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1、第21章 液相色谱分析法Date一. HPLC与GC的区别 流动相分别为液体和气体：扩散系数 Dm液/Dm气=10-5 速率方程H=A+B/v+Cv A（涡流扩散项）dp B（分子扩散项）忽略不计 C（传质阻力项）dp2 v1/dpDate填充柱气相色谱柱，填料尺为80-100目(2毫米);高效液相色谱的固定相粒度在210微米,因此需要 很高的反压。高效液相色谱（HPLC）又称为： 高速液相 HSLC高压液相 HPLC高分辨液相 HRLCDateHPLCGC分析对象70%-80%化合物20-30%气体和无机、有机 流动相液体（与组分有作用）气体（化学惰性） 柱温低温、室温高温 流动相产生高压泵
2、 +贮液瓶高压钢 瓶 进样进样 器直接进样 柱形直型螺旋型 载体粒子210um2mm 柱 长10 cm-25 cm1 m高压液相色谱与气相色谱的比较DateDate二.高效液相色谱法的特点feature of HPLC特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。Date三. 液相色谱类型固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可获得最佳的分离，适用于异构体分离和同系物分离；而对强极性或离子型的样品，有时会发生不可逆吸附，不能得到满意的结果。缺点：非线形等温
3、吸附常引起峰的拖尾；1. 液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatographyDate1. 被测组分性质（极性大小）： 烃 - - - - - - - - 羧酸，醇 2. 吸附剂的活性：吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能力强强极性物质选择弱吸附剂（固体固定相）弱极性物质选择强吸附剂（固体固定相）3. 流动相的选择： “相似相溶”原则 基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的 则用低极性流动相。吸附剂和流动相的选择：依据被测组分、吸附剂和流动相的性质Date极性吸附剂上有机化合物的保留顺序如 下（极性强保留时间长）：氟碳化合物 甲酰胺 乙腈 甲
4、醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳 环己烷己烷煤油(最小)Date四、液相色谱仪器high performance liquid chromatographDate液相色谱仪（2）Date液相色谱仪（3）Date液相色谱仪（4）Date1、主要部件Main assembly of HPLC(1).流程Date(2). 液相色谱检测器a. 紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高: 10-10g/ml线形范围高；流通池可做的很小（1mm 10mm ，容积 8L）；对流动相的流速和温度变化不敏感
5、；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。Date光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。DateDate光电二极管阵列检测器Dateb. 示差折光检测器 （differential refractive index detector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；通用型检测器（每种物质具有不同的折光 指数）；灵敏度低(10-7g/ml)、对温度敏感、不能用 于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种；Date示差折光检测器Datec. 荧光检测器 （fluorescence detector）高灵敏度(10-12g/ml)、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、 农药、药物、氨基酸、甾类 化合物等有响应；Date(3). 高压输液泵主要部件之一，压力：20-80大气压。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（2000非离子离子水溶性脂溶性低极性中高极性阴离子阳离子样品Date
