蛙的系列实验

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1、蛙的系列实验实验目的1.学习坐骨神经腓肠肌标本的制备技术。2.了解蛙微循环区各类血管血流特点及某些药物对血 管舒缩活动的影响。3.了解脊髓反射和反射弧的组成及反射弧各部位的作 用。4.了解迷路在维持动物姿势平衡和正常运动中的作用 。5.初步培养学生合理利用实验材料进行综合实验的能 力。 1蛙类心跳起源的分析。2蛙类微循环的观察。3脊髓反射和反射弧的分析。4蛙一侧迷路破坏的效应。5蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备。 实验内容（供选择）材料与用品 （一）材料活蛙（限1人1只蛙）。（二）用品显微镜、解剖器具、毁髓针、玻璃针、蜡盘、有孔橡皮蛙 板、铁支架、细铁丝钩或蛙嘴夹、电炉、温度计、秒表、注射 器、小

2、烧杯、大烧杯、滴管、培养皿、大头针、纱布、棉球、 细线、小滤纸片。0.65%生理盐水、0.01 %去甲肾上腺素、 0.01%组织胺、20%氨基甲酸乙酯、1可卡因、任氏液、0.5 、1和2%硫酸溶液、瑞氏染液、蒸馏水、冰水、水。 操作与观察（具体实验项目及其顺序由学生自行选择和安排） 1左手握蛙，背部向上，用食指下压其头部前端，使头前俯 ，中指抵住其胸部，拇指按其背部，使头与脊柱相连处凸起。 右手持毁髓针自两眼之间沿中线向后端触划，当触到一凹陷处 即枕骨后凹。2将毁髓针由凹陷处垂直刺入，再将针尖从枕骨大孔向前刺 入颅腔，并在颅腔内搅动，捣毁脑组织。如针确在颅腔内，则 可感到针触及颅骨（图161）

3、。3将针退回至枕骨大孔，然后针尖转向后方与脊柱平行插入 椎管，一边伸入，一边旋转毁髓针以毁髓。当蛙四肢僵直而后 又松软下垂时，即表明脑和脊髓完全破坏。如动物仍表现四肢 肌肉紧张或活动自如，则必须重新毁髓。4拔出毁髓针，用一小干棉球将针孔堵住，以止其出血。（一）双毁髓（二）心搏起源的分析1暴露心脏(1)将双毁髓蛙背位置蜡盘中，展开四肢，用大头针于腕部 和跄部钉人，以将蛙固定在蜡盘中。*为什么用双毁髓蛙进行 心搏起源的分析？(2)左手持镊提起胸骨后方腹部皮肤，右手持剪剪开一小口 ，然后将剪刀由切口处伸入皮下，向左右两侧锁骨的外侧方向 剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。(3)再用镊子提起胸骨后方的腹肌，用

4、金冠剪在腹肌上剪一 小口后，沿皮肤切口方向剪开胸壁， *剪时剪刀尖紧贴胸壁， 以免损伤内脏和血管，剪断左右乌喙骨和锁骨，剪去胸壁，使 创口成1个倒三角形，此时可见到心脏在围心腔内搏动。(4)左手持眼科镊提起半透明围心膜，右手用眼科剪剪开围 心膜，暴露心脏。 *以下实验中应不时用任氏液保持心脏湿润 。为什么？ 2观察心脏的构造（图162）参见本实验“蛙的外形及内部构造”中“心脏及其周围血管”部 分。3观察心搏过程观察静脉窦、心房和心室收缩的顺序，并用秒表记录心搏频 率。注意心室收缩时容积和颜色的变化。4不同温度刺激蛙心各部位用盛有约40 。C温水的小试管底部分别接触心房、心室和静 脉窦1 min

5、，重复3次并记录每次温度刺激时心脏各部位的搏动频 率。换用盛冰水的小试管，重复上述试验并记录。 *小试管底 部接触所刺激部位时，不能接触到心脏其他部位，以免影响实验 结果。根据实验结果，分析心脏何部位的搏动为心搏的起源。 5斯氏结扎(1)用眼科镊在左右动脉干下穿一线备用，将心尖翻向头端 ，暴露心脏背面，然后将放置在动脉干下的那条线在窦房沟处 作一结扎（图163），即为斯氏第1结扎（图162A）：观察 心脏各部分搏动节律的变化，可见心房、心室立即停止搏动， 而静脉窦仍继续搏动，用秒表记录静脉窦搏动频率。待心房和 心室恢复搏动后，分别记录它们的搏动频率。(2)然后在冠状沟处穿线做第2结扎，即斯氏第

6、2结扎（图16 2B）。这时心房和静脉窦仍继续搏动，心室则停止搏动。待 心室恢复搏动后，记录心脏各部位的搏动频率。 *根据试验结 果，分析蛙心脏不同部位节律性的高低，正常情况下心脏节律 活动的顺序。 （三）蛙类徽循环的观察蛙的肠系膜、舌及后肢足蹼等部位的组织较薄，适于用来 制备微循环观察标本。1蛙肠系膜标本的制备(1)取蛙I只，称重后于其皮下淋巴窦注人20%氨基甲酸乙酯 (23 mg /g体重)，约1015min，动物即进入麻醉状态。(2)将已麻醉的蛙背位固定于蛙板上，使其身体左侧紧靠蛙 板上的小孔。用镊子轻轻提起左侧腹壁， *不要将内脏也夹起 。再用剪刀在腹壁上剪一长约1cm的纵向切口。轻轻

7、拉出小肠拌 ，将肠系膜展开过蛙板上的小孔，并用大头针固定在蛙板上（ 图164）。 *小肠拌不能绷得太紧，以免拉破肠系膜或阻断 血流，另需要适量任氏液润湿肠系膜，以免干燥，影响血液循 环。 2若用蛙舌或足蹼作观察标本，则用大头针将麻醉的蛙固定 在蛙板上，使其鼻端离板孔0.5 cm，拖出舌头，拉紧过孔，并 用大头针将舌缘固定在蛙板孔的周缘；或将蛙两足趾展开，使 趾蹼过孔，用大头针固定。3观察 将标本置低倍镜下观察。可见有许多纵横交错粗细不等的 血管。根据血管的粗细和分支情况、血流方向和血流特征，可 区别小动脉、小静脉和毛细血管。(1)动脉血流的观察 在镜下移动标本直到发现一段较 粗血管内的血液流向

8、2分支血管，这段血管就是小动脉。注意观 察管中血流速度快，不均匀，有搏动，有轴流现象（血细胞在 血管中央流动）。 (2)静脉血流的观察 移动标本真到发现血流由2支血管汇 人1支血管，这2个分支血管就是小静脉，观察管内血流有无搏 动和轴流现象，比较动脉和静脉内血流的速度。(3)毛细血管血流的观察 寻找管径最小、透明、近乎无色 的血管即毛细血管。在高倍镜下可见一串串红细胞以单个排列 形式在管内移动，或红细胞断断续续地单个移动。血流速度如 何？有无搏动？* 3类血管的形态和血流特点与其生理功能有何联系？ 4血管对药物的反应(1)滴加几滴0.01%去甲肾上腺素于肠系膜上，持续观察各血 管管径及血流的变

9、化。出现变化后立即用任氏液冲洗。(2)待血流恢复正常后，再滴加几滴0.01组织胺于肠系膜上 ，观察血管及血流的变化。若用蛙蹼作为观察标本，则难以观 蔡血管对药物的反应。 （四）蛙类一侧迷路破坏的效应1将蛙放在桌面上和水盆中，观察其正常的姿势和运动。2破坏蛙的一侧迷路并观察其效应。(1)用纱布包住蛙躯干部，使其腹面向上握于左手中，翻 开下颌用左手拇指压住。右手持手术刀在颅底口腔粘膜作一横 切口，分开粘膜，即可看到“十”字形的副蝶骨。迷路即位于副 蝶骨横突的左右两旁（图165）。(2)用手术刀削去一侧横突的骨质，可看到粟粒大小的小 白点，此处即是内耳囊。将毁髓针刺人内耳囊23mm，勿刺得 太深，以

10、免损伤中枢神经，转动针尖，搅毁其中的迷路。(3)静待数分钟后，观察蛙在桌面上的姿势和运动；将蛙 放在水盆内，观察其游泳动作。比较手术动物与正常动物的姿 势和运动。 *内耳迷路有何功能？ （五）脊髓反射及反射弧的分析1制备脊蛙（无头蛙）(1)断头法:左手持蛙，右手持粗剪刀从蛙右侧口角处插入（ 如图中“x”所示）上、下颌之间，沿两眼后连线剪去头颅，即成 脊蛙。用蘸有0.65生理盐水的脱脂棉覆盖在伤口上，避免伤 口干燥，但不要将脱脂棉从伤口塞人，以免造成脊髓的兴奋状 态。(2)毁蛙脑 :按本实验“双毁髓”法操作，但只捣毁脑组织。 *不能损伤脊髓，以免破坏反射中枢。2脊蛙处理用铁丝钩穿过脊蛙下颌（或用

11、蛙嘴夹夹住脊蛙下颌），悬 挂在支架上，用烧杯内清水浸洗蛙体，使皮肤湿润，防止于燥 ， *为什么？刚施过手术的脊蛙，立即进入无反应的休克状态，不能马 上进行实验，待蛙体安静510 min后，其脊髓反射逐渐出现 。 *如冬季做此实验，应事先将蛙放在3040。C温水里浸浴2 3 min，以增强其代谢，保证实验效果。3脊髓反射的观察 (1)屈反射:将蛙右后肢最长趾浸人培养皿内0.5%硫酸溶液中， 右后肢收缩。立即用烧杯内清水洗净脚趾上的残余硫酸，并用 纱布轻轻擦干，重复该试验，用秒表记录从趾尖浸入起到屈反 射出现所需时间，重复3次，求其平均值，此值即为反射时。 *以下每项实验后均要及时用清水将蛙体上残

12、余硫酸洗净。为 什么？用同样方法刺激蛙左后肢脚趾，也出现屈反射。 (2)搔扒反射:用浸有1硫酸溶液的滤纸片贴在蛙左侧背部 皮肤上，蛙立即用左后肢除去纸片，记录反射时。把滤纸片贴 在蛙右侧背部，右后肢也同样除去纸片。 4反射弧的分析(1)在蛙右后肢踝关节上方，用眼科剪将皮肤作一环形切口， 再用镊子剥去切口以下皮肤， *趾尖皮肤应除净。稍停，再 用0.5 %硫酸刺激去皮脚趾，观察右后肢动不动， *为什么？(2)将浸有2硫酸溶液的滤纸片贴在该切口以上的皮肤上，观 察右后肢有无反射发生， *说明什么？(3)取下脊蛙，将它腹位固定在蜡盘上，使其趾端向外侧翻转 ，足底朝上。沿肢体方向剪开左侧股部皮肤，用玻

13、璃针分离肌 肉和结缔组织，在股二头肌和半膜肌的肌间沟内有1条白色较 粗的神经（图168A），即坐骨神经。在坐骨神经下穿1条细 线。用线将神经提起， *活标本的神经不能用金属镊子夹持 。在神经下放1团浸有1可卡因（局麻药）的棉花，记录时间 。重新将脊蛙挂在支架上 (4)每隔1min将蛙左后肢最长趾浸人0.5%硫酸液中，观察其 有无屈反射，直至屈反射不再出现，并记录时间。 *为什么 屈反射不再出现？立即将浸有2硫酸的滤纸片贴在蛙左侧背 部皮肤上，观察左后肢有无搔扒反射。 *若有搔扒反射，说 明什么？每隔1min重复上次该刺激，直到左后肢搔扒反射不再 出现，记录时间。比较从给药到屈反射消失和给药到搔

14、扒反射 消失的反射时， *说明什么？(5)毁脊髓:用镊子夹右后肢，当确实看到右后肤屈反射 时， *为何要做此检测？从支架上取下脊蛙，将毁髓针由原 进针处插入，然后针头向后插入椎管，捣毁脊髓（参见本实验 “双毁髓”法）。垂复酸刺激，观察有无反射发生。 *分析原 因。 （六）蛙类坐骨神经一腓肠肌标本的制备1剥制后肢标本左手持蛙两前肢，右手用剪刀在蛙体前部横向剪开皮肤一 周，剥离身体下部及后肢的皮肤。然后左手持蛙两后肢足部， 倒置蛙体；右手持剪剪开腹壁，将内脏向头端剥离，并于泄殖 腔处剪去内脏， *勿伤及神经。暴露脊柱两旁的坐骨神经丛， 在该丛的前方剪断脊柱，将身体前部、内脏连同皮肤一并弃去 ，仅保

15、留一段腰骶部脊柱连同后肢。将标本放入盛有任氏液的 烧杯中，清洗手及解剖器械上的污物， *为什么要这样处理？2分离两后肢用蘸有任氏液的左手托起标本，右手持金冠剪沿脊柱正中 线纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧），并剪开耻骨联合，使两 后肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制，另一只置任氏 液中备用。 3分离坐骨神经取一侧后肢标本，脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，足 底朝上固定在蜡盘上。用玻璃针沿坐骨神经走向分离神经，并用眼科剪剪去小分 支。再循股部坐骨神经沟（股二头肌及半膜肌之肌间沟）细心 分离坐骨神经至腘（图168A）*不能用金属器皿触碰神经干 。剪去肌肉及大部分脊柱骨，只保留坐骨神经发出部位的一小

16、 段脊柱骨。4分离股骨头左手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，用金冠剪 自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉。在股骨近膝关节1 cm处剪 断股骨。 5游离腓肠肌用手术镊在腓肠肌跟腱下穿线，并结扎。提起结扎线，剪 断肌腱与腓肠肌的联系，游离腓肠肌至膝关节处。剪去膝关节 下部的后肢，保留腓肠肌与股骨的联系，即制成完整的坐骨神 经腓肠肌标本。标本应包括坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨4部分 （图168B）。6检查标本的兴奋性左手持镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开蜡板，右手用 蘸有任氏液的锌铜弓的两极接触标本的坐骨神经，如腓肠肌立 即收缩，则表明标本的兴奋性良好。然后将标本放人任氏液中 。*制备标本过程中，要经常用任氏液湿润去皮肤标本，为什么 ？ 作业与思考 1.根据蛙类心搏起源分析的实验结果说明两栖类心脏的起搏 点是静脉窦。2制备蛙坐骨神经一腓肠肌标本时，如何保持标本的机能正常