《牛睾丸n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《牛睾丸n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质研究（40页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、基础兽医学专业毕业论文基础兽医学专业毕业论文 精品论文精品论文 牛睾丸牛睾丸 N-N-乙酰乙酰-D-D-氨基氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及性质研究葡萄糖苷酶的分离纯化及性质研究关键词：牛睾丸关键词：牛睾丸 葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶 分离纯化分离纯化摘要：以牛睾丸为材料，通过 0.01mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH7.5，内含 0.2mol/L NaCl)抽提、硫酸铵分级分离获得粗酶，通过 DEAE-Cellulose(DEAE- 32)阴离子交换柱、Sephacry S-300 凝胶过滤柱层析 2 次层析纯化，获得比活 力为 658.21 Umg1 的聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯 N-乙酰-D
2、-氨基葡萄糖苷 酶制剂(NAGase，EC3.3.1.52)。测得酶的等电点为 5.54，分子量约为 68.3 kDa，每个酶蛋白分子含有 364 个氨基酸残基，其中非极性占 35.2，碱性占 16.4，酸性占 24.2；极性不带电荷的占 24.2。该酶为单亚基酶，肽链内 含有二硫键。该酶为糖蛋白，其中含糖量为 3.03(W/W)。以对硝基苯-N-乙酰 -D-氨基葡萄糖(pNP-NAG)为底物，测得该酶在 0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH5.6) 中催化水解 pNP-NAG 的最适 pH 为 5.6，最适温度为 50。该酶在 pH3.06.6 区域较稳定；在 55以下处理 30 min，酶活
3、力保持稳定。在 pH5.6 的条件下， 酶水解 pNP-NAG 的米氏常数 Km 为 0.71mmolL-1，最大反应速度 Vm 为 16.716molL-1min-1，酶催化 pNP-NAG 反应的活化能 Ea 为 64.19kJmol-1。 金属离子对牛睾丸 NAGase 活力影响的研究表明：Na+在低 浓度(010mmol/L)下对酶的活力没有影响，在高浓度(01.0mol/L)下， Na+ 对酶有微弱的抑制作用。Cu2+对酶有微弱的抑制作用。 Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶有不较强的抑制作用。Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+ 对酶的抑制表现均为可逆非竞争性抑制机制，M
4、g2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶的 抑制常数 KI 分别为 75.26mmolL-1、87.37 mmolL-1、2.21 mmolL-1 和 41.18 mmolL-1。 研究 15 种氨基酸对牛睾丸 NAGase 活力影响的结果表明： 在特定浓度范围内，L-Ile、L-Met，L-Phe、L-Ala，L-Leu，L-Pro 等非极性氨 基酸对牛睾丸 NAGase 的活力没有显著影响， L-Thr、L-Gly、L-Gln、L- Ser、L-Asn、L-His 等极性氨基酸对酶活力也没有显著影响，L-Val 对酶活力有 微弱的激活作用，L-Arg、L-Lys 对牛睾丸 NAGase 有
5、不同程度的抑制作用。L- Arg 对酶的抑制表现为可逆非竞争性机制，L-Arg 的 KI 为 24.22 mmolL- 1。L-Lys 对酶的抑制表现为可逆反竞争型机制，其 K1 为 3.597 mmolL-1。 牛精液稀释成分青霉素钠、硫酸链霉素对酶的活力没有影响。柠檬酸钠对酶有 微弱的抑制效应，氯化钾对酶有先扬后抑作用。葡萄糖和碳酸氢钠对酶有不同 程度的抑制作用，葡萄糖对酶的抑制作用表现为可逆竞争性抑制机制，其局为 0.36 molL-1。碳酸氢钠对酶的抑制作用表现为可逆反竞争性抑制机制，其抑 制常数 K1 为 7.01 mmolL-1。正文内容正文内容以牛睾丸为材料，通过 0.01mol
6、/L Tris-HCl 缓冲液(pH7.5，内含 0.2mol/L NaCl)抽提、硫酸铵分级分离获得粗酶，通过 DEAE-Cellulose(DEAE- 32)阴离子交换柱、Sephacry S-300 凝胶过滤柱层析 2 次层析纯化，获得比活 力为 658.21 Umg1 的聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯 N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷 酶制剂(NAGase，EC3.3.1.52)。测得酶的等电点为 5.54，分子量约为 68.3 kDa，每个酶蛋白分子含有 364 个氨基酸残基，其中非极性占 35.2，碱性占 16.4，酸性占 24.2；极性不带电荷的占 24.2。该酶为单亚基酶，肽链内 含有二硫
7、键。该酶为糖蛋白，其中含糖量为 3.03(W/W)。以对硝基苯-N-乙酰 -D-氨基葡萄糖(pNP-NAG)为底物，测得该酶在 0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH5.6) 中催化水解 pNP-NAG 的最适 pH 为 5.6，最适温度为 50。该酶在 pH3.06.6 区域较稳定；在 55以下处理 30 min，酶活力保持稳定。在 pH5.6 的条件下， 酶水解 pNP-NAG 的米氏常数 Km 为 0.71mmolL-1，最大反应速度 Vm 为 16.716molL-1min-1，酶催化 pNP-NAG 反应的活化能 Ea 为 64.19kJmol-1。 金属离子对牛睾丸 NAGase 活力
8、影响的研究表明：Na+在低 浓度(010mmol/L)下对酶的活力没有影响，在高浓度(01.0mol/L)下， Na+ 对酶有微弱的抑制作用。Cu2+对酶有微弱的抑制作用。 Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶有不较强的抑制作用。Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+ 对酶的抑制表现均为可逆非竞争性抑制机制，Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶的 抑制常数 KI 分别为 75.26mmolL-1、87.37 mmolL-1、2.21 mmolL-1 和 41.18 mmolL-1。 研究 15 种氨基酸对牛睾丸 NAGase 活力影响的结果表明： 在特定浓度范围内，L-Ile、L-
9、Met，L-Phe、L-Ala，L-Leu，L-Pro 等非极性氨 基酸对牛睾丸 NAGase 的活力没有显著影响， L-Thr、L-Gly、L-Gln、L- Ser、L-Asn、L-His 等极性氨基酸对酶活力也没有显著影响，L-Val 对酶活力有 微弱的激活作用，L-Arg、L-Lys 对牛睾丸 NAGase 有不同程度的抑制作用。L- Arg 对酶的抑制表现为可逆非竞争性机制，L-Arg 的 KI 为 24.22 mmolL- 1。L-Lys 对酶的抑制表现为可逆反竞争型机制，其 K1 为 3.597 mmolL-1。 牛精液稀释成分青霉素钠、硫酸链霉素对酶的活力没有影响。柠檬酸钠对酶有
10、 微弱的抑制效应，氯化钾对酶有先扬后抑作用。葡萄糖和碳酸氢钠对酶有不同 程度的抑制作用，葡萄糖对酶的抑制作用表现为可逆竞争性抑制机制，其局为 0.36 molL-1。碳酸氢钠对酶的抑制作用表现为可逆反竞争性抑制机制，其抑 制常数 K1 为 7.01 mmolL-1。 以牛睾丸为材料，通过 0.01mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH7.5，内含 0.2mol/L NaCl)抽提、硫酸铵分级分离获得粗酶，通过 DEAE-Cellulose(DEAE-32)阴离子 交换柱、Sephacry S-300 凝胶过滤柱层析 2 次层析纯化，获得比活力为 658.21 Umg1 的聚丙烯酰胺凝胶电泳
11、单一纯 N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶制剂 (NAGase，EC3.3.1.52)。测得酶的等电点为 5.54，分子量约为 68.3 kDa，每个 酶蛋白分子含有 364 个氨基酸残基，其中非极性占 35.2，碱性占 16.4，酸 性占 24.2；极性不带电荷的占 24.2。该酶为单亚基酶，肽链内含有二硫键。 该酶为糖蛋白，其中含糖量为 3.03(W/W)。以对硝基苯-N-乙酰-D-氨基葡 萄糖(pNP-NAG)为底物，测得该酶在 0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH5.6)中催化水解 pNP-NAG 的最适 pH 为 5.6，最适温度为 50。该酶在 pH3.06.6 区域较稳定； 在 55以下
12、处理 30 min，酶活力保持稳定。在 pH5.6 的条件下，酶水解 pNP-NAG 的米氏常数 Km 为 0.71mmolL-1，最大反应速度 Vm 为 16.716molL- 1min-1，酶催化 pNP-NAG 反应的活化能 Ea 为 64.19kJmol-1。 金属离子 对牛睾丸 NAGase 活力影响的研究表明：Na+在低浓度(010mmol/L)下对酶的活 力没有影响，在高浓度(01.0mol/L)下， Na+对酶有微弱的抑制作用。Cu2+对 酶有微弱的抑制作用。Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶有不较强的抑制作用。 Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶的抑制表现均为
13、可逆非竞争性抑制机制， Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶的抑制常数 KI 分别为 75.26mmolL-1、87.37 mmolL-1、2.21 mmolL-1 和 41.18 mmolL-1。 研究 15 种氨基酸对牛睾 丸 NAGase 活力影响的结果表明：在特定浓度范围内，L-Ile、L-Met，L- Phe、L-Ala，L-Leu，L-Pro 等非极性氨基酸对牛睾丸 NAGase 的活力没有显著 影响， L-Thr、L-Gly、L-Gln、L-Ser、L-Asn、L-His 等极性氨基酸对酶活力 也没有显著影响，L-Val 对酶活力有微弱的激活作用，L-Arg、L-Lys 对
14、牛睾丸 NAGase 有不同程度的抑制作用。L-Arg 对酶的抑制表现为可逆非竞争性机制， L-Arg 的 KI 为 24.22 mmolL-1。L-Lys 对酶的抑制表现为可逆反竞争型机制， 其 K1 为 3.597 mmolL-1。 牛精液稀释成分青霉素钠、硫酸链霉素对酶的 活力没有影响。柠檬酸钠对酶有微弱的抑制效应，氯化钾对酶有先扬后抑作用。 葡萄糖和碳酸氢钠对酶有不同程度的抑制作用，葡萄糖对酶的抑制作用表现为 可逆竞争性抑制机制，其局为 0.36 molL-1。碳酸氢钠对酶的抑制作用表现 为可逆反竞争性抑制机制，其抑制常数 K1 为 7.01 mmolL-1。 以牛睾丸为材料，通过 0
15、.01mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH7.5，内含 0.2mol/L NaCl)抽提、硫酸铵分级分离获得粗酶，通过 DEAE-Cellulose(DEAE-32)阴离子 交换柱、Sephacry S-300 凝胶过滤柱层析 2 次层析纯化，获得比活力为 658.21 Umg1 的聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯 N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶制剂 (NAGase，EC3.3.1.52)。测得酶的等电点为 5.54，分子量约为 68.3 kDa，每个 酶蛋白分子含有 364 个氨基酸残基，其中非极性占 35.2，碱性占 16.4，酸 性占 24.2；极性不带电荷的占 24.2。该酶为单亚基酶，肽
16、链内含有二硫键。 该酶为糖蛋白，其中含糖量为 3.03(W/W)。以对硝基苯-N-乙酰-D-氨基葡 萄糖(pNP-NAG)为底物，测得该酶在 0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH5.6)中催化水解 pNP-NAG 的最适 pH 为 5.6，最适温度为 50。该酶在 pH3.06.6 区域较稳定； 在 55以下处理 30 min，酶活力保持稳定。在 pH5.6 的条件下，酶水解 pNP- NAG 的米氏常数 Km 为 0.71mmolL-1，最大反应速度 Vm 为 16.716molL- 1min-1，酶催化 pNP-NAG 反应的活化能 Ea 为 64.19kJmol-1。 金属离子 对牛睾丸 NAGase 活力影响的研究表明：Na+在低浓度(010mmol/L)下对酶的活 力没有影响，在高
