酶工程酶的生物学功能

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1、 酶酶与酶与酶工程工程 ENZYME AND ENZYME ENGINEERING 罗九甫 04-2酶（enzyme)是生物体活细胞产生的 、具有催化反应功能的蛋白质。近百年来，对酶的研究一直是沿两个方 向发展而取得成果：（一）、理论研究方向脲酶结晶的获得与蛋白质本质锁匙学说与诱导契合学说中间络合物学说与酶促反应动力学酶作用机理（酶理化性质及催化性质）的研究酶蛋白质一级结构测定方法酶蛋白分子结构与功能的关系（二）、从应用研究来看1、酶制剂的分离、提纯、大批量生产及新酶的开发；2、酶生产中的基因工程技术的应用；3、酶分子的改造(修饰、模拟与抗体酶等）；4、酶与细胞的固定化；5、酶制剂的应用性开发

2、；6、生物催化；7、酶抑制剂、激活剂开发及应用研究；8、酶反应器的研究（包括反应检测、酶传感器）；特别是20世纪中期，随着微生物发酵技术和酶分离 纯化技术提高，酶制剂生产开始走向规模化。固 定化技术、基因工程技术的应用、使酶的适应性 更加提高，多种类型的酶制剂（固定化酶、人工 酶、抗体酶、化学修饰酶和模拟酶等）实现了产 业化。酶在工农业、人口与健康（医药食品）、 环境保护等方面的应用日益广泛。酶制剂已成为现代生物产业中一个不可缺少 的组成部分，酶工程技术已成为生物工程技术的 主要支柱之一。所以，加强酶学理论的研究及应 用技术的开发，已成为现代生物技术的主题。概括地说酶学是生物化学的重要分支；

3、酶工程（Enzyme Engineering）是生物工程的主 要内容之一，是随着酶学研究迅速发展、特别是 酶的应用推广，使酶学和工程学相互渗透结合， 发展而成的一门新的技术科学。 现代生命科学的前沿课题如生物信息学、基因 组学、结构生物学等无一能离开酶。 酶及其转化产品是生物工程产业的主导产品。我们为什么重视酶？n生命活动离不开酶；n酶在现代生命科学研究中的重要作用；n酶制剂与人类衣食住行休戚相关；n生物催化改造传统产业课时：36学时教材：酶学（复旦大学出版社）罗九甫: 62932942 54744350本课程教学指导思想适应现代社会发展需要的人才三要素： 知识-专业、人文；能力-外语、计祘

4、机、自学能力；素质-人品、善于规范自己和与人际沟通合作 ； 所以授以鱼莫如授以渔加强参与性、体现主动学习第一章 酶的基础知识1、酶的生物学作用2、酶的结构与催化机制3、酶活性的调节方式4、酶分析法第二章 酶的生产与改造5、酶的生产与分离纯化6、酶分子修饰与模拟7、酶的固定化8、抗体酶课时安排（15讲）第三章 酶制剂工业及其应用9、酶制剂工业及应用10、酶在现代生命科学研究中的应用11、酶抑制剂与药物设计第四章 生物催化12、生物催化改造传统产业实例 13、酶法生产-14、手性化合物的生物合成与转化15、酶反应器、生物传感器（21世纪酶工 程进展）主要参考书：酶学 陈石根 周润琦编著 复旦大学出

5、版社 现代酶学 袁勤生主编 华东理工大学出版社 酶工程 罗贯民主编 化学工业出版社 酶制剂工业 张树政主编 科学出版社 酶和酶工程 罗九甫编 上海交通大学出版社作业选题一、某种酶制剂（如端粒酶、溶菌酶、几丁质酶、尿激酶等） 二、酶法生物转化生产某产品（如苯丙氨酸、丙烯酰胺、某氨基酸等） 三、酶的生物学作用如：酶与疾病（如Hiv病毒、蚕豆病、遗传病等）酶与代谢、遗传、DNA修饰等 四、酶的应用如：工具酶酶电极原理及其应用（葡萄糖氧化酶电极或尿酶电极等） 酶在环境治理与检测、医药临床、食品、轻工等酶抑制剂与药物设计 五、酶的基本知识与基本理论如：酶与细胞的固定化、酶的生产、纯化、分析、动力学、酶的

6、辅助因子等 六、酶研究动态如：抗体酶、手性化合物酶法拆分、酶的修饰和模拟酶与分子生物学、21世纪酶研究进展等酶的种类很多，至今生物界已发现的酶 达3000多种，一些单细胞生物体中至少含有 数百种以上，人体细胞含酶种类更多。目前 人体内已确认的酶有1000多种，相互有关联 的酶组成酶体系，分布在特定的细胞组分中 参与肌体的代谢活动。生物体内的各种物质代谢、能量传递、 信息转录、神经传导、免疫调节、细胞衰老 及生长发育等等，都离不开酶的参与。可以 说没有酶便不能进行新陈代谢，便没有生命 。第一节 酶的生物学功能在生物体内，许多复杂化学变化都按一定 途径，根据生命活动需要进行得极为顺利，相 互联系又

7、相互制约，迅速而又有条不紊。这种 使化学变化变得容易发生和迅速进行的根本原 因，就是生物体内普遍存在着生物催化剂酶 。可以说离开了酶在生物体内的催化作用，生 命也就停止了。 苯酮尿症（PKU症）苯丙氨酸羥化酶（苯丙氨酸4-单加氧酶）缺乏症苯丙氨酸 + -酮戊二酸 苯丙酮酸 沙林试剂（甲氟磷酸异丙酯） 作用于传递神经细胞间信号的胆碱酯酶，1毫克足以麻痹呼吸肌 有机磷、氰化物、重金属等中毒抑制体内含巯基（-SH）的酶 蚕豆病（G6PD缺乏而引起红细胞膜蛋白受损易惹发溶血） 6-磷酸葡萄糖 NADP 2GSH（还原型） 蚕豆细胞毒素 （香豌豆嘧啶异尿咪） 磷酸戊 谷胱甘肽糖途径 还原酶G6PD NA

8、DPH H6-磷酸葡萄糖酸 GSSG（氧化型）（正常时GSH与GSSG之比为500，保护血液中红细胞不受氧化损伤并消除H2O2的毒害）一、酶在生物体内所催化的形形色色的 化学反应，按生理功能可归纳为四类：1、执行某种具体的生理功能；2、担负保卫清除功能；3、协同激素起生物信号放大作用；4、催化和调控代谢反应。1、执行某种具体的生理功能例如： 神经传导是由神经末稍中的乙酰胆碱酯 酶来传导神经冲动的； 肌纤-ATP酶和肌肉收缩有关； Na+、K+-ATP酶在细胞膜的主动运输中的“钠泵作用”。Na+、K+泵模式图2、担负保卫清除功能 （可能是单个酶、或多酶混合物、或一个酶系通过级联 系统发挥作用）例

9、如： 能直接移除自由基O2-，防止毒性过氧 化脂质生成的超氧化物歧化酶(SOD) ； 能降解外来DNA的限制性内切酶(RD) 。 凝血酶； 溶酶体的水解酶；3、协同激素起生物信号传递与放大作用细胞外信号传递的两种方式: 信号分子在胞外与质膜载体蛋白结合,直 接进入靶细胞,然后以信号分子本身或以其转 化产物作为细胞内信号发挥作用（如疏水的甾 体激素）； 信号分子在胞外与质膜上的受体蛋白结合 ,导致后者发生构象改变, 在胞内形成新的信 号分子第二信使（AMP和Ca+2等)，再通 过相应的酶，调节靶细胞性态;（包括亲水性 的大部分腺体分泌的激素、神经传质、和局部 化学调节物质）例:以腺甘酸环化酶为例

10、(受体、腺苷酸环化酶 、 cAMP和蛋白激酶体系)：被激活的腺甘酸环化酶催化ATP形成cAMP, cAMP 作为第二信使激活蛋白激酶，从而引起细胞内部 功能一系列的变化。（cAMP是中心环节，其形成 与分解由腺苷酸环化酶与磷酸二脂酶调节控制） 。腺甘酸环化酶协同肾上腺素激活糖 原磷酸化酶4、催化、调控代谢反应 酶最主要、也是最基本的生物学功能就是催 化调控代谢反应；建立起各种代谢途径和体系， 为生物体的生存发展、为形形色色的生命活动提 供物质基础和能量来源。 正常情况下，生物体并不要求每个酶处于最有 效的催化状态，而是要求有快有慢，适应内外环 境的变化； 酶在生物体内催化作用是通过调控来实现的

11、， 一个失去调控能力的酶是无意义的、甚至是有害 的。在长期的进化、选择过程中，为适应外界 环境变化，满足生理功能的需要，生物体形成 了一整套调节机制。可分为两大类调节机制：1、酶合成水平上的调节；2、酶结构活性水平上的调节；不同的调控机制纷纷提出： 共价修饰调节（可逆，不可逆）； 反馈调节（别构调节）； 存在方式调节（多酶体系）； 浓度调节（ 合成降解调节)； 生理调节(激素调节)； 寡聚酶的聚合、解聚调节； 外部条件调节（抑制与激活、pH、辅酶浓度、金属离子等）。二、酶的生物合成所有的酶都由生物体合成，几乎所有生物都 能合成产生酶酶在生物体内的合成总是受其相应合成调节 机制控制，以保证机体最

12、有效、经济地将体内合 成原料与能量用于自身生命最需要的酶等物质。 1、酶基因表达的中心法则1958年由Crick提出的基因表达的 中心法则（DNA central dogma）认为：蛋白质生物合成完全受控于DNA, DNA控制着 蛋白质合成的遗传信息，其本质是将DNA传递到 mRNA的遗传信息，在tRNA及一系列其他蛋白因子 的参与下，将其翻译成多肽的过程。DNA 转录 mRNA 翻译 蛋白质中心法则指出：A. 酶基因以密码形式编码在DNA分子上。B. 酶基因表达的调控环节是转录。原核生物的转录过程较为清楚，我们以原 核生物为例来说明转录过程对基因表达的调控 ，现在普遍接受是操纵子模型。 2、

13、原核生物的操纵子模型操纵子模型操纵子（Operon）模型是1961年由 J.Monod和F.Jacob在提出mRNA的概念时同 时提出的。所谓操纵子是指原核生物 上基因的一种组织方式，包括功能上相 关的几个蛋白基因（结构基因）和一个 共同的调控区域。它是基因表达的调控 单位。 乳糖操纵子模型 操纵子调节方式操纵子调节转录的具体方式有诱导和 阻遏两种。诱导：在正常情况下不表达或仅在底水平 上表达的酶如遇诱导物则大量合成的现象。阻遏：通常情况下，某些酶在生物生长发 育中以一定速度正常合成，但是当它们的作用 产物积累到一定浓度水平能满足生物本身的需 要时，这些酶的合成就受到抑制的现象。酶的诱导酶的阻

14、遏三、酶在生物体内的分布GPT与尿激酶、心肌中的细胞色素氧化酶生物体自身需要决定了酶的生物合成 ， 酶的生物合成机制决定了酶在生物体内的 分布和所处环境状态；所以： 它们或定位于某亚细胞结构上处于“溶解”状 态； 不同生物体细胞内酶的数量和种类不同； 同一生物体内的不同部位或不同生长发育阶段的细胞内酶的数量、种类不同；SOD对微生物酶来说，合成后分泌有两种情况 ： 1、胞外酶（分泌型酶）是指可以穿过质膜的任何酶，大多数是水解酶，大多数工业用酶是胞外酶。优点：它比胞内酶容易回收、纯化，不必将细胞破碎，也不用去核酸，容易获得高产。 胞外酶的分泌位置由细胞和酶的结构所决定革兰氏阳性菌的外壳由细胞质膜

15、和包在膜 外面的壁组成。其有两类胞外酶： 合成后分泌到培养基中，如芽孢杆菌的 淀粉酶、蛋白酶。 分泌蛋白穿过质膜后，结合于膜表面的 胞外酶，当细胞形成原生质体时可部分或全部 从膜上释放，如地衣芽孢杆菌的碱性磷酸酯酶 和-葡萄糖苷酶。 革兰氏阴性菌有4种不同位置的分泌型酶： 分泌蛋白结合在内膜外表面、分布在周质中、 结合在外膜上、分泌到培养基中。基因工程中外源蛋白最终在周质中表达 的情况，常给工作带来许多麻烦。用基因工 程手段获得的微生物高产外源酶常会被宿主 本身的蛋白酶迅速降解。因此，尽可能的使 产生的外源酶分泌到细胞质膜外，是稳定外 源酶的有效措施之一。关于胞外酶分泌机制现在有一种信号肽 假说。信号肽假说机理图2、胞内酶是指合成后仍然在细胞内发挥作用的酶。 细胞本身结