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1、生物化学和分子生物学专业毕业论文生物化学和分子生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 乌鲁木齐地区乌鲁木齐地区奶牛隐性乳房炎主要致病菌分析及金黄色葡萄球菌毒力基因检测的奶牛隐性乳房炎主要致病菌分析及金黄色葡萄球菌毒力基因检测的研究研究关键词：乌鲁木齐关键词：乌鲁木齐 奶牛奶牛 隐性乳房炎隐性乳房炎 致病菌致病菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 毒力基因毒力基因摘要：本研究以新疆乌鲁木齐地区的三个奶牛场隐性乳房炎患牛为实验对象， 共分离鉴定出 21 种 91 株引起奶牛乳房炎的主要病原菌，其中葡萄球菌 28 株 (30.78)，链球菌 21 株(23.07)，杆菌 25 株(27.48)，其他细菌
2、17 株 (18.67)，并用肠道细菌基因间重复序列-PCR(ERIC-PCR)方法对这 49 株金黄 色葡萄球菌进行了基因分型研究。ERIC-PCR 分型结果显示：49 株金黄色葡萄球 菌可扩增出 310 条带，共分为 4 个聚类群，在同一牛场中的分离株存在不同 的基因型；而不同牛场中的分离株也可属于同一基因型。这种结果提示，在不 同环境下同一种病原菌的基因型存在一定差异，可能存在多个金黄色葡萄球菌 的流行株。 将新疆褐牛和荷斯坦牛两个不同品种对奶牛乳房炎的影响进行了 比较，同时对不同品种牛体细胞数与菌落形成单位(CFU)、体细胞数与不同年龄 进行了统计分析。结果表明：两种牛感染病原菌种类稍
3、有差别且新疆褐牛感染 葡萄球菌的机率明显高于荷斯坦牛；荷斯坦牛比新疆褐牛更容易患乳房炎；新 疆褐牛、荷斯坦牛体细胞在小于 20 万/mL 时均与体细胞大于 50 万/mL 时的 CFU 值呈显著差异(Plt;0.05)，而这两个品种牛的体细胞在 20-50 万/mL 时分 别与体细胞小于 20 万/mL、大于 50 万/mL 时的 CFU 值均无显著差异 (Pgt;0.05)，初步推测体细胞数和细菌总数之间没有必然联系，还受其它 因素影响：此外，随着年龄增长，褐牛和荷斯坦牛的 SCS 都呈上升趋势，且不 同品种间的 SCS 差异显著。 本研究还建立一种在分子水平快速检测乳房炎主 要病原菌的方法
4、。在 16srDNA 区域设计了特异性引物，建立了检测葡萄球菌、 链球菌和大肠杆菌乳腺炎主要致病菌的多重 PCR 方法。结果表明：本试验建立 的多重 PCR 方法具有较好的特异性，多重 PCR 方法检测乳样中的葡萄球菌的细 菌最小浓度为 103CFU/mL，检测链球菌和大肠杆菌的细菌最小浓度分别为 103CFU/mL 和 104CFU/mL。对送检的乳房炎奶样 25 份直接进行 PCR 检测，葡萄 球菌阳性 15 份，大肠杆菌阳性 10 份，链球菌 5 份。 并用 PCR 方法对新疆乌 鲁木齐周边 3 个奶牛场奶牛乳汁中分离得到的 49 株金黄色葡萄球菌的 entA、tsst-1、nuc、cl
5、fA、fnbA、fnbB、hla、hlb8 种毒力基因进行了分子流 行病学调查。结果表明：tsst-1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb、entA 毒力基因的检出率分别为 4、59.2、63.3、69.4、22.5、46.9、53.1、0，且以 clfA、fnbA 为主要检出毒力基因。 同时用 30 种药物对 19 类细菌进行药敏 试验，结果表明：在奶牛隐性乳房炎中应用较多的青霉素、四环素等对常见的 致病菌几乎无效，而左氧氟沙星、呋喃妥因、头孢噻肟、阿米卡星则显示出较 好的抑菌作用。正文内容正文内容本研究以新疆乌鲁木齐地区的三个奶牛场隐性乳房炎患牛为实验对象，共 分离鉴定出
6、 21 种 91 株引起奶牛乳房炎的主要病原菌，其中葡萄球菌 28 株 (30.78)，链球菌 21 株(23.07)，杆菌 25 株(27.48)，其他细菌 17 株 (18.67)，并用肠道细菌基因间重复序列-PCR(ERIC-PCR)方法对这 49 株金黄 色葡萄球菌进行了基因分型研究。ERIC-PCR 分型结果显示：49 株金黄色葡萄球 菌可扩增出 310 条带，共分为 4 个聚类群，在同一牛场中的分离株存在不同 的基因型；而不同牛场中的分离株也可属于同一基因型。这种结果提示，在不 同环境下同一种病原菌的基因型存在一定差异，可能存在多个金黄色葡萄球菌 的流行株。 将新疆褐牛和荷斯坦牛两
7、个不同品种对奶牛乳房炎的影响进行了 比较，同时对不同品种牛体细胞数与菌落形成单位(CFU)、体细胞数与不同年龄 进行了统计分析。结果表明：两种牛感染病原菌种类稍有差别且新疆褐牛感染 葡萄球菌的机率明显高于荷斯坦牛；荷斯坦牛比新疆褐牛更容易患乳房炎；新 疆褐牛、荷斯坦牛体细胞在小于 20 万/mL 时均与体细胞大于 50 万/mL 时的 CFU 值呈显著差异(Plt;0.05)，而这两个品种牛的体细胞在 20-50 万/mL 时分 别与体细胞小于 20 万/mL、大于 50 万/mL 时的 CFU 值均无显著差异 (Pgt;0.05)，初步推测体细胞数和细菌总数之间没有必然联系，还受其它 因素影
8、响：此外，随着年龄增长，褐牛和荷斯坦牛的 SCS 都呈上升趋势，且不 同品种间的 SCS 差异显著。 本研究还建立一种在分子水平快速检测乳房炎主 要病原菌的方法。在 16srDNA 区域设计了特异性引物，建立了检测葡萄球菌、 链球菌和大肠杆菌乳腺炎主要致病菌的多重 PCR 方法。结果表明：本试验建立 的多重 PCR 方法具有较好的特异性，多重 PCR 方法检测乳样中的葡萄球菌的细 菌最小浓度为 103CFU/mL，检测链球菌和大肠杆菌的细菌最小浓度分别为 103CFU/mL 和 104CFU/mL。对送检的乳房炎奶样 25 份直接进行 PCR 检测，葡萄 球菌阳性 15 份，大肠杆菌阳性 10
9、 份，链球菌 5 份。 并用 PCR 方法对新疆乌 鲁木齐周边 3 个奶牛场奶牛乳汁中分离得到的 49 株金黄色葡萄球菌的 entA、tsst-1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb8 种毒力基因进行了分子流 行病学调查。结果表明：tsst-1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb、entA 毒力基因的检出率分别为 4、59.2、63.3、69.4、22.5、46.9、53.1、0，且以 clfA、fnbA 为主要检出毒力基因。 同时用 30 种药物对 19 类细菌进行药敏 试验，结果表明：在奶牛隐性乳房炎中应用较多的青霉素、四环素等对常见的 致病菌几乎无效，
10、而左氧氟沙星、呋喃妥因、头孢噻肟、阿米卡星则显示出较 好的抑菌作用。 本研究以新疆乌鲁木齐地区的三个奶牛场隐性乳房炎患牛为实验对象，共分离 鉴定出 21 种 91 株引起奶牛乳房炎的主要病原菌，其中葡萄球菌 28 株(30.78)， 链球菌 21 株(23.07)，杆菌 25 株(27.48)，其他细菌 17 株(18.67)，并 用肠道细菌基因间重复序列-PCR(ERIC-PCR)方法对这 49 株金黄色葡萄球菌进行 了基因分型研究。ERIC-PCR 分型结果显示：49 株金黄色葡萄球菌可扩增出 310 条带，共分为 4 个聚类群，在同一牛场中的分离株存在不同的基因型； 而不同牛场中的分离株
11、也可属于同一基因型。这种结果提示，在不同环境下同 一种病原菌的基因型存在一定差异，可能存在多个金黄色葡萄球菌的流行株。 将新疆褐牛和荷斯坦牛两个不同品种对奶牛乳房炎的影响进行了比较，同时对不同品种牛体细胞数与菌落形成单位(CFU)、体细胞数与不同年龄进行了统计分 析。结果表明：两种牛感染病原菌种类稍有差别且新疆褐牛感染葡萄球菌的机 率明显高于荷斯坦牛；荷斯坦牛比新疆褐牛更容易患乳房炎；新疆褐牛、荷斯 坦牛体细胞在小于 20 万/mL 时均与体细胞大于 50 万/mL 时的 CFU 值呈显著差异 (Plt;0.05)，而这两个品种牛的体细胞在 20-50 万/mL 时分别与体细胞小 于 20 万
12、/mL、大于 50 万/mL 时的 CFU 值均无显著差异(Pgt;0.05)，初步 推测体细胞数和细菌总数之间没有必然联系，还受其它因素影响：此外，随着 年龄增长，褐牛和荷斯坦牛的 SCS 都呈上升趋势，且不同品种间的 SCS 差异显 著。 本研究还建立一种在分子水平快速检测乳房炎主要病原菌的方法。在 16srDNA 区域设计了特异性引物，建立了检测葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌乳 腺炎主要致病菌的多重 PCR 方法。结果表明：本试验建立的多重 PCR 方法具有 较好的特异性，多重 PCR 方法检测乳样中的葡萄球菌的细菌最小浓度为 103CFU/mL，检测链球菌和大肠杆菌的细菌最小浓度分别为 1
13、03CFU/mL 和 104CFU/mL。对送检的乳房炎奶样 25 份直接进行 PCR 检测，葡萄球菌阳性 15 份， 大肠杆菌阳性 10 份，链球菌 5 份。 并用 PCR 方法对新疆乌鲁木齐周边 3 个 奶牛场奶牛乳汁中分离得到的 49 株金黄色葡萄球菌的 entA、tsst- 1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb8 种毒力基因进行了分子流行病学调查。 结果表明：tsst-1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb、entA 毒力基因的检 出率分别为 4、59.2、63.3、69.4、22.5、46.9、53.1、0， 且以 clfA、fnbA 为主要检出
14、毒力基因。 同时用 30 种药物对 19 类细菌进行 药敏试验，结果表明：在奶牛隐性乳房炎中应用较多的青霉素、四环素等对常 见的致病菌几乎无效，而左氧氟沙星、呋喃妥因、头孢噻肟、阿米卡星则显示 出较好的抑菌作用。 本研究以新疆乌鲁木齐地区的三个奶牛场隐性乳房炎患牛为实验对象，共分离 鉴定出 21 种 91 株引起奶牛乳房炎的主要病原菌，其中葡萄球菌 28 株(30.78)， 链球菌 21 株(23.07)，杆菌 25 株(27.48)，其他细菌 17 株(18.67)，并 用肠道细菌基因间重复序列-PCR(ERIC-PCR)方法对这 49 株金黄色葡萄球菌进行 了基因分型研究。ERIC-PCR
15、 分型结果显示：49 株金黄色葡萄球菌可扩增出 310 条带，共分为 4 个聚类群，在同一牛场中的分离株存在不同的基因型； 而不同牛场中的分离株也可属于同一基因型。这种结果提示，在不同环境下同 一种病原菌的基因型存在一定差异，可能存在多个金黄色葡萄球菌的流行株。 将新疆褐牛和荷斯坦牛两个不同品种对奶牛乳房炎的影响进行了比较，同时对 不同品种牛体细胞数与菌落形成单位(CFU)、体细胞数与不同年龄进行了统计分 析。结果表明：两种牛感染病原菌种类稍有差别且新疆褐牛感染葡萄球菌的机 率明显高于荷斯坦牛；荷斯坦牛比新疆褐牛更容易患乳房炎；新疆褐牛、荷斯 坦牛体细胞在小于 20 万/mL 时均与体细胞大于
16、 50 万/mL 时的 CFU 值呈显著差异 (Plt;0.05)，而这两个品种牛的体细胞在 20-50 万/mL 时分别与体细胞小 于 20 万/mL、大于 50 万/mL 时的 CFU 值均无显著差异(Pgt;0.05)，初步 推测体细胞数和细菌总数之间没有必然联系，还受其它因素影响：此外，随着 年龄增长，褐牛和荷斯坦牛的 SCS 都呈上升趋势，且不同品种间的 SCS 差异显 著。 本研究还建立一种在分子水平快速检测乳房炎主要病原菌的方法。在 16srDNA 区域设计了特异性引物，建立了检测葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌乳 腺炎主要致病菌的多重 PCR 方法。结果表明：本试验建立的多重 PCR 方法具有 较好的特异性，多重 PCR 方法检测乳样中的葡萄球菌的细菌最小浓度为103CFU/mL，检测链球菌和大肠杆菌的细菌最小浓度分别为 103CFU/mL 和 104CFU/mL。对送检的乳房炎奶样 25 份直接
