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1、 不发酵革兰阴性杆菌 定义v 不发酵革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件 致病菌。O-F试验发酵型（F）氧化型(O)产碱型(-)革兰阴性杆菌O-F试验Fo/非发酵菌氧化酶试验 +弧菌科肠杆菌科革兰阴性菌初步分群不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。 分类分群依据v氧化酶试验v葡萄糖氧化发酵试验v动力试验常见见不发发酵革兰兰阴性杆菌的初步分群鉴鉴定试验试验假单单胞菌属无色杆菌 属黄杆菌属不动动杆菌 属产产碱杆菌 属
2、丛丛毛菌属莫拉菌属氧化酶+/-+/-O/F试验试验O/-OOO/-动动力+/-+/-+/-+-注：+：90%以上阳性；-10%以下的阳性；+/-：约约70%为为阳性；O：为为氧化。不发酵革兰阴性杆菌假单胞菌属v 假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，DNA G+C为5871mol，包括200余种菌。多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条件致病菌。 代表菌株为铜绿假单胞菌。v 假单胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有存在，人类非发酵菌感染中，假单胞菌占70 80，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假
3、单胞菌等。这些菌种也是医院感染的主要病原菌。 临床意义微生物特性 共性共性 :G-:G-杆菌，无芽孢，有荚膜，多数菌杆菌，无芽孢，有荚膜，多数菌 有鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，有鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广， 最适最适3535度度 ，普通培养基上可以生长，可，普通培养基上可以生长，可 产各种水溶性色素。抵抗力强，多种抗生产各种水溶性色素。抵抗力强，多种抗生 素耐药素耐药 微生物检验2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶 氧化酶阳性，吲哚 、甲基红、VP阴性。微生物检验3.药敏试验 A组：头孢他定、庆大霉素、美洛西林、替卡西林、哌拉西林 B组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培南、
4、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星 C组：头孢噻肟、氯霉素 U组：羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星、SMZ4.抗菌药物：内酰胺类，氨基糖苷类，喹诺酮类。5. -内酰胺类抗生素是含有-内酰胺环的一大类抗生素,以青霉素类、头孢菌 素类为典型代表,此外还包括非典型-内酰胺类抗生素如青霉烯类、碳青霉 烯类、氧青霉烯类及单环-内酰胺类等。42 生长长 明胶 液化鞭毛+单单鞭毛铜绿铜绿 假单单胞菌-+丛丛鞭毛荧荧光假单单胞菌-丛丛鞭毛恶恶臭假单单胞菌OF试验：O 氧化酶：+ 精氨酸水解：+ 葡萄糖酸氧化：+氮气：+医院环境及用品、临床标本分离培养基涂片检查肉汤培养基血琼脂平板SS、麦康凯琼脂平板挑选可疑菌落
5、（37 培养1824h观察 有无色素产生，色素鉴别接种金氏 A、B培养基）无色素菌株 42 +绿脓素+绿脓菌荧光素 铜绿假单胞菌假单胞菌鉴定程序铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传播 途径和污染，因此易感染,特别是免疫力低下的 患者。引起: 1.皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染 2.菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性 3.感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，以 致引起角膜穿孔而失明。临床意义致病物质： 1.粘附素-菌毛 2.多糖荚膜 3.内毒素，外毒素 4.绿脓毒素-催化过氧化氢和超氧化物 5.弹性蛋白酶 6.磷脂酶C临床意义生物学性状v形态与染色：G- 杆 菌，多形性
6、，有鞭毛、 菌毛、荚膜，无芽孢, 产荧光素和绿脓素2.生物学特性v培养特性：专性需氧 ，4不生长42 生长 ，在血平板上经35 37，1824h培养可表 现为：菌落大而扁平、 湿润、边缘不齐,有金属 光泽,有生姜样芳香气味 ,菌落周围有宽大的兰绿 色透明溶血环。2.生物学特性v血平板，麦康凯平板上五种菌落v1.典型型-灰绿色，大小不一，扁平湿润，金属光 泽v2.大肠菌样型-灰白色半透明v3.黏液型-光滑突起，成粘液状v4.侏儒型-细小，无光泽，半透明v5.粗糙型-中央凸起，边缘扁平，表面粗糙铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)v可产生多种色素 ：荧光素与绿脓素铜绿假单胞菌（P. aeru
7、ginosa)v绿脓素生物学性状v普通琼脂培养基上 能产生水溶性绿色 素，使整个培养基 变为绿色。MAC培养 基上，18-24h可形 成微小无光泽半透 明的菌落。SS平板 上可行成类似沙门 菌的菌落。(中心黑 色菌落）生物学性状v生化反应：氧化酶阳性，触酶阳性，O/F氧 化型，精双（+）还原硝酸盐。v抗原构造和分型：菌体O,鞭毛H,粘液S和 菌毛抗原。v抵抗力:耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消 毒剂，临床分离的菌株多耐药。铜绿假单胞菌检验v1标本采集 按疾病和检查目的，分别采取不同的标本：患者 的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、 尿液、十二指肠引流液、粪便等；医院病区或手术 室的空
8、气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活 用品。1.肉浸汤 2.胰化酪蛋白大豆肉汤37 培养1824h挑选菌落鉴定分型 血清学 噬菌体 绿脓素初步鉴定 菌落特征、色素、绿脓素：+ 涂片、革兰染色、氧化酶：+最后鉴定生化反应脑脊液、胸（腹）水、脓液、分泌物、痰、尿液、十二指肠引流液血液、环境用品分离培养：直接涂片革兰染色粪便血琼脂平板SS、麦康凯分离培养：37 如生长铜绿假单胞菌检验程序检验方法v直接镜检：G-杆菌v分离培养：在普通培养基生长良好， 经1824h形成圆形、扁平隆起、湿润菌 落。琼脂被染成绿色或黄绿色，约80- 90产生绿脓素或荧光素。在血平板上表 现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐
9、； 有金属光泽；有生姜样芳香气味；菌落周 围有宽大的兰绿色透明溶血环。检验方法v鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，O-F试 验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶， 还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸 橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。v 铜绿假单胞菌快速鉴定要点：vv1 1、能产生绿色素。、能产生绿色素。vv2 2、血平板上菌落大而扁平、湿润、边缘、血平板上菌落大而扁平、湿润、边缘 不齐；有金属光泽；有生姜样气味；菌不齐；有金属光泽；有生姜样气味；菌 落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。vv3 3、氧化酶阳性、氧化酶阳性 90%90%检验结果分析与报告vv1.1.结合感染症状，
10、在血、尿及无菌体液中结合感染症状，在血、尿及无菌体液中 检出特别是重复检出即可确定为病原菌。检出特别是重复检出即可确定为病原菌。vv2. 2. 若无感染症状，特别是儿童，检出的革若无感染症状，特别是儿童，检出的革 兰阴性杆菌可视为正常菌群。兰阴性杆菌可视为正常菌群。vv3.3.注意铜绿假单胞菌的耐药性注意铜绿假单胞菌的耐药性。马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌v属于rRNA第II群v鼻疽病与类鼻疽病的病原体v2004年NCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌v（ 炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战
11、剂之一。平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌v两菌均人兽共患病原菌v人类感染是经伤口、粘膜、呼吸道v急性患者可有高热、衰竭等全身症状v肺鼻疽病 、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症 临床意义（鼠疫耶尔森菌（鼠疫耶尔森菌, ,炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌, ,布鲁菌属布鲁菌属, ,巴斯德菌属和弗朗西斯菌属等）巴斯德菌属和弗朗西斯菌属等）生物学特性 v革兰阴性杆菌 v无芽胞、无荚膜v伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(14根)， 4不能生长v马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42不生长微生物检验v分离培养与鉴定 v需氧菌v生长温度35v普通培养基、血琼脂、麦
12、康凯v生化鉴定v荧光直接法染色镜检，可快速诊断嗜麦芽窄食单胞菌分 类v 分类曾经过两次反复 ，最终定为假单胞菌属 。临床意义v分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低 下患者呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染 ，严重者可出现菌血症和心内膜炎。假单胞菌的感染中居第二位，非发酵菌所致 的感染中居第三位。微生物特性vG-杆菌，具有端鞭毛1-8根，有动力，无芽孢 无荚膜。微生物检验v标本采集：血液标本先增菌 后分离培养，其他标本直接 接种。v分离培养：营养需求不高， 在血平板和普通琼脂平板上 生长良好，经35培养18- 24h后可形成中等大小、圆形 、光滑、湿润、不溶血的菌 落，并可产黄色色素。 4 不生
13、长，42 近半数生长。 并在MAC平板上生长良好。微生物检验v鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（+），七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（+），氧化分解葡萄糖。药敏试验v含内酰胺酶。v 临床治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素（磺 胺嘧啶，环丙沙星）。v 对亚胺培南天然耐药 鉴定实验v 不用K-b法做药敏试验。嗜麦芽窄食单胞菌初步鉴定要点v在血平板和MAC上生长良好v氧化酶（-）v OF试验氧化型v 赖氨酸脱羧酶阴性v 可产黄色色素v 抗生素的敏感方式不动杆菌属分 类v定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不 能运动的G-杆菌。v属奈瑟菌科v 17个杂交群v 临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发 酵菌的第二
14、位，仅次于铜绿假单胞菌。临床意义v分布广泛v 条件致病菌v 医院感染的常见病原菌微生物特性vG-球杆菌，常成对排列，也可单个存 在。无芽孢，无鞭毛，粘液型菌株有 荚膜。奈瑟菌科。v营养要求一般，在普通琼脂平板和 MAC平板上均能生长。 SS平板上部 分菌株可生长。脓汁、分泌物、尿液脑脊液、血液直接涂片 革兰染色分离培养 血液琼脂平板 麦康凯琼脂平板增菌培养挑选可疑菌落最后鉴定 生化反应初步鉴定 KIA：底层、斜面不变氧化酶硝酸盐还原动力35 37 18h-24h不动杆菌属检验程序微生物检验v标本采集：对于含菌量较多的标本采取直接 接种血平板和麦康凯平板，含菌量较少的标 本需增菌后再培养。v直接
15、镜检：标本经革兰染色后镜检可见G-球 杆菌常成双排列，并可见白细胞吞噬现象。v 抗原检测和分型：微生物检验v分离培养：血平板形成圆形、灰白 色、光滑、边缘整齐、直径2-3mm 的菌落。洛菲不动杆菌菌落小，1- 1.5mm。溶血不动杆菌可出现溶 血。MAC平板生长良好，鲍曼不 动杆菌可呈轻微红色。v鉴定：氧化酶（-）、动力（-）、 硝还（-）药敏试验和结果解释v 可采用K-B法药敏试验v 鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代 头孢菌素和一代奎诺酮类抗生素天然耐药。鲍曼不动杆菌初步鉴定要点vOF试验：O/-vMAC 上生长良好，菌落呈轻微粉红色v 氧化酶（-）v快速分解葡萄糖和乳糖v 无动力v
16、对青霉素耐药产碱杆菌属v1.与临床有关的有粪产碱杆菌及亚型、皮乔特产碱 杆菌、木糖氧化产碱杆菌及亚种，DNA G+C mol%为 5670，典型菌种为粪产碱杆菌。v2.人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起 抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、 尿液、血液及脑脊液中分离出来。产碱杆菌属v3.为G-杆菌，呈链状、周鞭毛、有动力，无 荚膜。 v4.在普通培养基上1824h形成无色透明菌落 。氧化酶及触酶均阳性，不分解任何糖类，O -F试验碱性，脲酶阴性，不液化明胶。 生物学特性v革兰阴性杆菌v周鞭毛、有动力v最适生长温度为2535v普通培养基生长分离培养与鉴定vpH至8.6为本菌特点v氧化酶阳性v触酶阳性v不分解任何糖类v O-F基础培养呈碱性v脲素酶阴性v不液化明胶黄杆菌属v1.为一群无动力和无芽胞、氧化酶阳性的G-杆菌 。与临床相关菌种有短黄杆菌、脑膜
