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1、HDL和LDL胆固醇检测方法学进展和比较班级：10检二 姓名： 陈艳慧 学号：6302410068HDL HDL(high density lipoprotein)，运载周围组 织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通 过胆汁从肠道排出，动脉造影证明高密度 脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈 显著的负相关。所以高密度脂蛋白是一种 抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病 的保护因子。俗称“血管清道夫”。LDL LDL的功能是转运胆固醇到外围组织，并调 节这些部血浆脂蛋白位的胆固醇从头合成 。 血浆中的胆固醇是疏水性物质必须与血液 中HDL,LDL和PL等一起组成脂蛋白HDL-C的检验方法 超速离心法
2、 电泳法 化学沉淀法 直接测定法超速离心法 美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C 的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推 荐。该法分三步进行：(1)超速离心 (40000r/min，18.5小时)除去密度(d) 1.006 kg/L富含甘油三酯的脂蛋白(CM、 VLDL)。(2)下层悬浮液用肝素-MnCl2法 (Hep-Mn2+法)离心沉淀(1 500g，30分钟 )，以除去富含apoB的脂蛋白LDL、Lp(a) 。(3)测定上清液中chol含量，方法用 CDC参考方法(ALBK法)。 电泳法原理在一定电场条件下，由于各种脂蛋白的分 子大小及其在缓冲溶液中所带电荷数的不 同，故在支
3、持介质上迁移率亦不同。较小 的HDL分子向阳极有较高的迁移率，可将 HDL与VLDL、LDL区分开。 电泳法 Helena公司已开发可供REP快速全自动 电泳仪使用的HDL-C检测试剂盒，其原理是 ：血清(1 l)经琼脂糖凝胶电泳(400V， 15分钟)后，将chol基质试剂均匀铺在凝胶 表面，孵育一段时间(10分钟)后用10%冰醋 酸固定，然后将凝胶烤干。570 nm波长下 自动扫描即可确定HDL-C百分含量。同时将 血清TC值输入，则可求得血清HDL-C值。化学沉淀法 常用的沉淀剂为多阴离子，如磷钨酸(PTA) 、DS、肝素(Hep)或非离子多聚体如聚乙二 醇(PEG)与某些两价阳离子(如
4、Mg2+、Ca2+ 、Mn2+)合用能使除HDL外含apoB的脂蛋白 都沉淀。 HDL中chol多用酶法(CHOD-PAP) 测定。美国Reference Diagnostics公 司推出新一代磁化DS沉淀法检测试剂盒 。其原理是单一沉淀剂与血清标本15 混合在一标本杯中，然后将标本杯放进 磁盘，非HDL脂蛋白颗粒因被磁化，能很 快被磁盘吸至杯底(沉淀)，而与HDL颗粒 分离(上清)。此过程简单迅速，不需离 心，无HDL共沉淀及含apoB颗粒沉淀不完 全现象。结果准确，不受高TG干扰，比 传统DS50-Mg2+法测定时间大大缩短，亦 有一定应用价值。直接测定法l 清除法（反应促进剂-过氧化物酶
5、清除剂清 除剂和过氧化物酶清除法） l PEG修饰酶法 l 选择性抑制法 l 免疫分离法（PEG/抗体包裹法和抗体免疫 分离法）PEG/抗体包裹法 akuyama等用PEG和抗apoB、抗apoC 抗体包裹非HDL的脂蛋白，然后用酶法直接 测定HDL-C的自动化分析方法。日本International Reagents公 司已研制成功可供商品化自动检测的试 剂盒。测定过程包括4种试剂：低浓度 的PEG4000，包裹CM、VLDL、LDL。特 异性抗apoB、apoC抗体，使CM、VLDL 和LDL复合物凝聚。酶试剂，用于检测 上述复合物以外脂蛋白胆固醇(即HDL-C) 。盐酸胍试剂，终止酶促反
6、应和溶解 含apoB脂蛋白复合物，以免其干扰吸光 度测定选择性抑制法（PPD法） 应用两种不同的表面活性剂及多阴离子， 根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL -C。 第一反应中，加入多阴离子和分散型表面 活性剂(亦称反应抑制剂)，LDL、VLDL和CM 先在多阴离子下聚集，由于反应抑制剂与 LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和 力，故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形 成遮蔽圈。同时在HDL表面也吸附有少量反 应抑制剂，但由于亲和力较弱，其结合是 可逆的 第二反应中，与胆固醇酶试剂一起加入具 有对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力的可 溶性表面活性剂(亦称反应促进剂)，由于 反应促进剂
7、对HDL可溶性的强特异性作用可 置换其表面吸附的少量反应抑制剂，从而 与酶试剂反应，达到无需沉淀分离直接测 定HDL-C的目的。超速离心-高效液相色谱测定血清高 密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇：一 种候选参考方法检测方法学比较方法 优点 缺点超速离心 法结果精确，一般适用于研究 方面由于需超速离心机，操作复杂 且严格，所需标本量大(5 ml血 浆)，离心时间长，一般实验室 难以开展，不适于大规模标本 比较研究。 电泳法此法与PTA-Mg2+法有较好相关 性，可用于高TG标本检测，也 常用于评价各种化学沉淀法沉 淀是否完全等，目前多用于临 床研究。化学沉淀 法此类方法操作简单，不需昂贵 设备且费
8、用较低，适用于普通 实验室。被NCEP推荐为常规方 法化学沉淀法多受高TG影响， 含apoB颗粒因不能完全沉淀 而导致HDL-C假性增高直接测定 法不需沉淀，可用于仪器自动化 测定，为临床及时、快速、准 确测定HDL-C及标准化工作提 供了条件。 超速离心-高效液相色谱 a)用超速 离心法分离脂蛋白，所分离的脂蛋白与应 用最广泛的脂蛋白定义一致， b)HDL不受 Lp(a)污染 c)分离过程影响因素少d)所需样 品量小（0.1 ml），且一次可分析50个样品 e)用稀释器代替手工容量操作, 操作简便 ，精密度良好,可以测定脂蛋白类LDL-C的检测方法免疫分离法比浊法选择性测定法免疫分离法 该法
9、是通过使用包被有高亲和力的羊抗人 apoAI和 apoE多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳 ，用一种特制的具有离心过滤装置的双层 试管，当一定量的血清和已包被有抗体的 聚苯乙烯胶乳悬液被加入到双层离心试管 中，使 apoAI和 apoE抗体与血清中的 cM 、 vLDL、 lDL和 hDL发生作用，然后 1500g离心5min,免疫沉淀的 cM、 vLDL、 iDL和 hDL被过滤装置截留在内层小试管内 ，含有 lDL的滤液被外层试管回收，通过 酶法测定滤液中胆固醇的浓度，即可得出 lDL-C的含量比浊法 其测定原理是血清中 lDL抗原与试剂中羊 抗人 lDL抗体作用，形成抗原抗体复合物 ，并产生浊度，
10、该浊度的高低在过量抗体 存在时，与抗原（ lDL）的含量成正比， 同时，由于反应液中含有稳定剂可使非 ag -Ab复合物（如脂类、大分子蛋白多聚物等 ）消浊，而消除非特异性干扰，用已知 lDL-C值的参考血清的浊度计算出待测标本 中 lDL-C的浓度。选择性测定法 日本第一化学药品株试会社(Daiichi)推出 lDL-C直接测定试剂盒，该试剂盒为液体双 试剂盒，适用于各类自动生化分析仪，在 无需标本预处理的情况下，实现 lDL-C自 动化分析。该法原理14是试剂1中的表面 活性剂可使样品中的 hDL、 vLDL和 cM颗 粒解离，胆固醇分子被释放出来，立即同 胆固醇酶试剂反应，产生的 h2O
11、2 在缺乏偶 联剂时被消耗而不显色，此时 lDL颗粒仍 是完整的，加入试剂2（含另一种表面活性 剂和偶联剂），它可使 lDL颗粒解离释放出胆固 醇，在胆固醇酶试剂的作用下，产生 h2O2，参与 trinder反应而显色,色泽的 深浅与 lDL-C的含量成正比，通过与相 应的标准品（ lDL-C的校正物）比较， 计算出样品中 lDL-C的含量。方法 优点 缺点免疫分离法免疫分离法尽管称为直接测 定法，但仍需将血清用连接 有抗体的聚苯乙烯胶乳免疫 分离预处理过程，且本试剂 价格昂贵比浊法免疫比浊法，简便、快 速、成本低，适用于自动化 生化分析仪。选择性测定 法选择性测定法简便快速、微 量准确，可适用于具有双试 剂加样功能的各类自动化分 析仪，是比较理想的 lDL-C 自动生化分析方法目前尚无国产试剂，由于进 口试剂价格昂贵，限制了本 法在国内的广泛应用。 Thank you
