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1、第七章 临床专用生化分析 仪分析技术教学要求和目标v掌握 各分析技术的基本原理和分析方法v熟悉 各分析技术仪的结构组成特点，仪器的 维护保养，质量控制和临床应用v了解 各分析技术仪的分类第一节 浊度自动化分析技术一、浊度分析的基本原理v在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中 特异结合，形成有一定大小的抗原颗粒，使 反应液出现浊度v当光线通过介质中的复合物颗粒时吸收、透 射、散射和折射v通过测量透射光或散射光信号强弱被测物的 量。v浊度分析方法的分类v检测器的位置及接收光信号的性质分v透射免疫浊度法（turbidimetry immunoassayv散射免疫浊度法（nephelometry im
2、munoassayv测定方式分：v终点浊度法与速率浊度法v浊度形成原理分：v沉淀反应浊度法与胶乳凝集比浊（粒子增强免疫浊 度法）v终点散射浊度法v检测反应终点与起始点之间信号变化的方法v速率散射浊度法v速率是指在单位时间内抗原抗体结合反应形 成复合物的量。是在抗原与抗体反应的最高 峰测定其复合物形成的量，该峰值的高低与 抗原的量成正比。v粒子增强免疫浊度法v选择大小适中、均匀一致的胶乳颗粒吸附或 交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集 。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可 透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过 光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比 。v灵敏感度较高。二、浊度分析仪的分类和
3、基本结构v自动生化分析仪v散射浊度分析仪v应用较为普遍的有固定时间散射分析仪、速 率散射分析仪和双光路自动免疫浊度分析仪自动散射浊度分析仪的组成v分析系统：用于加样、稀释、保温和测试等 。包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样 品转盘、卡片阅读器等v计算机系统：用于输入病人数据、选择程序 菜单、计算参考曲线和储存测试结果散射浊度分析仪光路示意图三、浊度分析仪的保养v常规保养v日保养v关机前冲洗管道，以防止管道阻塞v开机前应检查注射器，防止漏液v检查D、B、A、W液面高度v光路校正v周保养v更换流动比色杯和小磁棒v清洁探针的外部v检查蠕动泵和钳制阀控制着管路中液体的流动 情况v月保养v更换注射器
4、插杆顶端v空气过滤网冲洗v疏通标本和抗体探针的内部v半年保养v更换管道v机械润滑四、浊度分析的质量控制（一）抗原过剩校正检测方法：v连续监测抗原抗体反应曲线，呈现异常v追加抗体，浊度继续增大v标本两种稀释度测定，浓度高的浊度反而 低（二）减少伪浊度伪浊度：除待测抗原抗体复合物产生的浊度外，其它 可引起透射光或散射光变化的浊度都称为 伪浊度减少伪浊度的方法： 采用新鲜、合格标本 保持比色杯和稀释杯清洁 使用合格的抗体试剂 严格控制增浊剂的浓度（三）选择合适的入射光波长入射光波长的选择原则：除了抗原抗体免疫复合物外，反应体系中的 其他成分对入射光的干扰应为最小，因为其 他成分吸收了部分入射光，透射
5、比浊法测定 结果将使抗原浓度偏高，而散射比浊法测定 将使抗原浓度偏低。（四）仪器校正选择合适的校准品校准曲线的绘制校准曲线的形状取决于抗血清和促聚剂的 浓度的选择，也与免疫浊度法类型、校正 方法及校准品的质量有关。多推荐5点或6点定标。适当的数学方法进行曲线拟合五、特定蛋白浊度分析的 临床应用特定蛋白临床常规项目免疫功能监测 免疫球蛋白：IgG、IgM、IgA、 C3、C4 临床意义： IgG、IgA、IgM检测有助于了解机体抗感染能 力，有助于疾病的正确诊断和有效治疗。 在免疫复合物疾病中，C3、 C4检测可以了解 其消耗程度。适应症： 免疫力低，反复感染病人； 自身免疫性疾 病；多发性骨髓
6、瘤；慢性肝病；非何 杰金氏淋巴瘤；白血病；良性单克隆免 疫球蛋白病；先天性或获得性低免疫球蛋 白血症；对白、球蛋白比例异常者的随访 术后感染、移植排斥反应第二节 电解质自动化分析技术一、电解质分析的原理和方法离子选择性电极（ion selective electrodeelectrode，ISE）是一类用特殊敏 感膜制成，对溶液中某种特定离子具有选择 性响应的电化学传感器。 常用于测量离子的活度或浓度。ISE基 本结构 通常由电极管、内电极、电极内充溶液和电极 膜（或称敏感膜）四个部分组成。电极电位产生 基于膜材料与溶液界面发生的离子交换反应 当电极置于溶液中时，由于离子交换和扩散 作用，改变
7、了二相中原有的电荷分布，因 而形成双电层，其间产生一定的电位差即 膜电位 ISE的电位与溶液中特定离子活度的对数呈线 性关系，即符合Nernst方程3. 电极电位测量 ISE的E ISE 值不能直接测定 必须将ISE与参比电极共同浸入待测样品中组 成一个原电池，通过测量E电池 来测定E ISE 值。 在一定条件下，原电池的电动势与被测离子 活度的对数呈线性关系。（二） ISE 电位分析方法 标准比较法（或直读法）：指在pH计或离 子计上直接读出数值的方法，适用于少量 样本的分析 标准曲线法：适用于大批量的试样分析 标准加入法：当待测溶液组分较复杂，很难 控制 相同的离子强度时，选用标准加入法（
8、二） ISE 样本测定方式直接法：指样本不经稀释直接测量离子活度 。全血测定，迅速方便、结果准确，不会因 血清中水体积所占比例改变而影响结果 间接法：样本经缓冲液稀释后由电极测量离 子活 度。样品用量少，不易堵塞管道，电极寿命长 直接法比间接法测定结果高35 ，因为血 脂及蛋白质等不包含有K 、Na 二、电解质分析仪分类和结构（一）电解质分析仪的分类 半自动和全自动电解质分析仪 湿式和干式电解质分析仪 电解质分析仪、含电解质分析的血气分析仪 、含电解质分析的自动生化分析仪离子选择性电极组：包括指示电极和参比电极 通常采用流动式毛细管结构，即在毛细管的 侧臂开多个小孔，孔里插入各种离子选择 性电
9、极 负压吸样 多参数同时测量钠、钾、氯电极 钠电极：铅硅酸钠的玻璃膜电极 钾电极：缬氨霉素和聚氯乙烯（PVC）膜电 极 氯电极：银氯化银电极液路系统 常由标本盘、溶液瓶、驱动电机、采样针、 电极系统、蠕动泵、三通阀、管道等组成 。 用于将样品、定标液和稀释液等吸取和输送 至电极管道中，并完成电极、管道冲洗与 废液排除电路系统 微处理器、信号放大及数据采集、蠕动泵和 三通阀控制、输入输出、电源电路等五大模 块组成。 共同完成对仪器各部件的动作控制，对电极 mV值进行处理和计算，并显示或打印输出结 果。程序控制系统 包括仪器微处理系统、仪器设定与测定和自动 清洗 程序等。 显示操作系统 键盘、液晶
10、显示、触摸屏等三、电解质分析仪的维护和保养每日维护 检查试剂量，清洁仪器表面及吸样探针，弃去 瓶中的废液 每周维护 清洗液路，除去蛋白质、脂类沉积和盐类结晶 。每月维护 用酒精棉球清洁泵管和不锈钢转轴，在泵管 的弯处涂硅油或白色凡士林等润滑剂。 每季度进行MV值试验 检查电极的MV值是否符合说明书要求。电极系统的保养 定期更换电极膜和电极内充液 定期进行去蛋白清洗及电极的活化 液路系统的保养 保证液路无蛋白质、脂类沉积和盐类结晶 每天关机前均进行管路的清洗 冲洗完毕重新定标v仪器的保养四、电解质分析的质量控制分析前质量控制 样本的采集与处理 采血器具干燥、清洁 减少输液对结果的影响。 采血中应
11、避免溶血。 尽快送检，勿剧烈振荡，避日光照射；不能 立即测定应分离血清，置于4冰箱中保存。 与空气接触时，CO 2 ，pH抗凝剂的影响 抗凝剂：不能用EDTA、柠檬酸盐或草酸盐等 抗凝剂。肝素常不超过20U/ml血样。 药物的影响 药物或其代谢产物引起患者体内被测物的浓 度发生改变。如利尿剂促进K + 、Na + 、 Cl 从尿中排出。 药物直接对ISE的响应产生影响：如水杨酸盐 对抗凝剂的影响Cl 电极、维生素C对K + 电 极响应有干扰等分析中质量控制 定标校正液各厂家的定标校正液不能互换使 用 电极保养 使用一段时间后就需要保养 质控品 选用质量好、性能稳定和对离子选择性电极 响应没有干
12、扰的质控血清分析后的质量控制 异常结果的分析取舍： 如Glu 、HCO 3 、K +过高：血样放置过 长 多项检测结果过低：样品稀释比例不对、有 纤维蛋白凝块或吸样针部分堵塞 对某些急诊检验项目特别异常的结果，应及 时与临床联系，以便紧急处置五、电解质分析技术的临床应用 低钠血症和高钠血症 血清钾增高和血清钾降低 低氯血症和高氯血症电泳自动化分析技术一、影响电泳的因素待分离物质的性质 粒子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近 球形，则其电泳迁移速度越快。 缓冲液的性质 溶液的pH值影响其带电性质、净电荷量。 缓冲液离子强度一般在0.02 0.20molkg之 间。电场强度 电压越高，电场强度越
13、大，迁移率越大，带 电粒子移动越快 支持介质的性质 包括黏性吸附对泳动的阻碍作用，支持介质 的分子筛和电渗作用 温度升高时，介质黏度下降，分子运动加剧 ，引起自由扩散加快、区带变宽和分辨率 下降二、电泳仪的分类和基本结构电泳技术的分类 工作原理的不同分为：移动界面电泳、区带 电泳、稳态电泳或称置换电泳 有无支持物分为：自由电泳和支持物电泳（ 区带电泳）。 电源控制的不同分为：恒压电泳、恒流电泳 、恒功率电泳。自动化程度的不同分为：手工操作、半自动电泳、全自动电泳、全 自动电泳分析系统其他分类方式：支持载体的装置形式，区带电泳可分成水 平平板电泳、垂直板状电泳、垂直柱状电 泳、U型管电泳、倒V字
14、形电泳、毛细管电 泳等。电泳仪的基本结构手工电泳仪 电源、电泳槽、电泳条带分析装备(或扫描仪) 三部分的结构分离，加样、电泳、电泳后的 染色和脱色等均需手工操作，人工设置参数 完成电泳。 自动电泳分析仪将电源、电泳槽、烘箱、染色缸等组合在一 起，采用计算机对电泳过程进行控制，部分 乃至全部操作由电泳仪完成；分为半自动或 全自动电泳仪。三、自动电泳仪的使用和保养每天保养 重点是电极的维护，每天电泳后，应当用干滤 纸擦净电极，避免缓冲盐沉积于电极上或酸 碱对电极的腐蚀。 每月保养 重点是扫描系统的比色滤镜及光源。四、电泳分析的质量控制电泳分析前质量控制 电泳分析方法的选择加强实验室与临床医生的沟通
15、，宣传实验室所 开展的电泳技术及应用；全面了解电泳仪的 结构和原理、电泳结果的意义，合理使用电 泳分析方法。v标本采集： 宜采 用 新鲜 血清， 避免标本 溶血。脑脊液 ( CSF) 标本新鲜 最 佳； CSF 免 疫固定电泳必须对同一病人同时采集CSF 和血清标本。尿液标本以新鲜的晨尿为佳。v标本保存： 不能立即电泳的 血样， 应先分 离血清再保存。血清、脑脊液和尿液标本， 在 2 8 冷藏保存可稳定 1 周， - 20 至少可保存 1 个月， - 40 保存可长达5 年。如血清标本加入 0.2g L 的叠氮钠， 冷冻保存的稳定性更好电泳试剂的保存 应遵照试剂使用说明书的要求保存 大多数厂家
16、的电泳载体是琼脂糖凝胶，其保 存期至少在半年以上。 凝胶片在干燥的室温条件下保存，具有生物 活性的试剂(如抗体、酶等)需严格按要求保 存，其他配套保存试剂应在有效期内使用电泳分析中的质量控制标本准备和使用 标本是否需要稀释或浓缩，根据需要而定 冷冻后的血清标本有时会变得黏稠或混浊， 在电泳分析前要置室温平衡 冷冻标本-脂蛋白可向阴极漂移；越陈旧的 血清标本漂移越明显 标本量的要求尽可能做到严格和精确电泳操作 应注意加样、电泳、染色等因素对电泳结果的 干扰，如样品是否同时“点”在凝胶片上，电泳 方式的选择是否正确，染色液是否足够，扫 描胶片是否“对号入座”等。质控物正确应用 较成熟的商业性控物主要用于血清蛋白电泳 分析 在无合适商品化质控物的情况下，可以考虑 用正常人血清电泳分析后的质量控制主要包括对分析结果的正确解释和应用、电 泳结果的及时发送以及自动电泳仪的维护和 保养
