细胞生物学实验指导(终)1

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1、细胞生物学实验指导细胞生物学实验指导微生物免疫微生物免疫学教研室学教研室20092009 年年 4 4 月月1前言前言细胞生物学实验课的目的，主要在于进行细胞生物学基本技能的训练，验证部分基本原理，培养科学思维方法、学习作风以及独立分析问题和解决问题的能力。细胞生物学是从显微水平、超微水平和分子水平等三个层次研究细胞结构、功能、代谢等的一门学科。细胞生物学是药学本科生的专业一门重要基础课程。为适应目前教学工作的需要，培养实用型人才，提高学生的动手能力，在院系的组织支持下，在全体编者的共同努力下，完成了这本细胞生物学实验指导，希望能借此提高学生的实验课质量，有助于学生对基本理论、基本知识和基本技

2、能的掌握。本实验指导根据医药院校对本科生的教学要求，遵循适用性、科学性和启发性的原则，从实验目的、实验原理、实验材料、实验方法、实验结果等方面入手，较为系统地介绍了细胞生物学的实验内容和基本实验技术。根据本课程内容分掌握和了解部分的两级要求，重点突出，详细编写了验证性实验、综合性实验和选择设计性实验内容，力求实用、简明、清晰。便于学生在有限的时间内抓住重点加深对理论知识的理解，掌握相应的基本技能，培养和训练手脑并用、学会发现问题、思索问题并启发学生解决问题，培养学生养成实事求是和科学求真的好习惯。本实验指导在编写过程中，借鉴了其他大学的实习指导，在此向编写实习指导的作者表示诚挚的感谢！ 本实验

3、指导适用于药学本科专业和相应专业实验教学使用。由于编者水平有限，以及编写时间较仓促，实验指导中难免存在缺点和不足，不当之处敬请老师和同学们不吝指正。我们将在今后的教学工作中不断加以补充和完善。编者2009 年 7 月1目 录病原生物学和免疫学的教学要求和方法2实验一 3细胞膜的通透性观察实验二 6线粒体的超活染色与观察实验三 8细胞内过氧化酶的显示实验四 10酸性磷酸酶的显示方法 实验五 12细胞骨架系统的显示与观察2实验一实验一 细胞膜的通透性观察细胞膜的通透性观察一、实验目的一、实验目的 1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。 2.了解溶血现象及其发生机制。二、实验原理二、实验原理 细胞膜

4、是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控 制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子 可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就 是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗 到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明 的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对 各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发 生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度

5、的一种指标。本实验选用红细胞 作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。三、实验用品三、实验用品(一) 材料 绵羊血细胞 （二）器材 普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml 试管、10ml 刻度离心管、试管 架，2ml 注射器（无需针头）或5ml 移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记 号笔等。（三）试剂 1Alsever 溶液 葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠(Na9C6H5O7.2H2O) 0.89g 柠檬酸（C6H 6O7.H2O） 0.05g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml 调 PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4冰箱保存。2. 0.

6、128 mol/L NaCl 溶液。 3 0.05 mol/L NaCl 溶液。 4 0.4 mol/L NaCl 溶液。 3. 0.128 mol/L NH4Cl 溶液。 4. 0.128 mol/L NH4AC 溶液。35. 0.128 mol/L NaNO3溶液。 7. 0.32 mol/L 葡萄糖。 8. 0.32 mol/L 甘油。 9. 0.32 mol/L 乙醇。 10. 0.32 mol/L 丙酮。 11. 蒸馏水。四、实验操作四、实验操作 1从购买绵羊血取5ml（防止污染） ，放入盛有20ml Alsevers 液瓶中，混匀后置冰箱保 存备用（2 周内使用） 。 2. 使用前

7、，取用 Alsevers 液保存的新鲜血5ml ， 加入8ml 的0.128 mol/L 的 NaCl 溶 液，小心混匀，1000 r/min 离心5min，如此3 次洗涤，最后配成30%的红细胞 （CRBC）悬液。 3. 取11 支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细 胞悬液2 滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。五、观察结果五、观察结果 1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（） ，镜检红细胞完 好呈双凹盘状。 2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（或） ，镜检有部分红细胞 呈碎片。 3.

8、 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（） ，镜检发现细胞全部呈碎片。六、实验建议六、实验建议 1. 血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。 2. 目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液； 3. 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。七、实验报告及作业七、实验报告及作业表4-1 各种溶液的溶血现象观察结果编号 测试溶液 是否溶血 时间 分析原因1 0.128 mol/L NaCl 2 0.05 mol/L NaCl 3 0.4 mol/L NaCl 4 0.128 mol/L NaNO3 5 0.128 mol/L NH4Cl4

9、6 0.128 mol/L NH4AC 7 0.32 mol/L 甘油 8 0.32 mol/L 乙醇 9 0.32 mol/L 丙酮 10 0.32 mol/L 葡萄糖11 H2O书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析见表。目测法判断标准：快速溶血：；慢速溶血：或；不溶血：5实验二实验二 线粒体的超活染色与观察线粒体的超活染色与观察一、实验目的一、实验目的 1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。二、实验原理二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动 和产生任何物理化学

10、变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。因此活染技术通常可用来 研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的 不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注 入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。 体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸 染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料， 可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染 料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体

11、周围的细胞质中，这些染料被还 原为无色的色基(即无色状态)。三、实验用品三、实验用品 （一）材料 肝细胞、人口腔上皮细胞、 （二）器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。 （三）试剂 1Ringer 溶液 氯化钠 0.85g 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 蒸馏水 100ml 2. 1%詹纳斯绿 B 溶液（原液） 称取50mg 詹纳斯绿 B 溶于5ml Ringer，稍加微热(3040)，使之溶解，用滤纸过 滤后，即为1%原液。 3. 詹纳斯绿 B 溶液（应用液） 取1%原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混匀即可。现用现配。四、实验操作四、实验

12、操作 1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 (1) 取清洁载玻片放在37恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿 B 应用染液。 (2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载 玻片的染液滴中，染色1015min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖 上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 (3) 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮 细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒 体。 2. 小白鼠肝细胞线粒体的超活染色观察6(1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织 块，放入表面皿内。用吸管吸取 Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。 (2) 在干净的凹面载玻片的凹穴中, 滴加詹纳绿 B 应用液，再将肝组织块移入染液，注意 不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部