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1、家兔实验性弥散性血管内凝血Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit目的应用静脉注射兔脑浸液方法，复制家兔实验性DIC。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断DIC的常用方法，联系理论知识加深理深DIC的病因及发病机理。 实验内容l称重、固定（清醒状态）、局部浸润麻醉l手术：颈动脉插管，采集正常血标本(3.8% 枸橼酸钠溶液0.5ml，血液4.5ml）l造模：i.v.2兔脑浸液，60mg/kg.b.w.（ 慢,2ml/min）l采集DIC血标本，离心分离血浆备用l测定样本：KPTT,
2、PT,Fg,3Pl讨论、小结测定指标和方法l白陶土部分凝血活酶时间（Kaolin partial thromboplastin time,KPTT）玻片法（挑丝法） l凝血酶原时间(prothrombin time,PT)玻片法（挑丝法） l纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）含量，饱和盐水法l血浆鱼精蛋白副凝固试验（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P） 结果组 别KPTT (sec.)PT (sec.)Fg (mg%)3P正 常DIC正 常DIC正 常DIC正 常DIC12345注意事项1.采血时不得将动脉夹移开，以免放血后 不能及时夹闭动脉
3、造成放血过量和失血。 2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝剂之比例 (1:9)并充分混匀（颠倒混匀）。 3.注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的 一切准备工作，如换好新的动脉插管（因原来 插管内可能已有血栓阻塞），或向导管内注入 生理盐水。 4.注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤， 要缓慢推注(2ml/min)，同时密切注意家兔反 应，如有明显的呼吸急促和躁动不安，应立即 放血。注意事项5.离心分离血浆前，必须先平衡离心管。 分离出血浆吸入清洁试管备用。 6.测KPTT、PT的平皿必须清洁、干燥、无 油脂。KPTT试剂使用前须摇匀。 7.测Fg时，血浆一旦与饱和盐水接触。要 立即进行充分混匀，以防产生
4、局部沉淀，同样 ，比浊前亦要再次混匀。 8.测3P时，要先加血浆，再加鱼精蛋白， 以免鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。 完讨论l兔脑浸液引起DIC的原因和机制？lKPTT、PT、Fg和3P各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化?lKPTT、PT、Fg和3P的测定原理及发生变化的原因和机制?清洁平皿和试剂37预热滴加20ul血浆和20ul KPTT试剂 ,用清洁针头混匀预热3min滴加20ul 0.025mol/L氯化钙溶液,立即启动 秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表 记录时间（正常值3545s）KPTT测定方法清洁平皿和试剂37预热滴加20ul血浆预热1min滴
5、加40ul PT试剂，立即启动秒表， 同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表 记录时间（正常值1113s）PT测定方法纤维蛋白含量测定方法试管编号1234 调100% 管测定管调100% 管测定管生理盐水4.5ml4.5ml饱和盐水4.5ml4.5ml正常血浆0.5ml0.5mlDIC血浆0.5ml0.5ml 37孵浴3min，520nm波长比色，读取OD值纤维蛋白含量测定方法各加生理盐水4.5ml 各加饱和盐水4.5ml （调100管） （测定管）1423正常血浆各0.5ml DIC血浆各0.5ml3P试验试管标记1.正常2.DIC正常血浆0.5mlDIC血浆0.5ml1鱼精
6、蛋白溶液50ul50ul轻轻摇匀，37水浴孵浴15min，黑色背景观察沉淀物DIC动物模型的复制方法l凝血酶l蛇毒l兔脑浸液l内毒素l羊水实验室诊断DIC的方法 筛选指标：l血小板计数（platelet，PLT）l凝血酶原时间(prothrombin time，PT) l纤维蛋白原含量（fibrinogen，Fg）l纤溶指标：FDP测定、3P试验、优球蛋 白溶解时间、D-二聚体，等实验室诊断标准(以下三项以上异常) lPT延长或缩短3s以上，KPTT延长或缩短10s以上；l血浆血小板活化产物含量增加：-TG、PF4、 TXB2、P-选择素；l凝血激活分子标志物含量增加：F1+2、TAT、 FPA、SFMC；l抗凝活性降低：AT-：A降低、PC活性降低；l血管内皮细胞受损分子标志物增高：ET-1和 TM。动脉夹结扎线动脉切口动脉切口示意图动脉
