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1、病理与病理生理学专业优秀论文病理与病理生理学专业优秀论文 非酒精性脂肪性肝病（非酒精性脂肪性肝病（NAFLDNAFLD）病）病理学评价、无创性诊断指标筛选、发病机制及药物干预研究理学评价、无创性诊断指标筛选、发病机制及药物干预研究关键词：非酒精性脂肪性肝病关键词：非酒精性脂肪性肝病 非酒精性脂肪性肝炎非酒精性脂肪性肝炎 无创性诊断无创性诊断 动物模型动物模型 发发 病机制病机制 药物干预药物干预 病理诊断病理诊断摘要：目的: 病理诊断是目前 NAFLD 诊断的“金标准” ，但 NAFLD 的组织病理 学特点仍需明确，NAFLD 病理组织学评估系统尚待完善。由于肝活检病理属创 伤性检查，筛选 N
2、AFLD 无创性诊断和/或预测检测指标，是临床 NAFLD 诊治的迫 切需要。NAFLD 尤其是 NASH 的发病机制至今未明，有鉴于此，有效的 NASH 治 疗方法亟待研究。本研究中我们系统分析总结了 NAFLD 的组织学特点、探讨其 组织学评估方法、筛选 NAFLD 的无创性诊断指标、建立 NAFLD 实验动物模型， 研究 NASH 的发病机制、并对 NASH 进行药物性干预研究。 方法: 基于 NASH-CRN 2005 年推荐的 NAFLD 组织学评分方案，我们对确诊的 130 例 NAFLD 患者的肝穿组织进行病理组织学观察，总结分析 NAFLD 的病理改变。收集与肝 穿活检相配套的
3、 NAFLD 患者血清，进行血清生化检测，结合组织病理学结果总 结分析，筛选与病理改变相关性 NAFLD 无创性诊断指标。建立高脂诱导性符合 代谢综合征范畴的 NASH 大鼠模型，常规病理、组织化学染色、免疫组织化学染 色、分子原位杂交染色等组织原位检测与血清 ELISA 和生物化学检测相结合， 研究脂肪源性激素(瘦素、脂联素)、COX、AT-、TNF-、TGF-1 等细胞因 子或炎性因子在 NASH 发病过程中的作用。与维生素 E 相对照，验证壳聚糖治疗 NASH 的治疗效果及可能的干预途径。 结果: 1NAFLD 病理改变中脂肪变 性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化发生普遍，统计学分析
4、结果显示， 脂肪变性与小叶内炎症、纤维化及肝细胞气球样变程度间呈正相关关系(r 分别 =0.587，0.374，0.488，P 均lt;0.01)。微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小 体随脂肪变性、小叶内炎症、纤维化程度的加重，出现频率呈增加之趋势。巨 大线粒体和糖原核则随气球样变程度的加重发生率明显增高。 2NAFLD 患 者血清主要异常指标包括，超重或肥胖(按照 WHO 推荐的 BMI 标准)，转氨酶升 高，甘油三酯水平升高，GGT 升高和 ALP 升高，此外，14.6的 NAFLD 患者出 现血清磷升高。年龄、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和 CK-MB、高血 压、ALP 和 L
5、DH 等指标与 NAFLD 的主要组织学病理改变存在不同程度的相关性。 甘油三酯、空腹血糖与主要病理组织学改变之间并无明显相关性 (Pgt;0.05)。Logistic 回归分析结果，仅 BMI 和 AST 在回归方程中有显 著性差异(P 分别lt;0.01，lt;0.05)，回归方程为 NASH=0.365BMI+0.012AST-9.289。 3造模 4w 大鼠肝脏即出现典型的 NASH 改变，肝脏体重指数增加、大小泡混合性肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内 炎症和肝窦壁细胞增生，至造模 12w 时，肝纤维化已比较明显。模型组大鼠血 清 TC、LDL 水平明显增高，而 HDL 则有所降低，血
6、清 ALT、ALP 和 GGT 升高，白 蛋白/球蛋白比值降低，血清胰岛素、瘦素和 TNF- 水平明显升高，其中瘦素 与 TNF- 和胰岛素的水平呈平行关系，且随造模时间的延长和纤维化程度的加 重而增高。而脂联素则相反，随造模时间的延长血清脂联素水平呈逐渐降低趋 势。模型组及 NASH 患者肝组织中 OB-Rb 的蛋白及 mRNA 表达明显增强。ATR-1 蛋白和 mRNA 表达均明显升高。正常肝组织仅少量表达的 COX-1 和难以检测到的COX-2，在 NASH 患者穿刺肝组织以及 NASH 模型大鼠肝组织内蛋白和 mRNA 均表 达升高，并随病变程度的加重而增强。 4壳聚糖治疗后，NASH
7、 脂肪变性增 大的肝脏减小，肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内炎症以及窦周、中央静脉 周和汇管区纤维化等 NASH 病变均有不同程度的改善。血清白蛋白/球蛋白比值 恢复正常。血清 TC、LDL 水平降低，高胰岛素血症也得到了明显改善。在降低 瘦素、胰岛素和提高脂联素水平方面优于与维生素 E。 结论: 1基于国 际上最新的 NASH-CRN 方案，基本明确了 NAFLD 的肝脏病理组织学特点。在 NAFLD 的病理组织学评估中，除脂肪变性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤 维化外，汇管区炎症也应予以重视。微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小体可作为 NAFLD 病情进展的组织学指标。 2筛选出了与 NAFL
8、D 主要病理改变密切相 关的无创性指标主要包括年龄、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和 CK- MB、高血压、ALP 和 LDH 等。初步建立了 NASH 临床无创性诊断方程，为 NASH 的无创性诊断提供了潜在应用模型。 3建立了在肝脏病理、血脂及血生化 变化、胰岛素抵抗等 NASH 关键性指标与 NASH 患者高度比拟的 NASH 大鼠试验模 型，并从脂肪源性激素、其他细胞因子等角度探索了 NASH 发生及进展机制。 NASH 实验大鼠全身和肝脏内可能均出现瘦素抵抗，瘦素在 NASH 肝组织内炎症 和纤维化的发生过程中具有重要作用。研究发现脂联素可能具有拮抗 TNF-、 减轻瘦
9、素抵抗和胰岛素抵抗等作用。AT-可能直接作用于肝脏 ATR-1，促进 NASH 肝脂肪变性和肝纤维化的发生。COX-1 和 COX-2，在 NASH 的发生过程中可 能具有重要意义。 4在制备 NASH 模型基础上验证了壳聚糖可减少 NASH 肝 组织内炎症、气球样变、脂肪变性和抗纤维化等治疗作用，其对 NASH 的治疗疗 效优于维生素 E。初步发现壳聚糖对 NASH 的治疗作用除了通过减少肠道胆固醇 的吸收、促进脂类的排泌外，还可能通过影响脂肪源性激素或细胞因子的分泌 产生而起作用。正文内容正文内容目的: 病理诊断是目前 NAFLD 诊断的“金标准” ，但 NAFLD 的组织病理学 特点仍需
10、明确，NAFLD 病理组织学评估系统尚待完善。由于肝活检病理属创伤 性检查，筛选 NAFLD 无创性诊断和/或预测检测指标，是临床 NAFLD 诊治的迫切 需要。NAFLD 尤其是 NASH 的发病机制至今未明，有鉴于此，有效的 NASH 治疗 方法亟待研究。本研究中我们系统分析总结了 NAFLD 的组织学特点、探讨其组 织学评估方法、筛选 NAFLD 的无创性诊断指标、建立 NAFLD 实验动物模型，研 究 NASH 的发病机制、并对 NASH 进行药物性干预研究。 方法: 基于 NASH- CRN 2005 年推荐的 NAFLD 组织学评分方案，我们对确诊的 130 例 NAFLD 患者的
11、 肝穿组织进行病理组织学观察，总结分析 NAFLD 的病理改变。收集与肝穿活检 相配套的 NAFLD 患者血清，进行血清生化检测，结合组织病理学结果总结分析， 筛选与病理改变相关性 NAFLD 无创性诊断指标。建立高脂诱导性符合代谢综合 征范畴的 NASH 大鼠模型，常规病理、组织化学染色、免疫组织化学染色、分子 原位杂交染色等组织原位检测与血清 ELISA 和生物化学检测相结合，研究脂肪 源性激素(瘦素、脂联素)、COX、AT-、TNF-、TGF-1 等细胞因子或炎性 因子在 NASH 发病过程中的作用。与维生素 E 相对照，验证壳聚糖治疗 NASH 的 治疗效果及可能的干预途径。 结果:
12、1NAFLD 病理改变中脂肪变性、肝 细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化发生普遍，统计学分析结果显示，脂肪变 性与小叶内炎症、纤维化及肝细胞气球样变程度间呈正相关关系(r 分别 =0.587，0.374，0.488，P 均lt;0.01)。微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小 体随脂肪变性、小叶内炎症、纤维化程度的加重，出现频率呈增加之趋势。巨 大线粒体和糖原核则随气球样变程度的加重发生率明显增高。 2NAFLD 患 者血清主要异常指标包括，超重或肥胖(按照 WHO 推荐的 BMI 标准)，转氨酶升 高，甘油三酯水平升高，GGT 升高和 ALP 升高，此外，14.6的 NAFLD 患者出 现血清磷升高。
13、年龄、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和 CK-MB、高血 压、ALP 和 LDH 等指标与 NAFLD 的主要组织学病理改变存在不同程度的相关性。 甘油三酯、空腹血糖与主要病理组织学改变之间并无明显相关性 (Pgt;0.05)。Logistic 回归分析结果，仅 BMI 和 AST 在回归方程中有显 著性差异(P 分别lt;0.01，lt;0.05)，回归方程为 NASH=0.365BMI+0.012AST-9.289。 3造模 4w 大鼠肝脏即出现典型的 NASH 改变，肝脏体重指数增加、大小泡混合性肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内 炎症和肝窦壁细胞增生，至造模 12w 时，肝
14、纤维化已比较明显。模型组大鼠血 清 TC、LDL 水平明显增高，而 HDL 则有所降低，血清 ALT、ALP 和 GGT 升高，白 蛋白/球蛋白比值降低，血清胰岛素、瘦素和 TNF- 水平明显升高，其中瘦素 与 TNF- 和胰岛素的水平呈平行关系，且随造模时间的延长和纤维化程度的加 重而增高。而脂联素则相反，随造模时间的延长血清脂联素水平呈逐渐降低趋 势。模型组及 NASH 患者肝组织中 OB-Rb 的蛋白及 mRNA 表达明显增强。ATR-1 蛋白和 mRNA 表达均明显升高。正常肝组织仅少量表达的 COX-1 和难以检测到的 COX-2，在 NASH 患者穿刺肝组织以及 NASH 模型大鼠
15、肝组织内蛋白和 mRNA 均表 达升高，并随病变程度的加重而增强。 4壳聚糖治疗后，NASH 脂肪变性增 大的肝脏减小，肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内炎症以及窦周、中央静脉 周和汇管区纤维化等 NASH 病变均有不同程度的改善。血清白蛋白/球蛋白比值 恢复正常。血清 TC、LDL 水平降低，高胰岛素血症也得到了明显改善。在降低瘦素、胰岛素和提高脂联素水平方面优于与维生素 E。 结论: 1基于国 际上最新的 NASH-CRN 方案，基本明确了 NAFLD 的肝脏病理组织学特点。在 NAFLD 的病理组织学评估中，除脂肪变性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤 维化外，汇管区炎症也应予以重视。微肉芽
16、肿、脂性肉芽肿和凋亡小体可作为 NAFLD 病情进展的组织学指标。 2筛选出了与 NAFLD 主要病理改变密切相 关的无创性指标主要包括年龄、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和 CK- MB、高血压、ALP 和 LDH 等。初步建立了 NASH 临床无创性诊断方程，为 NASH 的无创性诊断提供了潜在应用模型。 3建立了在肝脏病理、血脂及血生化 变化、胰岛素抵抗等 NASH 关键性指标与 NASH 患者高度比拟的 NASH 大鼠试验模 型，并从脂肪源性激素、其他细胞因子等角度探索了 NASH 发生及进展机制。 NASH 实验大鼠全身和肝脏内可能均出现瘦素抵抗，瘦素在 NASH 肝组织内炎症 和纤维化的发生过程中具有重要作用。研究发现脂联素可能具有拮抗 TNF-、 减轻瘦素抵抗和胰岛素抵抗等作用。AT-可能直接作用于肝脏 ATR-1，促进 NASH 肝脂肪变性和肝纤维化的发生。COX-1 和 COX
