《细胞色素p450-2j3基因干预对果糖you导胰岛素抗合并高血压大鼠生理指标的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞色素p450-2j3基因干预对果糖you导胰岛素抗合并高血压大鼠生理指标的影响（40页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华中科技大学同济医学院硕士学位论文g l u c o s ea n di n s u l i n ；T w e n t y - f o u rh o u ru r i n es a m p l e sw e r ec o l l e c t e di nb r o w nb o t t l e sc o n t a i n i n gd i m e t h y l a m i n ea n ds t o r e da t 一8 0 0 C S e r u mg l u c o s e ，c h o l e s t e r o l ，a n dt r i g l y c e r i d ew e
2、 m e a s u r e di nd u p l i c a t eo rt r i p l i c a t eo na l lA E R O S E TC l i n i c a lC h e m i s t r ys y s t e m I n s u l i nr e s i s t a n c ew a sc a l c u l a t e du s i n gt h eh o m e o s t a s i sm o d e la s s e s s m e n t ( H O M A ) m e t h o d R e s u l t s ：C o m p a r e dw i
3、 t hc o n t r o lr a t sg i v e nn o r m a lw a t e r , h y p e r t e n s i o nW a si n d u c e di nr a t sb ya d d i t i o no f1 5 f r u c t o s et ow a t e ra f t e r3w e e k s ( 1 3 5 5 * 0 6a n d1 1 9 4 ：t - O 7 P C Y F 2 J 3 六p C D N A 3 1 ( + ) - C Y P 2 J 3 在2 9 3 细胞的表达华中科技大学同济医学院硕士学位论文转染p C
4、D N A 3 1 ( + ) 一C Y P 2 J 3 的2 9 3 细胞中检测到了目的蛋白的表达，而2 9 3细胞和转染空载体的2 9 3 细胞没有检测到目的基因的表达吸P 2 J 1 33图6 A ：1 转染p C D N A 3 1 ( + ) - c Y P 2 J 3 的2 9 3 细胞；2 转染p C D N A 3 i ( + ) 的2 9 3 细胞；3 2 9 3细胞。讨论C Y P 2 J 3 基因编码的是一种5 0 2 个氨基酸的表氧化酶，大鼠C Y P 2 J 3 相当于人C Y P 2 J 2 基因，他们同源性8 0 ，在各自物种体内发挥类似的生物作用，同属于C Y
5、P 2 J 亚家族成员1 2 1 。C Y P 2 J 3 和C Y P 2 J 2 都可以代谢内源性的花生四烯酸( e n d o g e n o u s a r a c h i d o n i c a c i d ，A A ) 为1 4 ，1 5 、1 1 ，1 2 、8 ，9 - 、5 ，6 - E E T 和1 9 一H E T E ，E E T s 在体内具有重要的生物学效应C Y P 2 J 3 也在大鼠心肌和肝脏组织有效表达【1 1 。C Y P 4 5 0 代谢花生四烯酸产生的E E T s 有重要的生理作用。已有的实验表明E E T s 通过M A P K 和P 1 3 K
6、A K T 途径产生细胞增殖效应，促使新生血管生成1 3 1 E E T s 被认为是一种E D H F ，并通过激活K + c I 通道使平滑肌细胞超极化产生血管舒张效应，从而调节血管张力1 4 1 。E E T s 对心肌细胞功能也有十分重要的影响。研究表明，5 , 6 - E E T 和1 1 ，1 2 E E T 能明显增加大鼠心肌收缩力。在离体缺血再灌注大鼠心脏模型，1 l ，1 2 E E T 能明显恢复缺血再灌注后的心肌收缩力【珂我们实验室的研究表明E E T s 可以上调e N O S ，产生血管舒张效应从而降低试验组动物血压1 6 ”。另外，C Y P Z l 3 还具有羟化
7、酶活性，在大鼠肝脏V i t D ，2 5 羟化过程中起重要作用【8 】本试验选用的p C D N A 3 1 ( + ) 是目前真核表达外源蛋白的常用质粒，能在哺乳动物细胞中高效连续表达，具有一系列表达调控所需的功能元件：真核表达C M V增强启动子、多克隆位点、B G H p o l y A 转录终止信号、S V 4 0 来源的新霉素抗性选择标记以及能在大肠杆菌选择和维持的C o l E l 和氨苄青霉素抗性基因。我们构建的p C D N A 3 1 ( + ) - - C Y P 2 J 3 真核表达载体为我们后面的试验奠定了试验基础。华中科技大学同济医学院硕士学位论文基因克隆技术过程复
8、杂，我们在试验设计和操作过程中总结了失败的经验和教训，在他人的试验中得到了启发。建立了正确的试验设计方法，我们通过G e n e B a n k数据库得知，C Y P 2 J 3 有假基因存在，而且同源性很高，如果按照常规的R T - P C R克隆策略，也就把假基因克隆出来，势必造成了时间和资金上的浪费。为此我们采用R T - P C R 和O E P C R 结合起来选择分段克隆，在C Y P 2 J 3 P 2 序列缺失区建立O E P C R 的重叠扩增区，轻易的剔除了C Y P 2 J 3 P 2 又根据C Y P 2 J 3 P 1 的多余序列的特有内切酶位点，选择剔除掉了C Y
9、P 2 J 3 P 1 ，成功克隆出C Y P 2 J 3 基因。O E P C R 多应用于定点诱交，基因拼接，融合基因构建和中间缺失突变体的构建，我们运用O E P C R 快捷有效的筛选出目的基因，提供一条基因克隆的新思路，并具有推广价值。p C D N A 3 1 ( + ) C Y P 2 J 3 重组质粒通过脂质体转染，能在2 9 3 细胞稳定有效表达不仅为研究C Y P 2 J 3 蛋白的结构和功能奠定了基础，而且为我们研究C Y P 4 5 0 对于心血管系统的保护奠定了实验基础参考文献1 W uS ，C h e r tW ，M u r p h yE ，G a b e lS ，
10、T o m e rK B ，F o l e yJ ，S t e e n b e r g e nC ，F a l c kJ R ,M o o m a wC R , Z e l d i nD CM o l e c u l a rc l o n i n g , e x p r e s s i o n ，a n df u n c t i o n a ls i g n i f i c a n c eo fae y t o c h r o m eP 4 5 0h i g h l ye x p r e s s e di nr a th e a r tm y o c y t e s JB i o lC h e
11、 m1 9 9 7M a y9 ；2 7 2 ( 19 ) ：1 2 5 5 1 9 2 D a r r y lC Z e l d i n , J u l i eF o l e y , S u s a nM C Y P 2 JS u b f a m i l yC y t o c h r o m eP 4 5 0 si nt h eG a s t r o i n t e s t i n a lT r a c t ：E x p r e s s i o n , L o c a l i z a t i o n , a n dP o t e n t i a lF u n c t i o n a lS i
12、 g n i f i c a n c e M o l e c u l a r p h a r m a c o l o g y5 1 ：9 3 1 9 4 3 ( 1 9 9 7 ) 3 W a n gY ，W e iX ，X i a oX ，H u iKC a r dJ W , C a r e yM A ，W a n gD W , Z e l d i nD C A r a c h i d o n i cA c i dE p o x y g e n a s eM e t a b o l i t e sS t i m u l a t eE n d o t h e l i a lC e l lG r
13、 o w t ha n dA n g i o g e n e s i sv i aM i t o g e n A c t i v a t e dP r o t e i nK i n a s ea n dP h o s p h a t i d y l i n o s i t o l3 - K i n a s e A k tS i g n a l i n gP a t h w a y s JP h a r m a e n lE x pT b e r 2 0 0 5A u g ；3 1 4 ( 2 ) ：5 2 2 3 2 4 O e b r e m e d h i nD ，H a r d e rD
14、 RC a m p b e l lW B ，e ta 1 B i o a s s a yo fa ne n d o t h e l i u m d e r i v e dh y p e r p o l a r i z i n gf a c t o rf r o mb o v i n ec o r o n a r ya r t e r i e s ：r o l eo f华中科技大学同济医学院硕士学位论文ac y t o c h r o m eP - 4 5 0m e t a b o l i t e JV a s cR e s3 5 ：2 7 4 - 2 8 4 ，1 9 9 8 5 W uS ，
15、C h e l aW Z e l d i n ，D C ，e ta 1 1 9 9 7J B i 0 1 C h e m 2 7 2 ，1 2 5 5 1 - 1 2 5 5 9 6 蒋建刚，陈积雄，王红，邓良刚，陈瑞娟，汪道文内外源性E E T s 对血管内皮一氧化氮合酶的表达及其在T h r - 4 9 5 位磷酸化的作用中国药理学通报2 0 0 4 0 4 0 2 5 7 王红，林立，陆再英，汪道文细胞色素P 4 5 0 花生四烯酸表氧化酶B M3 F 8 7 V上调内皮一氧化氦合酶基因的表达自然科学进展2 0 0 2 - 0 7 - 0 0 7 8 T o m o a k iY a m
16、 a s a k i e ta 1 I d e n t i f i c a t i o no faN o v e lR a tM i c r o s o m a lV i t a m i nD 32 5 H y d r o x y l a s e J B i 0 1 C h e r n ，V 0 1 2 7 9 ，I s s u e2 2 ，2 2 8 4 8 2 2 8 5 6 ，M a y2 8 ，2 0 0 4 华中科技大学同济医学院硕士学位论文第三部分C Y P 2 J 3 基因降低果糖诱导的大鼠高血压并改善胰岛素抵抗前言高血压是当今社会最常见的心血管疾病之一我国自2 0 世纪5 0 年代以来进行了三次( 1 9 5 9 年，1 9 7 9 年，1 9 9 1 年) 成人血压普查，高血压患病率分别为5 o o、7 7 3 与1 1 $ 8 N ，总体上呈现明显上升趋势。
