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2、 的间质蛋白。 以往研究表明，HSV-1 UL41 蛋白不仅具有核酸酶活性，而且在 疱疹病毒的 发病机制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究 MDV CVI988 弱毒疫苗 株的 UL41 蛋白是否参与逃避宿主免疫，首先对该基因进行了克隆、表达以及多 抗的制备。 一、MDV CVI988 毒株 UL41 基因克隆与分析 设计特异性引物， 应用 PCR 方法从 MDV CVI988 株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总 DNA 中成功 扩增出 UL41 基因基因。UL41 基因序列分析表明，该基因在 MDV-1 中高度保守， 核酸序列同源性在 99.8以上，氨基酸序列同源性在 99.3以
3、上；并发现该基 因中也具有和真核细胞核酸酶类似的 XPGI 结构域。 二、MDV CVI988 毒株 UL41 基因原核表达及其多抗研制 利用原核表达载体 pGEX-6P-1 构建 UL41 基 因与谷胱甘肽 S 转移酶(GST)融合表达子，命名为 pGEX-UL41。pGEX-UL41 经 IPTG 诱导后，通过 SDS-PAGE 电泳和 Western blot 证实 UL41 基因得到成功表 达，其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱法成功获得融合目的蛋 白，并以其蛋白为抗原免疫小鼠，制备了抗 MDV CVI988 毒株 UIA1 蛋白特异性 多克隆抗体。 三、MDV CVI988
4、 毒株 UL41 基因杆状病毒真核表达 通过将 UL41 基因 ORF 克隆到杆状病毒转座载体 pFastBacl 中，获得的重组质粒 pFastBacl-UL41，并将其转化 DH10Bac 感受态细胞；通过蓝白斑筛选，PCR 鉴 定，获得重组杆状病毒 rBacmid-UL41 重组 DNA。rBacmid-UL41 重组 DNA 转染 Sf9 昆虫细胞，获得重组杆状病毒 rBac-UL41。并利用原核表达产物免疫小鼠制 备的多抗血清，通过间接免疫荧光试验(IFA)和 Western blot 证明了 MDV CVI988UL41 基因在昆虫细胞中的表达。正文内容正文内容马立克氏病病毒的 U
5、L41 基因与单纯疱疹病毒 1 型(Herpes simplex virus typel，HSV-1)的 UL41 同源，编码一种分子量约为 50kDa 的间质蛋白。以往研 究表明，HSV-1 UL41 蛋白不仅具有核酸酶活性，而且在 疱疹病毒的发病机 制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究 MDV CVI988 弱毒疫苗株的 UL41 蛋白是否参与逃避宿主免疫，首先对该基因进行了克隆、表达以及多抗的 制备。 一、MDV CVI988 毒株 UL41 基因克隆与分析 设计特异性引物，应 用 PCR 方法从 MDV CVI988 株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总 DNA 中成功扩 增
6、出 UL41 基因基因。UL41 基因序列分析表明，该基因在 MDV-1 中高度保守， 核酸序列同源性在 99.8以上，氨基酸序列同源性在 99.3以上；并发现该基 因中也具有和真核细胞核酸酶类似的 XPGI 结构域。 二、MDV CVI988 毒株 UL41 基因原核表达及其多抗研制 利用原核表达载体 pGEX-6P-1 构建 UL41 基 因与谷胱甘肽 S 转移酶(GST)融合表达子，命名为 pGEX-UL41。pGEX-UL41 经 IPTG 诱导后，通过 SDS-PAGE 电泳和 Western blot 证实 UL41 基因得到成功表 达，其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱
7、法成功获得融合目的蛋 白，并以其蛋白为抗原免疫小鼠，制备了抗 MDV CVI988 毒株 UIA1 蛋白特异性 多克隆抗体。 三、MDV CVI988 毒株 UL41 基因杆状病毒真核表达 通过将 UL41 基因 ORF 克隆到杆状病毒转座载体 pFastBacl 中，获得的重组质粒 pFastBacl-UL41，并将其转化 DH10Bac 感受态细胞；通过蓝白斑筛选，PCR 鉴 定，获得重组杆状病毒 rBacmid-UL41 重组 DNA。rBacmid-UL41 重组 DNA 转染 Sf9 昆虫细胞，获得重组杆状病毒 rBac-UL41。并利用原核表达产物免疫小鼠制 备的多抗血清，通过间接
8、免疫荧光试验(IFA)和 Western blot 证明了 MDV CVI988UL41 基因在昆虫细胞中的表达。 马立克氏病病毒的 UL41 基因与单纯疱疹病毒 1 型(Herpes simplex virus typel，HSV-1)的 UL41 同源，编码一种分子量约为 50kDa 的间质蛋白。以往研 究表明，HSV-1 UL41 蛋白不仅具有核酸酶活性，而且在 疱疹病毒的发病机 制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究 MDV CVI988 弱毒疫苗株的 UL41 蛋白是否参与逃避宿主免疫，首先对该基因进行了克隆、表达以及多抗的 制备。 一、MDV CVI988 毒株 UL41 基
9、因克隆与分析 设计特异性引物，应 用 PCR 方法从 MDV CVI988 株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总 DNA 中成功扩 增出 UL41 基因基因。UL41 基因序列分析表明，该基因在 MDV-1 中高度保守， 核酸序列同源性在 99.8以上，氨基酸序列同源性在 99.3以上；并发现该基 因中也具有和真核细胞核酸酶类似的 XPGI 结构域。 二、MDV CVI988 毒株 UL41 基因原核表达及其多抗研制 利用原核表达载体 pGEX-6P-1 构建 UL41 基 因与谷胱甘肽 S 转移酶(GST)融合表达子，命名为 pGEX-UL41。pGEX-UL41 经 IPTG 诱导后，通
10、过 SDS-PAGE 电泳和 Western blot 证实 UL41 基因得到成功表 达，其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱法成功获得融合目的蛋 白，并以其蛋白为抗原免疫小鼠，制备了抗 MDV CVI988 毒株 UIA1 蛋白特异性 多克隆抗体。 三、MDV CVI988 毒株 UL41 基因杆状病毒真核表达 通过将 UL41 基因 ORF 克隆到杆状病毒转座载体 pFastBacl 中，获得的重组质粒 pFastBacl-UL41，并将其转化 DH10Bac 感受态细胞；通过蓝白斑筛选，PCR 鉴 定，获得重组杆状病毒 rBacmid-UL41 重组 DNA。rBacmid-U
11、L41 重组 DNA 转染 Sf9 昆虫细胞，获得重组杆状病毒 rBac-UL41。并利用原核表达产物免疫小鼠制备的多抗血清，通过间接免疫荧光试验(IFA)和 Western blot 证明了 MDV CVI988UL41 基因在昆虫细胞中的表达。 马立克氏病病毒的 UL41 基因与单纯疱疹病毒 1 型(Herpes simplex virus typel，HSV-1)的 UL41 同源，编码一种分子量约为 50kDa 的间质蛋白。以往研 究表明，HSV-1 UL41 蛋白不仅具有核酸酶活性，而且在 疱疹病毒的发病机 制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究 MDV CVI988 弱毒疫苗
12、株的 UL41 蛋白是否参与逃避宿主免疫，首先对该基因进行了克隆、表达以及多抗的 制备。 一、MDV CVI988 毒株 UL41 基因克隆与分析 设计特异性引物，应 用 PCR 方法从 MDV CVI988 株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总 DNA 中成功扩 增出 UL41 基因基因。UL41 基因序列分析表明，该基因在 MDV-1 中高度保守， 核酸序列同源性在 99.8以上，氨基酸序列同源性在 99.3以上；并发现该基 因中也具有和真核细胞核酸酶类似的 XPGI 结构域。 二、MDV CVI988 毒株 UL41 基因原核表达及其多抗研制 利用原核表达载体 pGEX-6P-1 构建
13、 UL41 基 因与谷胱甘肽 S 转移酶(GST)融合表达子，命名为 pGEX-UL41。pGEX-UL41 经 IPTG 诱导后，通过 SDS-PAGE 电泳和 Western blot 证实 UL41 基因得到成功表 达，其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱法成功获得融合目的蛋 白，并以其蛋白为抗原免疫小鼠，制备了抗 MDV CVI988 毒株 UIA1 蛋白特异性 多克隆抗体。 三、MDV CVI988 毒株 UL41 基因杆状病毒真核表达 通过将 UL41 基因 ORF 克隆到杆状病毒转座载体 pFastBacl 中，获得的重组质粒 pFastBacl-UL41，并将其转化 D
14、H10Bac 感受态细胞；通过蓝白斑筛选，PCR 鉴 定，获得重组杆状病毒 rBacmid-UL41 重组 DNA。rBacmid-UL41 重组 DNA 转染 Sf9 昆虫细胞，获得重组杆状病毒 rBac-UL41。并利用原核表达产物免疫小鼠制 备的多抗血清，通过间接免疫荧光试验(IFA)和 Western blot 证明了 MDV CVI988UL41 基因在昆虫细胞中的表达。 马立克氏病病毒的 UL41 基因与单纯疱疹病毒 1 型(Herpes simplex virus typel，HSV-1)的 UL41 同源，编码一种分子量约为 50kDa 的间质蛋白。以往研 究表明，HSV-1
15、UL41 蛋白不仅具有核酸酶活性，而且在 疱疹病毒的发病机 制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究 MDV CVI988 弱毒疫苗株的 UL41 蛋白是否参与逃避宿主免疫，首先对该基因进行了克隆、表达以及多抗的 制备。 一、MDV CVI988 毒株 UL41 基因克隆与分析 设计特异性引物，应 用 PCR 方法从 MDV CVI988 株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总 DNA 中成功扩 增出 UL41 基因基因。UL41 基因序列分析表明，该基因在 MDV-1 中高度保守， 核酸序列同源性在 99.8以上，氨基酸序列同源性在 99.3以上；并发现该基 因中也具有和真核细胞核酸酶类
16、似的 XPGI 结构域。 二、MDV CVI988 毒株 UL41 基因原核表达及其多抗研制 利用原核表达载体 pGEX-6P-1 构建 UL41 基 因与谷胱甘肽 S 转移酶(GST)融合表达子，命名为 pGEX-UL41。pGEX-UL41 经 IPTG 诱导后，通过 SDS-PAGE 电泳和 Western blot 证实 UL41 基因得到成功表 达，其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱法成功获得融合目的蛋 白，并以其蛋白为抗原免疫小鼠，制备了抗 MDV CVI988 毒株 UIA1 蛋白特异性 多克隆抗体。 三、MDV CVI988 毒株 UL41 基因杆状病毒真核表达 通过将 UL41 基因 ORF 克隆到杆状病毒转座载体 pFastBacl 中，获得的重组质粒 pFastBacl-UL41，并将其转化 DH10Bac 感受态细胞；通过蓝白斑筛选，PCR
