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1、业界之最 享誉全球主要内容主要内容l l 手性色谱基础和大赛璐手性柱手性色谱基础和大赛璐手性柱l l 涂布型正相手性分析方法开发涂布型正相手性分析方法开发l l 涂布型反相手性分析方法开发涂布型反相手性分析方法开发l l 化学键合型手性分析方法开发化学键合型手性分析方法开发l l 常见手性分析问题与注意事项常见手性分析问题与注意事项液-液萃取法生物催化法不对称合成法 膜分离法传感器法结晶法毛细管电泳色谱法手性分离方法手性色谱技术手性色谱技术超临界 (SFC) 气相色谱 （GC） 薄层色谱 （TLC） 逆流色谱 （CCC） 模拟移动床 (SMB) 高效液相色谱 （HPLC） 色谱法手性色谱技术手
2、性色谱技术方法精度说明旋光法低 (5%)非对映体异构体法高 (0.1%)几十毫克.中等(2%)几毫克需要位移试剂.色谱法高 (0.1%)微克-毫克HPLC、GC、SFC对映体纯度测定方法及其比较几十毫克样品用量需要其它的手性化合 物来制备非对映体需要真实样品手性色谱固定相法基本原理 操作简单 不需要预处理 准确度高即可用于对映体的常规分即可用于对映体的常规分 析，也可实现大规模制备析，也可实现大规模制备RR对映体分离 示意图SSSSSSS S SSR,S 消旋体 (racemate)手性选择剂RSRRRRRRRR引入手性环境 是实现手性分 离的前提Daicel手性色谱柱一览表正相l直链淀粉衍生
3、物CHIRALPAK AD / AD-H/AD-3CHIRALPAK AS / AS-H/AS-3CHIRALPAK AY-H/AY-3CHIRALPAK AZ-H/AZ-3l纤维素衍生物CHIRALCEL OD / OD-H/OD-3CHIRALCEL OJ / OJ H/OJ-3CHIRALCEL OZ H /OZ-3CHIRALCEL OA, OB, OCCHIRALCEL OF, OG, OKCHIRALCEL CA-1反相CHIRALPAK AD -RH/AD-3RCHIRALPAK AS RH/AS-3RCHIRALCEL OD-RH/OD-3RCHIRALCEL OJ RH/OJ
4、-3RCHIRALPAK AY RH/AY-3RCHIRALCEL OZ RH/OZ-3R其它 Chiral -AGP CROWNPAK CR (), () CHIRALPAK OT(), OP () CHIRALPAK WH, MA () CHIRALPAK QD-AX CHIRALPAK QN-AX共价键合型CHIRALPAK IA/IA-3CHIRALPAK IB/IB-3CHIRALPAK IC/IC-3大赛璐固定相：大赛璐固定相： USPEPUSPEP中国药典中国药典涂布型正相手性柱：涂布型正相手性柱：手性分析方法的建立和优化手性分析方法的建立和优化分析条件优化流程图 (1)酸性 中
5、性碱性1. 1. 确认流动相中是否使用酸、碱添加剂确认流动相中是否使用酸、碱添加剂配制流动相配制流动相Hex/IPA/TFA =70/30/0.1Hex/IPA/DEA =70/30/0.1Hex/IPA =70/30样品样品碱性 样品添加物在分离中的作用添加物在分离中的作用mVMinutes0.01.02.03.04.05.06.07.002468101214161820222410.7413.96Hex/IPA/DEA=90/10/0.1流量：1.0mi/min. 温度：25、检测波长：（254）流动相 Hex/IPA=90/10Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1流动相 Hex/
6、IPA=90/10-0.10-0.050.000.050.100.150.200.250.300.35mV024681012141618202224262830Minutes10.940.40流量：1.0mi/min.温度：40、检测波长：（254）05101520253035mV0123456789101112131415 Minutes6.667.52Minutes0.00.20.40.60.81.01.21.41.6mV0510152025303540酸性 样品（没出峰 )（无法分离 )添加物的种类和用量添加物的种类和用量样品酸碱性样品酸碱性添加物种类添加物种类添加量添加量中性中性不需要
7、不需要碱性碱性二乙胺二乙胺 (DEA)(DEA) (n-(n-丁胺丁胺* *1 1) )( (乙醇胺乙醇胺* *2 2) )0.50.5 通常通常0.10.1酸性酸性三氟乙酸三氟乙酸 (TFA)(TFA) 醋酸醋酸0.50.5 通常通常0.10.1*1 主要用于1级胺 *2 主要用于1级氨基醇Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow:2.0ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/DEA=85/15/0.1不同添加剂对手性分离的影响不同添加剂对手性分离的影响Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow:1.2M
8、L/MIN Mobile phase: CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.1对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1)Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1)Column: OZ-H (4.6(150m
9、m) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase: hexane/IPA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05)分析条件优化流程图分析条件优化流程图 (2 (2) )保留时间?长长适宜的分析时间(10-30 min.)短短增加 异丙醇 增加 正已烷烷2. 2. 配制好流动相配制好流动相选择合适的手性柱选择合适的手性柱分析分析分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （3 3）没有分离没有分离部分分离部分分离3. 3. 选择合适的手性柱选择合适的手性柱尝试别的手性柱尝试别的手性柱 OK!基线分离基线分离继续优化分析条件继续优化分析条件分离？筛选结果筛选结果0
10、510152025303540455055600123456789101112131415 Minutes4.684.82OB15mV1234567891011121314 Minutes6.716.87OD05101520253035404550556065mV0-505101520253035mV0123456789101112131415 Minutes6.667.52AD05101520253035404550556065mV0123456789101112131415OJmV01020304050607080mV012345678910111213144.7090 AS1501020
11、304050607080901000123456789101112131415 Minutes4.70OCMinutes1020304050607080mV0123456789101112131415 Minutes4.3615OGMinutes001020304050607080mV01234567891011121314 Minutes4.36OF色谱条件流动相： Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1 流量：1.0ml/min. 温度 ：40 检测波长 ：UV254nm 样品：选择效果最好的手性柱, 然后继续优化分析条件分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （4-A4-A）部
12、分分 离A.降低异丙醇浓度 B. 调整温度C. 更换醇类4. 4.分析条件继续优化分析条件继续优化醇浓度的影响醇浓度的影响05101520253035mV012345678910 11 12 13 14 15 Minutes6.66 7.52在多数情况下，降低醇的浓度可延长保持时间，改善分离度Column：AD, Temp.：40, Flow rate： 1.0ml/min. Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1-0.50.00.51.01.52.02.53.03.5mV051015202530354045505560 Minut
13、es35.7743.71Sample：Flurbiprofen部分分 离B. 调整温度C. 更换醇类4. 4.分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （4-B4-B）A.降低异丙醇浓度温度的影响温度的影响Column：CHIRALPAK AD Mobile phase： Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1, Flow rate：1.0ml/min. 2540Temp.： 5降低柱温可增大值，但会使峰形变宽升高柱温会减少值，但会使峰形尖锋-0.50.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.001234567891011
14、12131415 Minutes8.7212.13:1.59mVMinutes0510152025303501234567891011121314156.667.52:1.23mV01234567890123456789101112131415 Minutes7.669.12:1.32Temp.： 25Rs: 1.99Temp.： 20Rs: 2.78Temp.： 15Rs: 3.56温度的影响温度的影响Column: CROWNPAK CR(+) (4.6*150 mm) Mobile phase: PH=1.0高氯酸 Flow: 0.3 ml/min Sample: 苏氨酸部分分 离C.更
15、换醇类B. 调整温度4. 4.分析条件继续优化分析条件继续优化A.降低异丙醇浓度分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （4-C4-C）由异丙醇换为乙醇-选择性增大Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1IPA和EtOH有时会使峰形和值发生明显变化Column：CHIRALPAK AD Temp.：40, Flow rate： 1.0ml/min. Sample：Flurbiprofen05101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52 =1.2305101520253001234567891011121314157.589.64 =
16、1.45mVMinutes Hex./EtOH/AcOH=95/5/0.1由异丙醇换为乙醇由异丙醇换为乙醇-更好的选择性更好的选择性Column: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1)Column: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1)IA-H80I20DEA0.1-1.0mlmin-35IA-M100DEA0.1-1.0mlmin-35OZ-H，Hexane/IPA /TFA/DEA=
