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1、GE Healthcare2 2GE Healthcare *如何选择 凝胶？五大类层析方法 - 1. 凝胶过滤 ( GC)2. 离子交换 ( IEX)3. 亲和层析 ( AC)4. 疏水层析 ( HIC)5. 反相层析 ( RPC)介质 - 颗粒越细 、大小越均匀，分辨率越高，但反压亦较 高 (SOURCE介质例外)物理稳定性 - 新 一代介质较坚固，能承受高流速，同时保 持柱床体积和结构稳定，省却每次重新装 柱，提高重复性化学稳定性 - 新 一代介质能承受极端pH，高盐度，促溶剂 和有机溶剂，利于开发分离条件和在位清 洗(CIP)，大大延长介质寿命和提高重复性3 3GE Healthcar
2、e *BioProcess 凝胶特别适合生产 应用, 特点包括：高重复性：适 用于任何规模的工艺放大高物理、化学 稳定性：易于清洗、消毒及再生 、介质 寿命特长高动力载量、 流速快：缩短生产周期和次数， 节省凝 胶用量(尤其XL介质，载 量可比普通介质高达10倍！)每种凝胶均有 完整的文献、档案和Regulatory Support File4 4GE Healthcare *用空柱子须留意使用调节器( flow adaptor ) - 保护柱床的同时更可提 高 分辨率，节省凝胶柱子物料须生物 兼容，并有尤良的化学抗性加上装柱器( packing reservoir )，可一步把凝胶装满 柱
3、子，大大提高柱效，尤其是凝胶过 滤柱柱子的过滤网孔 径应该是凝胶颗粒的1/3, 一般10um孔 径就够用，如用SOURCE15介质装HR 柱和XK柱，须换上5um的网XK柱完全配合 AKTA及各种自装的凝胶，是最佳的选 择5 5GE Healthcare *线性流速对体积不同的柱 子来说，体积流速不能直接用作比较 ， 一般都换算成线性流速，再作比较 ：体积流速 ( ml/min ) x 60线性流速 (cm/hr) = -柱子横切面积 (cm2)线性流速 (cm/hr) x柱子横切面积 (cm2 ) 体积流速 ( ml/min ) = -606 6GE Healthcare *装柱检测检测 装
4、柱效果 一般用 25 mg 上样载量3 m: Mini Q 3. 偶联内毒素底物 如LAL到 CNBr或NHS Sepharose FF, 自 制亲和介质；4. 内毒素经常是多聚体 ，用凝胶过滤 可有效将之除去5454GE Healthcare *策划蛋白纯化1. 纯化企划2. 工艺开发3. 工艺优 化4. 放大研究5555GE Healthcare *纯化策划1. 最终产品质量要求5656GE Healthcare *纯化策划2. 目标蛋白性质5757GE Healthcare *纯化策划3. 样品性质5858GE Healthcare *样品稳定性离心后，测量 280 吸收和活性 pH：p
5、H 2 - 9 (1 pH 间隔) 盐：0-4 M 氯化钠，0-2 M 硫酸氨 (0.5 M 间隔) 有机溶剂：0 - 50 % 乙腈，甲醇 (10 % 间隔) 温度：4 - 40 摄氏度 (10 度 间隔) 时间：室温保存 (1 小时间隔)5959GE Healthcare *样品预处理6060GE Healthcare *样品预处理6161GE Healthcare *优化回收率-减少步骤6262GE Healthcare *提高回收率方法 定期进行在位清洗 在样品稳定限制下保存和工作 尽量减少步骤 探索可接受分辨率下最大回收率的工艺 添加 EDTA 或二硫苏糖醇 用非目标蛋白洗柱使非特异性吸附位点饱和 使用防氧化剂避免氧化，尤其在高 pH 下 转用技术相似填料 转用回收率可接受的其他技术6363GE Healthcare *
