选修1 2.1 微生物的培养与应用

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1、微生物包括原核生物原生生物(藻类、原生动物藻类、原生动物) )真菌病毒课题2 微生物的培养与应用是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生 物的总称微生物的共同特点 （小、多、快、强、广）n（1）体积小，面积大 （细胞以微米、 纳米来计算） n（2）吸收多，转化快n（3）生长旺，繁殖快 如大肠杆菌n（4）适应强，易变异 如感冒病毒n（5）分布广，种类多巴斯德法国，微生物学家失败的原因：发酵物中混入了杂菌了解有关培养基的基础知识，无 菌技术的操作，进行微生物的培养 。一.学习目标无菌技术的操作。二.课题重难点1.何为培养基？3.各种培养基的具体配方不同，但其 基本成分都相同，都包括哪些营养成 分？自主学

2、习: 2.按照物理形态、化学成分、用途分 ，培养基的种类有哪些？一一. .基础知识基础知识 ( (一一) )培养基培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求 ，配制出供其生长繁殖的营养基质。( (一一) )培养基培养基1. 1.概念：概念：2. 2.类型及应用：类型及应用：液体培养基固体培养基据物理性质分天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基据用途分2. 2.类型及应用：类型及应用：( (一一) )培养基培养基常用于工业生产用于微生物的分离、 鉴定、计数加琼脂常用于工业生产常用于分类、鉴定培养、分离出特定微生物鉴别不同种类的微生物在培养基中加入某种化学 物质，以抑制不需要的微 生物

3、的生长，促进所需要 的微生物的生长。根据微生物的代谢特点，在 培养基中加入某种指示剂或 化学药品配制而成。练习n n下列有关培养基的叙述正确的是（下列有关培养基的叙述正确的是（ ） A.A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养培养基是为微生物的生长繁殖提供营养 的基质的基质 B.B.培养基只有两类：固体培养基和液体培培养基只有两类：固体培养基和液体培 养基养基 C.C.固体培养基中加入少量水即可制成液体固体培养基中加入少量水即可制成液体 培养基培养基 D.D.微生物在固体培养基上生长时，可以形微生物在固体培养基上生长时，可以形 成肉眼可见的单个细菌成肉眼可见的单个细菌A碳源碳源 氮源氮源无机盐无

4、机盐水水( (一一) )培养基培养基3. 3.营养要素营养要素还需满足微生物生长对还需满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质 以及以及氧气氧气的要求。的要求。 如:生长因子(即细菌生长 必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨 基酸、碱基)培养基的主要成分营养物质概念作用来源碳源能提供所需碳元素的物质用于合成微生物细胞结构的物质和代谢产物异养微生物的主要能源无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需氮元素的物质主要用于合成、蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨生长

5、因子生长必不可少的微量有机物一般是酶和核酸组成成分维生素、氨基酸、碱基牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g5.0g 蛋白胨蛋白胨 10.0g10.0g NaCl 5.0gNaCl 5.0g 将上述物质溶解后，用将上述物质溶解后，用 蒸馏水定容至蒸馏水定容至1000ml1000ml。配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？( (一一) )培养基培养基 3. 3.营养要素：营养要素：碳源、氮源、 磷 酸盐和维生素氮源和维生素无机盐H、On对异养微生物来说，含C、N的化合物既是 碳源，也是氮源。即有些化合物作为营养要素 成分时并非单一

6、方面的作用。n并非所有微生物都需添加特殊营养物质 下列叙述错误的是（下列叙述错误的是（ ） A.A.培养乳酸菌时需要在培养基中添加维培养乳酸菌时需要在培养基中添加维 生素生素 B.B.培养霉菌时需将培养基中的培养霉菌时需将培养基中的pHpH调至碱调至碱 性性 C.C.培养细菌时需将培养细菌时需将pHpH调至中性或微碱性调至中性或微碱性 D.D.培养厌氧微生物时则需要提供无氧的培养厌氧微生物时则需要提供无氧的 条件条件B练习1、何为无菌技术？无菌技术包括哪 些方面？ 2、消毒和灭菌的区别？ 3、常用的消毒方法有哪些？ 4、常用的灭菌方法有哪些？自主学习：( (二二) )无菌技术无菌技术1.获得纯

7、净培养物的关键： 防止外来杂菌的入侵 2.无菌技术包括：4方面 对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 清洁和消毒； 用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等 进行灭菌； 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应 在酒精灯火焰附近进行； 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 周围物品接触。( (二二) )无菌技术无菌技术P15思考题练习n n下列操作与无菌技术无关的是（下列操作与无菌技术无关的是（ ） A.A.接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双 手手 B.B.接种前用火焰烧灼接种针接种前用火焰烧灼接种针 C.C.培养基在培养基在50 50 左右时搁置斜面

8、左右时搁置斜面 D.D.在酒精灯火焰旁边完成在酒精灯火焰旁边完成C消毒使用较为温和的物理或化学方法，杀死物体 表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。3.3.消毒与灭菌消毒与灭菌灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 理化因素的作用强度理化因素的作用强度 消灭微生物的数量消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭芽孢和孢子能否被消灭(1)定义1、煮沸消毒法: 100煮沸5-6min，日常生活中广泛应用 2、巴氏消毒法： 70-75 煮30min或80煮15min，牛奶、 啤酒等不宜进行高温消毒的 3、化学药剂消毒法: 75%酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等 4、紫外

9、线消毒法： 用于接种室空气消毒 (2)消毒的方法：3.3.消毒与灭菌消毒与灭菌1、灼烧灭菌： 用于微生物接种工具，如：接种环、接种针或其 他金属用具等，及接种过程中试管口或锥形瓶口 的灭菌(3)灭菌的方法：3.3.消毒与灭菌消毒与灭菌2、干热灭菌： 160-170 下加热1-2h。 用于玻璃器皿、金属用具等 能耐高温、需保持干燥的物 品。 3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 下维持 15-30min. 广泛用于培养基及多种器材 、物品。(3)灭菌的方法：3.3.消毒与灭菌消毒与灭菌P16 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或 灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基

10、与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手答：（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。练习n n细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、 火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依 次用于杀灭哪些部位的杂菌（次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ） A.A.接种针、手、培养基接种针、手、培养基 B.B.高压锅、手、接种针高压锅、手、接种针 C.C.培养基、手、接种针培养基、手、接种针 D.D.培养基、手、高压锅培养基、手、高压锅C变形题n n培养基、培养皿、接种环、实验操作者培养基、培养皿、接种环、实验操

11、作者 的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消 毒方法依次是（毒方法依次是（ ） 化学消毒化学消毒 灼烧灭菌灼烧灭菌 干热灭菌干热灭菌 紫外线消毒紫外线消毒 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法巴氏消毒法A. A. B. B. C. C. D. D. A练习n n外科手术器械和罐头食品的处理，要以外科手术器械和罐头食品的处理，要以 能够杀死什么为标准（能够杀死什么为标准（ ） A.A.球菌球菌 B.B.杆菌杆菌 C.C.弧菌弧菌 D.D.芽孢芽孢D练习n n微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌 和枯草杆菌的重要依据是（和枯

12、草杆菌的重要依据是（ ） A.A.细菌的大小、形状、颜色细菌的大小、形状、颜色 B.B.菌落的大小、形状、颜色菌落的大小、形状、颜色 C.C.有无鞭毛有无鞭毛 D.D.培养基的不同培养基的不同B 关于微生物营养物质的叙述中，正确的是（关于微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ） A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量D练习规律：对异养微生物来说，含C、H、O、N的 化合物既是微生物的碳源，又是氮源； 有机碳源能提供

13、能量，无机碳源不能提供能量； 无机物也可提供碳源、氮源和能源。下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确的是 A、防止杂菌污染 B、消灭杂菌 C、培养基和发酵设备都必须灭菌 D、灭菌必须在接种前B二、实验操作(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加自来水，定 容至1000mL1计算、称量 2溶化 3调pH： pH76 4过滤：这一步可以省去。 5分装：分装过程中注意不要使培 养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉 塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以 不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

14、 6加塞 7包扎操作步骤8灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角 锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸， 再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为 100kPa、温度为121，灭菌15 30min。将培养皿用旧报纸包裹，放 入干热灭菌箱内，在160170 下灭 菌2h。9倒平板:待培养基冷却到50 左右时，在酒 精灯附近倒平板。10无菌检查：将灭菌的培养基放入37的温室中培 养2448小时，以检查灭菌是否彻底。倒平板技术1.将灭过菌的 培养皿放在火 焰旁的桌面上 ，右手拿装有 培养基的锥形 瓶，左手拨出 棉塞。1234倒平板技术2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。1234倒平板技术12343.用左手的拇指

15、和食指将培养皿 打开一条稍大于 瓶口的缝隙，右 手将锥形瓶中的 培养基(约10 20mL)倒入培养 皿，左手立即盖 上培养皿的皿盖 。倒平板技术12344.等待平板冷却凝固，大约 需510min。然后，将平板 倒过来放置， 使皿盖在下， 皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办 法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基 的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降 到刚刚不烫手时，就可以进行倒平 板了。问题讨论2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶 口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会 凝结水珠，凝固后的培养基表面 的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好 地挥发，又可以防止皿盖上的水 珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部 位，这个平板还能用来培养微生物吗 ？为什么？答：空