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1、药敏试验及药敏试验 结果分析 一、药敏试验一、药敏试验 MIC：在与微生物生长速率有关的特定 时间间隔内，通常是1824小时，能够抑制被测菌生长的最低药物浓度。 对倍稀释的优点： 操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群药敏试验折点的建立药敏试验折点的建立 1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 定抑菌圈折点 统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差 (假敏 感率)MICMIC的分布的分布药代动力学和药效学药代动力学和药效学 药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 药效学：药物对机
2、体的作用 时间依赖型（TMIC：内酰胺类，大环内酯类 浓度依赖型（AUC/MIC比率：AGS, FQ 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案MICMIC与抑菌圈直径的线性关系与抑菌圈直径的线性关系耐药 中介 敏感RISLog2. MICD 1 d2 抑菌圈直径（mm)v抑菌圈直径与抑菌圈直径与MICMIC的关系的关系不同国家的不同国家的判定折点判定折点 可能不同可能不同 原因： 用药剂量不同，服药的间隔不同 评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群） 技术因素：接种、培养基敏感性分类敏感性分类(NCCLS(NCCLS的的定义定义) )敏感（Susceptible） 用常规用量治疗
3、有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的 MIC 5倍以上。耐药（Resistance） 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度敏感性分类（敏感性分类（2 2）中介 (Intermediate)MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗 反应率低于敏感株 药物生理浓集部位有效 (尿FQ) 加大用药剂量可能有效缓冲区：防止操作的系统误差造成重大结果的判定错误药敏试验的方法学药敏试验的方法学 半定量纸片扩散法 (抑菌圈直径) MIC法： 稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪药敏试验方法的选择药敏试验方法的选择 纸片法有独
4、特之处 选药灵活、便宜、易懂 MIC法：商品肉汤法 (自动化法) 可用于厌氧菌、苛氧菌 计算机管理 快速，但可能有错误（如诱导型菌） 新药的评价药敏试验方法药敏试验方法1 1（纸片扩散法（纸片扩散法 材料：浸有一定Abs的干燥的园滤纸片 步骤：制备菌悬液涂平板贴纸片孵 育卡尺测量抑菌圈直径判定R、I、S 优点：选药灵活、便宜、一个平皿可测多 个药 缺点：影响因素多 适用于快生长菌、部分苛养菌纸片扩散法影响因素纸片扩散法影响因素MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间纸片扩散法标准化纸片扩散法标准化NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Com
5、mittee for Clinical Laboratory Standards) 每年修订更改 包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测NCCLSNCCLS的法规的法规 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平皿厚度、判定标准、质控 规定常规测试报告的抗生素 不同的药判定标准不同 不同的菌判定标准也不同常规测试并报告的药物分组常规测试并报告的药物分组(1)(1)肠杆菌科绿脓和非肠杆菌科一 级 氨苄头孢他啶唑林，庆大庆大，替卡，哌拉 二级 阿米卡星阿米卡星氨苄/舒，阿莫/克吡肟，哌酮，氨曲 南头孢肤肟，头霉环丙，亚胺培南， 替卡/克噻肟，曲松，环丙妥布，磺胺亚胺培南，替卡，哌拉 三级 氨曲南，头孢
6、他啶头孢曲松卡那，奈替，妥布氯霉素，奈替四环素，氯霉素 常规测试并报告的药物分组常规测试并报告的药物分组(2)(2)葡萄球菌肠球菌 一级 苯唑，青霉素青霉素，氨苄 二级 红霉素类万古霉素克林，万古 三级 氯霉素庆大常规测试并报告的药物分组常规测试并报告的药物分组(3)(3)流感嗜血杆菌肺炎链球菌 一级 氨苄，青霉素青霉素，红霉 素TMP/SMZ TMP/SMZ 二级 头孢肤肟，噻肟氧氟，四环素他啶，氯霉素 万古霉素 三级 阿奇，头孢克罗氯霉素，利福 平环丙，亚胺培南利福平，四环 素预报用药预报用药( (一一) )测试药菌名推测其它药物的敏感 性 苯唑西林 葡萄球菌所有内酰胺类 四环素所有（除葡
7、多西环素，米诺环素萄球菌和不动杆菌 红霉素G球菌罗红，克拉，阿奇 克林霉素所有林可霉素预报用药预报用药( (二二) )测试药菌名推测其它药物的敏感性 氨苄西林肠球菌青霉素 青霉素G葡萄球菌氨苄，美洛，替卡 头孢噻吩肠杆菌科拉定，头孢氨苄，克罗 奈啶酸s肠杆菌科所有FQs 万古霉素s所有替考拉宁s纸片扩散法操作规程纸片扩散法操作规程( (一一) ) 培养基：MH (重复性好，低抑制剂，营养 好) 厚度：4mm PH：7.27.4 pH低时，氨基糖甙,大环内酯 pH高时，青霉素类的活性 离子浓度 (Ca 2+ , Mg 2+ ) 影响 氨基糖甙类、四环素对Pae活性 高时，抑菌圈；纸片扩散法操作规
8、程纸片扩散法操作规程( (二二) ) 接种： 纯的新鲜菌落，0.5号麦氏比浊管 菌悬液在15分钟内种入平皿内 纸片中心的间距=24mm 孵育：CO2影响Ags, Tet, Macrolides 质控: ATCC25922, 35218 ATCC27853, ATCC25923纸片扩散法结果的判定纸片扩散法结果的判定1. 先看菌名（鉴定到种2. 不同的药物使用不同的折点药名菌名RS菌株1 菌 株2Pip/Taz 绿脓171816R 30SCAZ绿脓 141816I 19S3. 同是S时，偏离敏感折点越高的药, MIC越低，活性也越高抑菌圈的分布抑菌圈的分布抑菌圈的分布抑菌圈的分布非非NCCLSN
9、CCLS系统的扩散试验系统的扩散试验方法国家学会培养基评论 比较法 UKBSACIso-Sensitest 不校正 MICs Stokes UKBSACIso-Sensitest 不校正 MICs SFM法国SFMMH与NCCLS 相近 DIN德国DINMH与NCCLS 相近 SIR瑞典SMSPDMASM MIC相关值 低Neo-sensitabs丹麦、比利时MH药片，易保 存 双歧澳大利亚Sensitest无中介药敏试验的错误来源药敏试验的错误来源( (一一) ) 每个系统特有的局限性 （快生长菌 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片20) 操作步骤 纯菌、35、
10、1628h 葡萄球菌、肠球菌 24h药敏试验的错误来源药敏试验的错误来源( (二二) ) 体内、体外试验的不一致性 某些菌测某些药，结果有误 头孢菌素、氨基糖甙类：沙门菌、志贺菌 头孢菌素：李斯特菌属 头孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：肠 球菌 Beta内酰胺类：MRS 即使敏感，也应报告耐药问题菌和耐药机制问题菌和耐药机制 有些菌无标准化的药敏试验 棒杆菌、芽胞杆菌、气单胞菌、巴斯德菌 某些耐药机制需要多种检测方法 诱导型：VanB, Bush I型酶 MRS的异质型表达 ESBL 药敏可能无法检出新出现的耐药，VISA药敏试验方法药敏试验方法2 2肉汤稀释法肉汤稀释法4 816 32
11、 64 128 256 ug/ml 混混 清抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml ， 孵育35， 16-20h，判读药敏试验方法药敏试验方法2 2肉汤稀释法肉汤稀释法 调节离子浓度的MH肉汤 宏量肉汤法（2ml, 13x100mm ） 微量肉汤法 （ 0.1ml, 微量板） 自动化仪 优点：准确，可靠，可用于研究 缺点： 劳动强度大 细菌生长情况不可查药敏试验方法药敏试验方法3 3琼脂稀释法琼脂稀释法浓度 16 32 64 128 256 ug/ml 制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液， 点种菌，104/每个点，孵育，判读结果药敏试验方法药敏试验方法3 3琼脂稀释法琼脂稀释法优点：金
12、标准 精确可靠 可同时测定多株菌（40株） 细菌生长情况可查 缺点： 测多个药时劳动强度大 制备平皿费时费力药敏试验方法药敏试验方法4 4E test E test 法法细菌生长 区E test 塑料 条椭圆形 细菌生长 抑制区256 1288016判读抑菌浓度 （MIC ug/ml)药敏试验方法药敏试验方法4 4E test E test 法法 优点 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 影响因素少，稳定性高 操作简单，省时 缺点：昂贵 用途：快生长菌，苛养菌，厌氧菌，酵母 菌， 分枝杆菌评价药物体外抗菌活性的指标评价药物体外抗菌活性的指标 MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC
13、范围，R，I，S MIC50/ MIC90：MIC从小到排列，位于第50 / 90百 分位菌株的MIC值 单纯比较MIC50，MIC90是片面的，还要同时看平 均MIC及MIC范围 同时结合R，I，S，（不同药物血浓度不同，安全范围不同抗生素细 菌人 体 RESISTANCEPHARMACODYNAMICSINFECTIONIMMUNITYSIDE EFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、细菌、人体Slide noSlide no4040Time above MICTime above MIC Correlation of serum pharmacokinetics with
14、MIC (susceptibility)Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organismof an organismTime above MICTimeAntibiotic concentration (ug/ml)2Drug ADrug BABDrug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing intervalDrug B present at concentration of 2 ug/ml for 30% of dosing interval4680Relationship between Time above MIC Relationship between Time above MIC and and efficacy in animal infection modelsefficacy in animal infection models020406080100020406080100Time above MIC (%)Penicillins CephalosporinsMortality after 4 days of therapy (%)Craig. Diagn
