果。VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。分类按溶解度分第一节 维生素A的分析一、结构与性质 （一
3、）结构R: -H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯一个共轭多烯侧链的环 己烯，有立体异构体相对生物效价维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75%新维生素Ab 320.5 24%新维生素Ac 310.5 15%异维生素Aa 323 21%异维生素Ab 324 24%（二）性质 1、具紫外吸收：在325328nm间有最大吸收 2、不稳定性： （易氧化变质）易被空气中氧或氧化剂氧化易被紫外光裂解在加热和金属离子存在时，更易氧化变 质，生物活性的环氧化物、维生素A醛及维 生素A酸v 或有金属离子存在时氧化3、能与三氯化锑呈色：产生不稳定的蓝
4、色。 4、溶解性：维生素A能与氯仿、乙醚、环己烷或石 油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中 不溶二、鉴别试验（一）三氯化锑反应原理：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。注意：鉴别在无水、无醇条件下进行。CHCl3水中水解为氯化氧锑（二）紫外吸收光谱：5个共轭双键6个共轭双健去水VitA（VitA3）VitA（三）薄层色谱 吸附剂：硅胶G 展开剂：环己烷-乙醚 (80:20) 点样量：各2l，不必挥散溶剂，立即展开 显色剂：三氯化锑溶液 结 论：比较供试品溶液和对照品溶液所显蓝 色斑点位置BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑USP 显色剂 磷钼酸规定斑点颜色和Rf值
5、立体异构体 氧化降解产物 合成中间体 副产物UV法（一）三、含量测定维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸三点校正法 1、方法建立的依据2、测定原理方法的依据：主成分：在325 328nm有吸收杂质：在310340nm范 围内 吸收呈一条直线 ，且随波长的增大，吸 收度变小。物质对光的吸收具有加 和性。3、三点波长的选择（1）第1点：选择维生素A的最大吸收波长 (1) （2）第2点和第3点：在max两侧各选一点 等波长差法：3-1=1-2测定VA醋酸酯，规定：1=328 nm，入2=316nm，3=340nm等吸收度法：A2=A3=6/7A1测定VA醇，规定：1=325 nm，2 =
6、310 nm, 3 =334 nm4、杂质吸收(1)维生素A2和维生素A3(2)维生素A的氧化产物环氧化物、维生素A醛和维生 素A酸。(3)维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸 醇。(4)维生素A的异构体。(5)合成时产生的中间体。(1)(5)这些杂质在310340 nm波长范围内有吸收，因此，在测定维生素A含量时，必须考虑这些 杂质的干扰。三点校正法可以消除这些杂质的影 响。5、测定方法（1）基本步骤:v第一步 A的选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已被基本消除第二步：求百分吸收系数，注意： C 为混合样品的浓度第三步 求效价换算因数由纯品计算而得：第四步：求标示量(2)第一法等波长差
7、法，高纯度VA醋酸酯 测量方法：计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸 收度的比值 判断 是否在326329nm之 间在326329nm之间改用第二法是否 求算并与规定值比较规定值 差值 判断前提；最大吸收波长在326329nm之间A的选选取直接用A328A328 A328校正 第一法不 适用 03%15%3%第二法第二法讨 论1. VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（ 即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是 用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。2. 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进 行测定。在测定前务必要校
8、正波长。测定的样品 应不得少于两份。例：VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为求本品中维生素A的含量？A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.
9、000 0.811 0.299+ 0.010.010+ 0.02+ 0.04=用校正的吸收值（3）第二法等吸收度法，适用于维生素A醇 皂化法、6/7A法 第一法无法消除杂质干扰时用此法加热回 流 判断max是否在323327nm之间取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定 计算是否03%3%二、三氯化锑比色法优点 简便 快速max 618nm620nm标准曲线法缺点呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性（三）高效液相色谱法RP-HPLC同时测定人血清中VitA和VitE的含 量1、仪器与分析条件：HPLC-UV、C18 (3003.9 mm）、甲醇水（96：
10、4）、流速：1.2 ml/min、 检测波长：08min (330 nm), 8 min后(292 nm）内标：维生素A醋酸酯血清样品的制备：LLE法制备分析方法的建立：线性LODRecoveryPrecisionChromatogram:第二节维生素 Bl的分析 一、结构及性质 (一)结构氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)HClCl-存在于米糠、麦麸和酵母中 人工合成(二)性质 （1）溶解性：在水中易溶，水溶液显酸性在乙醇中微溶，在乙醚中不溶 （2）具有紫外吸收：max=246nm（HCl溶液 ） （3）硫色素反应：具有荧光（4）碱性可与酸成盐与生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定 的沉淀。含量测
11、定 非水碱量法（5）氯化物特性嘧啶环 伯氨 噻唑环 季铵碘化汞钾、三硝基酚、 碘溶液、硅钨酸等二、鉴别试验 (一)硫色素反应维生素B1的专属反应 原理：方法：VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应S元素反应Cl-反应（三）其他反应()2 1PbSNaSVitBNO3PbNaOH三、含量测定非水溶液滴定法（原料）和紫外分光光度法（制剂 ）、硫色素荧光法（USP（24）。（一）非水滴定法1、原理：含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非 水溶液中可与高氯酸作用，用于含量测定。喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）2、方法：用冰醋酸作溶剂，滴加醋酸汞，以喹哪啶红亚甲蓝混合物作指示剂，高氯酸作滴定液3、注意事
12、项：（1）加醋酸汞。（2）滴定度为16.86mg/ml。VB1有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为12（3）非水容量法可用于弱酸性特别是弱碱性药物及 其盐类的含量测定。（4）此处仅适用于维生素B1的原料药含量测定。（二）紫外分光光度法 1、原理：2、VB1片的含量测定测定方法：以盐酸溶液 (91000)作溶剂，在246nm测定吸收度，按Cl2Hl7ClN4OSHCl的吸收系数 (百分吸收系数)为421计算，即得。片剂、注射剂= 421（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格 g/片g/100mlgChP（每ml）相当于标示量的%=规格 g/mlml（三）硫色素荧光法原理原理1、荧光硫色素
13、异丁醇铁氰化钾 1VitB NaOH通过与对照品荧光强度的比较即可测得供试品含量2、实验操作40 ml具塞试管3支对照品溶液5 ml；其中2支加入氧化试剂3.0 ml，再迅速加入异丁 醇20 ml，振摇。第三支试管中加入3.5 mol/l的NaOH，同法操作为空白。另取三支试管加入供试品，同法操作。各试管中加入无水乙醇2 ml，分取异丁醇，进行荧光测定。3、结果计算特点特点4、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析（3）该法适用于VitB1的制剂含量分析（4）可用BrCN为氧化剂，反应定量完全，适合于生物样本分析第三节维生素 C的分析有四种光学异构体，其中以 L-构型
14、右旋体的生物活性最强。药典：维生素C原料、片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂一、结构及性质 (一) 结构具有烯二醇结 构和内酯环 在C4、C5有两 个手性碳原子 性质活泼 具有旋光性 （二）性质 1、溶解性： 水中易溶 乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶 水溶液呈酸性C3OH的 pKa = 4.17C2OH的 pKa = 11.572、具有酸性一元酸（与碳酸氢钠成盐）烯二醇结构 （抗坏血酸）二酮基结构 （去氢抗坏血酸）烯二醇结构3、强还原性o -2H+2H有活性有活性无活性L-二酮古洛糖酸L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）4、光学活性*与碱反应5、水解反应内酯环糖类的显色反应50结构与糖类相似
15、6、具糖的性质7、UV特征二、鉴别试验 （一）利用VC所具有的强还原性1、与硝酸银反应 (1)方法：取本品0.2g，加水l0ml溶解。取该溶 液5m1，加硝酸银试液0.5m1，即生成银的黑 色沉淀。 (2)原理：烯二 醇基 ，具 强还 原性 2、与2，6二氯靛酚反应(1)方法：取本品0.2 g，加水l0ml溶解。取该溶液5m1，加2，6二氯靛酚试液12滴，试液的颜色即消失 。原理：氧化型玫瑰红色还原型蓝色 OH3、与其他氧化剂反应亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色碱性酒石酸铜 砖红色沉淀磷钼酸 钼蓝或盐 酸吡咯50（二）利用维生素C所具有糖类性质的反应H+吡咯（三）利用VC所具有的紫外吸收特性维生素C在0.0lmol/L盐酸液中，在243nm 波长处有惟一的最大吸收，利用此特征进行 鉴别。BP中采用该法，并规定其吸收系数应为545585之间三、杂质检查1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光
