《全国艾滋病检测技术规范(试行)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《全国艾滋病检测技术规范(试行)（55页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、全国艾滋病检测技术规范 （试 行）甘肃省疾病预防控制中心 性病艾滋病科 赵煜君艾滋病检测工作具有严格的科学性和 政策性，为了加强我省艾滋病（AIDS）检 测工作的规范化管理，不断提高HIV抗体检 测实验室的检测工作质量，确保每一份检 测的准确性和可靠性，及时有效地发现感 染者和上报疫情，必须认真学习、贯彻执 行全国艾滋病检测工作管理办法和 全国艾滋病检测技术规范中各项规定。 只有严格按要求开展检测工作，才能使我 省HIV抗体检测各级实验室管理逐步规范化 、制度化，更好地发挥HIV检测在艾滋病防 治工作中的作用。n全国艾滋病检测工作规范 卫生部1997年9月颁 布n全国艾滋病检测工作管理规范 卫
2、生部待颁 布n全国艾滋病检测技术规范（试行） 中国CDC2003年5月颁 布全国艾滋病检测技术规范（试行）包括：1、样品的采集和处理2、HIV抗体、抗原检测3、HIV核酸检测4、艾滋病检测实验室安全防护5、艾滋病实验室质量管理6、艾滋病确认实验室质量考评办法7、HIV诊断试剂临床评估方案全国艾滋病检测技术规范（试行）附件：1、HIV抗体筛查报告2、HIV抗体筛查阳性送检率3、HIV抗体检测确认报告4、HIV抗体检测数及阳性人数统计报表5、艾滋病职业暴露个案登记表6、职业暴露后预防HIV感染的评价和处理程序 附录：1、HIV RNA测定样品的采集和处理样品的采集样品是血液（血清、血浆和全血）、唾
3、 液和尿液n血清样品采集：抽取的静脉血，室温自然放置1-2小时，待血液凝固后， 3000rpm/min离心15分钟，吸出血清备用 。n抗凝血样品的采集：用加有抗凝剂的真空 采血管或注射器抽取静脉血，移至加抗凝 剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞 备用。样品的采集和处理样品的保存nHIV抗体检测：血清或血浆存放于-20以下，短期（ 一周）内检测可存放于2-8。n抗原和核酸的检测：血浆和血细胞存放于-20以下，如长 期保存应置于-80。样品的采集和处理样品的运送n血清或血浆（一般不运送全血）：置于带盖的塑料管内，有明显的标记（编号或姓 名，采集时间）附送检单。n短期内（48小时）可室温运送，较远
4、或较热，应在2-8条件下运送。样品的采集和处理样品的接受n样品由经过培训的工作人员接受。n核对样品与送检单，检查有无破损和溢漏 ， 记录有无严重溶血、污染等情况。n自发荧光的样品不可用荧光测试。n消毒处理被污染的盛器和物品。HIV抗体检测试剂1、筛查试剂要求n国家食品药品监督管理局注册批准n批批检合格n临床评估质量优良n在有效期内 2、确认试剂要求n国家食品药品监督管理局注册批准n种类：免疫印迹、条带免疫、免疫荧光n常用试剂：免疫印迹HIV抗体检测试剂n严格按照试剂说明书操作n防止交叉感染n严格遵守实验室操作规程HIV抗体检测筛查试验检测程序n筛查试验：（1）阴性反应，报告HIV抗体阴性 （2
5、）阳性反应，须进行重复检测n重复检测：（1）采用原有试剂和另外一种不同原理或不同 厂家的试剂 （2）如两种试剂均阴性，报告HIV抗体阴性（3）如均阳性或一阴一阳，送确认实验室确认 ，新采标本和原标本一并送检HIV抗体检测筛查试验的流程图样品筛查检测重复检测筛查试剂阳性反应阴性反应一阴一阳均阴性反应均阳性反应阴性报告送确认实验室 进行确认原有试剂加另外一种筛查试剂HIV抗体检测确认试验试剂：有免疫印迹试剂HIV1+2混合型和单一型 1.用HIV1+2混合型阴性，报告HIV抗体阴性阳性，报告HIV-1抗体阳性如不满足阳性标准，判为HIV抗体不确定 2.如出现HIV-2型的特异性指标条带用HIV-2
6、单一 型阴性，报告HIV-2抗体阴性阳性，报告HIV-2抗体阳性如需鉴别，应进行核酸序列分析HIV抗体检测确认试验流程图免疫印迹法（HIV1/2混合型）阴性反应HIV-1阳性反应不确定反应出现HIV-2指示条带免疫印迹法（HIV-2）阳性反应阴性反应报告HIV-2血清学阳性 必要时测核酸不确定反应阴性反应阴性报告HIV-1阳性报告每3个月随访一次，共2次，仍属可疑，则作阴性报告；如随访期间出现阳性反应则报告阳性HIV抗体检测确认试验结果和判定1.HIV-1抗体阳性至少有二条Env带出现或至少有一条Env带和 P24带同时出现 2.HIV-2抗体阳性：同时符合以下二条标准符合WHO阳性判定标准，
7、即出现至少二条Env 带符合试剂盒提供的阳性判定标准 3.HIV抗体阴性无HIV抗体特异带出现 4.HIV抗体不确定出现HIV抗体特异带，但不足以判阳性两种不同结构蛋白HIV-1 HIV-2 Env Gp160 Gp140 Gp120 Gp105 Gp41 Gp36 Gag P55 P56 P24 P26 P17 P16 Pol P66(65) P68 P51 P53 P31 P34 检测结果的报告和处理HIV抗体筛查1.筛查试验阴性出具HIV抗体阴性报告 2.筛查试验阳性可出具“HIV抗体待复查”报 告 （附表1），不能出阳性报告。尽快进行以 下处理：n填写HIV抗体复查送检单（附表2）n尽
8、可能重新采集受检者的血样n将两份血样（或原血样）连同复查送检单一 并送HIV筛查中心实验室，转送确认实验室或 直接送确认实验室确认检测结果的报告和处理HIV抗体筛查n筛查中心实验室尽快用两种试剂复检。n如结果均阳性或一阴一阳，则将标本和复查单一 并送确认实验室确认n如结果均为阴性，在HIV抗体筛查报告上盖上“HIV抗体阴性”，及时将结果反馈送检单位，不必再 送确认实验室n做好检测后咨询检测结果的报告和处理HIV抗体确认1、HIV抗体阳性应出具阳性确认报告（附 表3），并做好咨询，保密和报告工作 2、HIV抗体阴性应出具阴性确认报告，如 近期有高危行为，为排除“窗口期”的可能，可以进行P24抗原
9、或HIV核酸检测或2-3个月后再做抗体检测检测结果的报告和处理HIV抗体确认3、HIV抗体不确定，应出具HIV抗体不确定确认报告，在备注中应注明“3个月后复查”，同时进 行以下处理：-随访复查：每3个月随访复查一次，连续2次，共 6个月。仍呈不确定或阴性，则报告HIV阴性； 如随访期间发生带型进展，符合阳性判定则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性-必要时可做P24抗原或HIV核酸测定，结果只作 辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果-做好检测后咨询HIV抗体检测情况报告流程图艾滋病筛查实验室艾滋病筛查中心实验室艾滋病确认实验室艾滋病确认中心实验室同级卫生行政部门国家艾滋病参比实验室省级卫生
10、行政部门中国CDC性艾中心每季首月5日前报告 上季检测情况每季首月10日前 报告上季检测情况每季首月15日前 报告上季检测情况每季首月20日前 报告上季检测情况没有艾 滋病筛 查中心 实验室 的地区每季首月5日前 报告上季检测情况HIV感染监测工作中实验室检测策略符合以下三条，可按HIV感染报告疫情。 1.艾滋病确认中心实验室条件：本年度质量考评成绩优良有严格的实验室质量管理制度 2.HIV抗体筛查试剂条件 经过国家食品药品监督管理局批准或注册，批批检验合格，临床评估质量优良复检用两种不同原理或不同厂家的筛查 试剂（包括进口或国产第三代ELISA试剂 ）HIV感染监测工作中实验室检测策略3.H
11、IV抗体阳性的判定条件 两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA 试 剂复检样品OD值与临界值（Cutoff）的比值（S/CO）6.0 两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA 试剂复检样品S/CO比值在1.0-6.0之间，或 两种试剂复检结果一阴一阳，应进一步确认检测及疫情报告流程图送检样品用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括第三代ELISA试剂）第三代ELISA试剂复测 结果的S/CO比值6.0第三代ELISA试剂复测结果 的S/CO比值1.06.0之间确认试验判断阳性，上报疫情判断阴性阳性反应选用筛查试剂阴性反应两种均阳性一阴一阳两种均阴性阳性 阴性P24抗原检测1、适用范围：n
12、HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断nHIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助 鉴别诊断n第四代HIV-1抗原/抗体ELISA检测呈阳性反应，但确认试剂阴性者的辅助诊断n监测病程进展和抗病毒治疗效果P24抗原检测2、试剂：经批准注册的ELISA双抗体夹心法试剂 3、操作：严格按照试剂盒说明书 4、结果报告和解释：P24抗原阳性必须经过中和试验确认P24抗原阳性仅作HIV感染的辅助诊断依据，不能确诊P24抗原阴性只表示本试验无反应，不 能排除HIV感染HIV核酸检测实验室条件n功能分区：在不同的房间分别设有试剂准 备区、样品处理区，扩增区和扩增产物分 析区四个功能不同的独立工作去n工作人员：必
13、须具有艾滋病实验室的上岗 资格，一并接受过安全及操作技术培训n设施和设备：根据检测项目配备相应的设 施和设备各区的设施和设备为区域性专用各区备有专用工作服、帽子和鞋套，必 要时配备防紫外线眼镜或面罩HIV核酸检测方法和试剂n分类：定性和定量检测两类定性：HIV感染的辅助诊断定量：监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治 疗效果n方法：定性：常用PCR或RT-PCR技术定量：常用逆转录PCR实验（RT-PCR）核酸 序列扩增实验（NASBA）分支DNA杂交 实验（bDNA）n试剂：通用的扩增试剂，引物来自文献或自行 设计HIV核酸检测检测程序n样品的采集和处理n核酸提取n试剂配置n加样和扩增n扩增产
14、物测定和分析n定量检测HIV核酸检测结果的判定和报告1、定性检测：根据扩增产物的电泳图像判 定阳性结果要进行核酸序列测定确定阴性：报告本次实验结果阴性，不排除HIV感染阳性：作为诊断HIV感染的辅助指标， 不 单独用于HIV感染的诊断报告定性检测结果时注明反应条件和所 使用的引物序列HIV核酸检测结果的判定和报告2、定量检测：按照仪器读数报告结果，注明试验方法 、样品种类和样品量注明最低检测限水平，低于最低检测限 的结果不能排除HIV感染附上仪器打印的数据HIV核酸检测实验室管理制定严格的实验室管理制度，并严格遵 照执行。n生物安全n严格执行分区制度n仪器和材料的专用制度n单向流向制度，不得逆
15、向流动n废弃物处理制度n质量控制和评价艾滋病检测实验室安全防护n建立安全制度n人员管理和培训n安全保障措施- 个人保健- 带入或带出实验室的物品- 减少利器的使用- HIV消毒方法n实验室事故处理- 紧急处理措施- 事故登记（附表5）- 报告和检测- HIV职业暴露后的药物预防（附表6）艾滋病实验室质量管理n质量保证（QA）n质量控制（QO）n质量评价（EQA） HIV确认实验室质量考评办法n考评目的- 评价HIV抗体检测和确认的水平，为各实验室 提供外部质控机制，为检查和重新认定资格提供技术依据- 促进实验室建设，逐步完善实验室功能- 提高实验室技术和管理水平n考评对象及组织单位- 所有经正
16、式批准的实验室为受考评单位- 中国CDC组织并委托性病艾滋病中心负责考评工作- 考评每年一次HIV确认实验室质量考评办法n考评内容和方式- 内容：HIV抗体筛查和确认技术，结果报告和各项职能工作的完成情况- 方式：实验操作；问卷调查；现场抽查n考评工作程序- 审评专家组确定考评的具体实施方案，问卷调查内容及 有关事宜- 制备考评血清（6-10份样），随机编号发给参评实验室 ，同时发给考评问卷调查表- 参评实验室检测考评血清- 按规定期限上报检测报告和问卷调查表- 检测结果的评判- 结果反馈HIV确认实验室质量考评办法n考评结果的判定n考评结果的处理- 对考评合格实验室的资格认证和鼓励- 对考核成绩较差的实验室进行以下整顿：考评不及格、核查确有质量问题的，上报组织单位转报 卫生部疾控司，由卫生部疾控司发撤销实验室资格的通知考评较差的，暂停确认资格，限期3个月整改，整改后 仍不合格者按上述规定处理暂停确认资格的，一年内若不申请再次考评者，撤销其 资格 撤
