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1、A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义摘要目的：通过检测0 【甲基酰基辅酶A 消旋酶( 0 【m e t h y l a c y l c o e n z y m eAr a c e m a s e ，A M A C R ) 和前列腺干细胞抗原( P r o s t a t es t e mc e l la n t i g e n ，P S C A )在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达情况，分析A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达与病理分级及临床分期之间的关系，探讨A
2、 M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其在临床诊断和预后判断中的价值。方法：选择2 0 0 5 年8 月2 0 0 9 年1 2 月广西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科住院病人前列腺病理组织标本5 5 例，其中前列腺癌组2 5 例，前列腺增生组3 0 例。术前未经放、化疗。所有标本均经福尔马林固定，石蜡包埋。临床资料通过回顾性分析病人的住院病历获得，病理组织资料经重新切片H E 染色由两位临床病理医师共同读片获得。采用免疫组织化学S - P 法检测5 5 例前列腺癌及前列腺增生组织中A M A C R 和P S C A 的表达情况。绘制表格，采用S P S S16 0 统计软
3、件包进行卡方检验和P e a r s o n 相关性分析研究二者的表达及临床、病理特征之间的关系。结果：A M A C R 在前列腺癌组中的阳性表达率为8 0 ( 2 0 2 5 ) ，在前列腺增生组阳性率为O ( 0 3 0 ) ，A M A C R 在前列腺癌组织中的异常表达明显高于前列腺增生组织( P O 0 5 ) 。分析P S C A 在前列腺癌和前列腺增生组中强阳性表达率，前列腺癌组6 4 ( 1 6 2 5 ) ，前列腺增生组3 3 3 ( 1 0 3 0 ) ，两者差异有统计学意义( P 4 n g m l 往往需要进行穿刺活检，当血清P S A 1 0 n g m l 贝J
4、J 高度怀疑患有前列腺癌。然而P S A 是一个组织特异性而非肿瘤特异性标记物，受诸多因素的影响，缺乏癌症诊断的敏感性和特异性。尤其是在血清P S A 在4 1 0 n g m l 这一灰色区间时，前列腺癌的检出率仅为2 5 。并且P S A 水平的高低与肿瘤进展的程度不一定相符，对肿瘤的预后判断帮助也帮助不大，因此需要寻找更为有效地肿瘤标A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义志物以期对前列腺癌做出准确的诊断及预后的判断。0 【甲酰辅酶A 消旋酶( 0 【m e t h y l a c y l c o e n z y m eAr a c e m a s e ，
5、A M A C R )是一种新近发现的前列腺癌标志物。人类A M A C R 基因( 亦称P 5 0 4 S ) 定位于5 号染色体5 P 1 3 2 q l1 1 ，编码相应的蛋白，它是胞质内一种具有3 2 8 个氨基酸的蛋白质，在支链脂肪酸的氧化和衍生过程中起作用。2 0 0 1 年，J i a n g等【1 】首先将P 5 0 4 S 的抗体应用于P C a 的免疫组织化学诊断，在1 3 7 例P C a组织中均见P 5 0 4 S 表达，8 8 ( 1 7 1 1 9 4 ) 良性前列腺组织中未见表达，由此提出P 5 0 4 S 是P C a 高度敏感和特异的肿瘤标记物。目前A M A
6、 C R 在某些地区已经用于临床对前列腺癌的准确诊断有很高的价值。前列腺干细胞抗原( p r o s t a t es t e l lc e l la n t i g e n ，P S C A ) 是1 9 9 8 年由R e i t e r 等【2 】首先在人前列腺癌动物模型L A P C 4 鼠上发现的。是一个与前列腺相关的肿瘤抗原，因其与干细胞抗原2 ( s t e mc e l la n t i g e n2 ，S C A 一2 ) 有3 0 同源性，而被命名为前列腺干细胞抗原。早期研究发现认为，P S C A 最主要在前列腺上皮中表达，其它组织如在胎盘、肾及小肠等仅有低水平表达。G
7、U 等【3 】研究发现P S C A 在膀胱移行上皮、胎盘滋养层、肾小管和胃、结肠的神经内分泌细胞等组织中表达，但其表达水平不足正常前列腺的1 。研究发现P S C A 对前列腺癌的诊断及预后判断有一定得临床价值。以上两种肿瘤标志物已经有学者进行了研究，并且有的已经在临床诊断上的到了应用，都提示对前列腺癌的诊断有一定得意义，但尚未见联合研究的报道，本实验用免疫组织化学方法分别对前列腺癌及前列腺增生的病理标本进行研究，检测A M A C R 、P S C A 在前列腺癌及前列腺增生病理组织标本中的表达与否及表达强弱，并结合病理分级及临床分期来探讨此两种标志物对前列腺癌的诊断及预后判断的价值，了解
8、二者联合使用是否能提高他们的灵敏度与特异度。A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义主要材料、试剂和仪器1 一般资料所有纳入5 5 例均为男性，前列腺癌组2 5 例，前列腺增生组3 0 例。前列腺癌组系2 0 0 5 年8 月2 0 0 9 年1 2 月广西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科住院患者，年龄5 0 8 1 ( 平均7 1 4 ) 岁。均经病理切片H E 染色病理科两位主任医师共同阅片诊断为前列腺癌，并经行G l e a s o n 分级，因2 5 例标本中有6 例为前列腺穿刺活检标本，考虑G l e a s o n 评分结果不可靠，未行G l e a s
9、 o n评分。临床分期根据住院病历回顾性分析，采用2 0 0 2 年A J C C 分期标准。I 期2 例，I I 期5 例，I I I 期5 例，I V 期1 3 例。前列腺增生组系同期在广西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科住院患者，年龄6 1 8 1 ( 平均7 3 9 ) 岁。均经病理切片H E 染色病理科两位主任医师共同阅片诊断为前列腺增生。所有病例术前未经过放疗、化疗。实验组与对照组患者年龄均符合正态分布，两组经成组t 检验无明显差异( P O 0 5 ) 。2 主要试剂2 1兔抗人A M A C R 免疫组化单克隆抗体购自福建迈新生物技术公司，产品编号：R M A 一0 5 4 6 。
10、2 2 兔抗人P S C A 多克隆抗体购自北京中杉生物制品公司，产品编号：Z A 0 1 5 8 。2 3U l t r a S e n s i t i v eS - P 超敏试剂盒( 兔) 购白福建迈新生物技术公司，产品编号：K I T 一9 7 0 6 9 7 0 7 9 7 0 8 。3 主要仪器3 1 普通冰箱。3 2 格兰仕微波炉W P 7 0 0 0 S L l 7 ( J l 顷德市格兰仕电器实业有限公司) 。3 3 光学显微镜( O L Y M P U S ) 。A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义3 4 病理图像分析仪( 德国L E I
11、C A ) 。3 5 载玻片、盖玻片。3 6M i n i S u P e r 以P A PP e n 免疫组化油笔( 福建迈新生物技术开发公司) 。3 7 中性树胶( 福建迈新生物技术开发公司) 。A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其l I 缶床意义方法1 标本的制备石蜡包埋病理组织块均由广西医科大学附属肿瘤医院病理科提供，4 u m 厚连续切片，一张行H E 染色，进行病理组织学观察，并进行G l e a s o n分级( 由2 位病理科主任医师共同完成) 。其他组织切片帖附于多聚赖氨酸玻片上，5 5 烤片过夜备染。2 免疫组化实验步骤实验步骤按试剂盒说明书进行
12、如下：( 1 ) 防脱片处理：将切片置6 0 。C 烤箱烤片3 小时。( 2 ) 脱蜡：二甲苯脱蜡2 次，每次5 分钟。( 3 ) 水化：将脱蜡后的切片经1 0 0 酒精、9 5 酒精、8 5 酒精、7 5 酒精、双蒸水各3 分钟。( 4 ) 抗原修复：D N A8 0 0 1 5 0 0 m l 柠檬酸钠缓冲液( P H 6 0 士O 1 ) 于压力锅中，电炉加热至沸腾。脱腊水化后的组织切片置于耐高温塑料染色架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷气，从喷气开始记时，1 5 分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温。取出玻片，先用自来水冲洗后，置于孵育盒中。P B S 冲洗
13、3 次，每次间隔3 分钟，除去P B S 液。( 5 ) 阻断：每张切片加l 滴或5 0 u l 过氧化氢阻断溶液( 试剂A ) ，室温下孵育1 0分钟，以阻断内源性过氧化酶的活性。P B S 冲洗3 次，每次间隔3 分钟，除去P B S 液。( 6 ) 封闭：每张切片加l 滴正常非免疫羊血清( 试剂B ) ，室温下孵育1 0 分钟。( 7 ) 甩去血清，每张切片加5 0 u l 的一抗，在3 7 。C 恒温箱内孵育2 小时。P B S冲洗3 次，每次间隔3 分钟，除去P B S 液。( 8 ) 每张切片加1 滴二抗，室温下孵育1 0 分钟，P B S 冲洗3 次，每次间隔3A M A C R
14、 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义分钟，除去P B S 液。( 9 ) 每张切片加l 滴链霉菌抗生物素一过氧化物酶溶液( 试剂D ) ，室温下孵育1 0 分钟，P B S 冲洗3 次，每次间隔3 分钟，除去P B S 液。( 1 0 ) 每张切片加2 滴新鲜配制的D A B 溶液，染色3 1 0 分钟，自来水冲洗，苏木素复染，O 1 盐酸酒精分化，显微镜下观察，控制染色程度。( 1 1 ) 脱水：7 5 酒精、8 5 酒精、9 5 酒精、1 0 0 酒精脱水各3 分钟。( 1 2 ) 透明：二甲苯透明2 次，每次3 分钟。( 1 3 ) q b 性树胶封片。3 结果判断A
15、M A C R 阳性定位以胞质为主，以胞质中清晰出现棕黄色颗粒表达的细胞数占细胞总数的比例及染色强度作为判断标准：( 1 ) 染色强度分4 级，不着色0 分，与阳性对照相比，着色稍弱1 分，具有与阳性对照相同的着色为2分，与阳性对照相比着色更强为3 分，( 2 ) 染色密度分4 级，染色细胞L k N 5 0 为3 分，( 1 ) + ( 2 ) 5 0 。为了比较组织间P S C A 表达水平的差异，每一组织切片的表达水平以阳性染色总积分表示，总积分= 该组织切片的阳性染色强( O 3 ) 阳性染色密度( O 3 ) 。依据总积分值，将P S C A 组织表达水平分为4 级，0 分为阴性表达
16、，1 2 分为弱阳性表达，3 5 分为中l lA M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义度阳性表达，6 - - 一，9 分为强阳性表达，将弱阳性、中度阳性和强阳性统称为阳性，分别计算阳性率和强阳性率。4 统计学处理采用S P S S l 6 0 统计软件包经行分析，A M A C R 及P S C A 在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达与临床、病理参数之间的关系，采用卡方检验，两变量的相关关系采用P e a r s o n 相关分析，显著性效验水准a = 0 0 5 。A M A C R 和P S C A 在前列腺癌组织中的表达及其临床意义结果1A M A C R 及P S C A 在前列腺癌及前列腺增生组织的表达情况1 1A M A C R 在大部分前列腺癌组织中腺泡细胞胞质中表达，而在前列腺增生组则全部未见表达。2 5 例前列腺癌组中( ) 表达5 例，( + ) 表达1 0
