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1、1高效液相色谱法测定复方蒲黄肠康胶囊中没食子酸的含量【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定复方蒲黄肠康胶囊中没食子酸的含量。方法：色谱柱为 C18 柱(200mm4 6mm，5m)；流动相为甲醇：0.1%磷酸溶液（10：90 ） ；检测波长为 273nm。结果：没食子酸在 2656gml 范围内，线性关系良好(r2 0.9999)，平均回收率为 9802 ，RSD 为 218%。结论：该方法简单、快速、准确。 【关键词】 高效液相色谱法； 复方蒲黄肠康胶囊； 没食子酸复方蒲黄肠康胶囊是辽宁医学院生物技术研究所新开发的复方中药制剂，以天然药物蒲黄为主药，联合五倍子、苦参等中药材，经提取后而制成的
2、肠溶胶囊，具有抗菌消炎、止血、涩肠、解痉、止泻的作用。临床上主要用于治疗溃疡性结肠炎。没食子酸是药物中间体，也是五倍子中主要成分之一，它能与蛋白质结合,对肠道细菌有直接的杀灭作用1 。没食子酸的含量测定方法主要有比色法2 、薄层扫描法3 及 HPLC4法。本实验以五倍子中的没食子酸为指标，采用与药典一致的 HPLC 法对本品进行质量控制。21 仪器与试剂高效液相色谱仪：岛津 SCL-10Avp 高效液相色谱仪， SPD-10Avp 二极管阵列检测器，LC-10ATVP 色谱泵；复方蒲黄肠康胶囊由辽宁医学院生物技术研究所提供，没食子酸对照品，购自中国药品生物制品检定所，为含量测定用；甲醇为色谱纯
3、；水为重蒸水；其他试剂为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇：0.1%磷酸溶液（10：90） ；检测波长为 273nm。理论塔板数按没食子酸计算应不低于 3000。按此色谱条件测定，没食子酸的保留时间约为13.172min。2.2 对照品溶液的制备称没食子酸对照品 2mg，置 50ml 容量瓶中，加 50%甲醇制成40g/ml 的溶液。32.3 供试品溶液的制备取本品胶囊内容物，研细，称约 1g，精密称定，精密加入4mol/L 的盐酸溶液 50ml，在水浴中加热水解 3.5h，放冷，滤过。精密量取续滤液 1ml，置 100ml 容量瓶中，加
4、50%甲醇至刻度，摇匀，即得。2.4 阴性对照溶液的制备按处方比例制成缺五倍子的阴性对照药，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。2.5 标准曲线的绘制精密称取没食子酸对照品置于 10mL 容量瓶中，以甲醇溶解并定容，制成浓度分别为26g/ml、32g/ml 、40g/ml 、48g/ml 、56g/ml 的溶液。分别精密量取以上 5 种浓度溶液 10l 注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积与浓度进行线性回归，得回归方程为：Y41218X-49520，r2=09999。表明浓度在 2656gml 范围内线性关系良好。42.6 稳定性考察取同一样品溶液 3 批，精密吸取 10l，分别在 0、
5、6、12h 进样，结果 RSD 为 2.94(n3)，表明样品溶液在 12h 内稳定。2.7 精密度考察精密吸取五倍子对照品溶液，重复进样 5 次，测定峰面积，结果 RSD 为 182(n=5)。2.8 回收率实验精密称取 5 份已测定没食子酸含量的复方蒲黄肠康胶囊，分别准确加入没食子酸对照品适量按供试品溶液制备方法操作和色谱条件进行测定，计算回收率，测得平均回收率为 98.02，RSD 为218 (n=5) 。2.9 样品含量测定分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液适量，用0.45m 滤膜滤过，各进样 10l，按上述色谱条件测定，按外标法计算样品含量为 43.198g/ml，有关对照品
6、、供试品和阴性对照溶5液的色谱见图 1。结果阴性对照溶液在与没食子酸对照品相对应的保留时间位置上未见有吸收峰，说明本品中除五倍子外的其他药物对含量测定无干扰。3 讨论本样品含量测定曾采用超声提取和水浴加热提取两种方法，经过实验比较，结果后者明显优于前者，并对样品水解条件进行了选择，结果显示,3.5h 提取完全。考察了多种不同类型和不同比例的流动相系统，实验结果表明以甲醇：0.1% 磷酸溶液（10：90 ）为流动相系统时分离效果最佳，保留时间适当，重现性好。采用 HPLC 法测定复方蒲黄肠康胶囊中没食子酸的含量，方法简便，重复性好，结果可靠，可以作为制剂生产中控制质量的方法。【参考文献】1 季宇彬.中药有效成分药理与应用.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1995,203.2 姚敬明，张李俊，王娟平，等. 石榴皮、五倍子中鞣质的提6取及测定试验.中兽医学杂志,2004,118,(3):5.3 郭耀武, 杨瑞瑞.五倍子中没食子酸薄层扫描法测定.现代中医药,2002,5:77.4 侯惠婵，梁前，卢迅聪. 五倍子、没食子中没食子酸的含量测定. 中国药品标准,2005,6(3):38.
