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1、暗视场显微镜及相差显微镜的使用实验目的掌握暗视场显微镜及相差显微镜的原理、构造及使用方法 。实验内容一 暗视场显微镜1 实验原理 2 结构特点 3 使用方法 4 注意事项二 相差显微镜1 实验原理 2 结构特点 3 使用方法三 观察动植物细胞的胞质运动和胞质环流一 暗视场显微镜（一 ）实验原理暗视野显微镜是以丁达尔效应为基础，通过特殊的聚光器，使照射样品的直射光不能进入物镜，只有被照样品表面反射或衍射的散射光进入物镜，因而在黑暗的视野中形成物体明亮的像。图1 暗视野聚光器工作原理（二） 结构特点1.丁达尔效应：光通过浑浊媒质时 ,浑浊媒质所呈现的光的强烈散射现象,通常称为丁达尔效应2.暗视野照
2、明方法（1）暗视场光挡（2）暗视场聚光器抛物面聚光器心形聚光器（三 ）使用方法 1. 换上暗视野聚光器2. 聚光器和载玻片之间加香柏油并贴紧（或直接用干燥系聚光器）3. 聚光器光路合轴4. 更换需用的高倍物镜进行镜检观察（四）应用价值及注意事项观察活细胞结构 ,细胞器运动等分子布朗运动 .观察超微质点位移(0.20.004微米)提高分辨力50倍由于是散射光成像和实体有差别 ,仅有结构的光轮廓，不能分辨内部改造观察原生动物的结构，细胞器，细胞质中超微质点的运动，存在方式，观察植物细胞器，细胞质运动。（五） 镜检二 相差显微镜（一）实验原理相差显微镜是利用特殊的相差装置 ,通过光的衍射和干涉效应把
3、光波通过样品的相位差变为振幅差以增大透明物体的明暗反差 ,从而可以用来观察未染色的活体组织和细胞结构的一种仪器相位: 是指在某一时间上，光的波动所能达到的位置 .相差: 是指相同波长的光线经过折射率不同的介质，其相位发生变化而产生的位差，相差一般不为肉眼所分辨，而相位的变化是由光程的差别造成的。光程: 是指媒质的折射率和媒质厚度的乘积。衍射: 光在不均一的媒质中传播，其方向发生弯曲变化，形成衍射光，此为衍射现象。衍射光和直射光比较有1/4 的相位差，振幅亦弱 。干涉: 直射光和衍射光相遇会发生迭加现象造成振幅的变化，或明或暗。图2 光波通过不同介质时产生的相位差图3 直射光及衍射光的产生与波动
4、图4 相差显微镜的光路图（二 ） 相差显微镜的结构特1. 用环状光阑代替可变光阑：把直射光所成的像从衍射旁像中分出来。2. 用相差物镜(内含相板)代替普通物镜相板结构共轭面:环状，通过直射光补偿面:非环状，通过衍射光 相板作用:将直射光和衍射光分别加以相位调整及强度削弱 . 相板类型:明相差或负相差 ,暗相差或 正相差 . 3. 用中心望远镜合轴调中 4. 光源和滤色镜：强光低热和绿色滤色镜图5 相板结构示意图图6 光的干涉及明暗相差形成的图解相差装置的安装 相差物镜的调换安装 转盘聚光器的调换安装 把绿色滤色镜放入镜座的滤色镜架上 聚光器的调中 相板圆环与环状光阑圆 ,薄则环的合轴调中相差物
5、镜与环状光阑的匹配 把CT放入目镜筒 明环和暗环的聚焦明环和暗环的调中重叠回装观察目镜 （三） 使用方法图7 相差聚光器及合轴望远镜图8 光环与相板的合轴过程a 未调整状态 b 近调整状态 c 正常态字母 反差 应 用P 正观察细胞和细胞核的内部结构N 负观察微小的物体 ,如孢子 ,鞭毛和活的样品等 H 高当样品反差较低时L 低当样品反差较高时M 中当样品反差为中等时四 相差物镜的选择（五）观察:培养的草履虫装片及其它原生动物鸭趾草下表皮（质点颤动）鸭趾草雄蕊毛（胞质环流） 注意事项:制片愈薄愈好（20微米以下）必须加盖片，否则圆环和亮环不重合，反差不好。玻片无伤，均匀，平整，以免亮环发生歪斜，制片 厚度不超过 1.0 mm ，厚则亮环大，薄则亮环小。如果染色必须浅，而且是淡染。思考题1 试述相差显微镜的成像原理及结构特点2 简述相差显微镜的使用方法及注意事项
