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1、流感病毒临床标本的 采集方法、运输、保存处理 概 述u流感病毒分离成功与否很大程度上取决于 临床标本的质量，及其保存运输等环节u多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次 为气管和支气管分泌物及尸检组织一、采样对象和时间 采样对象：流感样病例（没有服用过抗病 毒药物 ）、人禽流感待查病例流感样病例:发热（体温38），伴咳嗽或咽 痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据 采集时间：病人发病后的头三天二、采样液要求 常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hanks液， Eagels培养液或水解乳蛋白溶液 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 标本采集后应立即放入适当
2、的采样液中低 温保存EagelEagelss基础培养基基础培养基抗生素名称终浓度庆大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug/ml 采样液抗生素含量三、临床标本的采集常用的标本种类： 咽拭子 鼻拭子 漱口液 鼻咽吸取物 鼻洗液1、咽拭子用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧 咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3- 4ml采集液中，尾部弃去采咽拭子的器材和容器2、鼻拭子将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻 道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出 ，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头 部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去采鼻拭子的器材和容器3、鼻咽吸取物用与负压泵相连的收集器从鼻咽
3、部 抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接 通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收 集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集 器3次内有HEPA膜进风道鼻咽吸取装置出风道吸取过程正确错误错误不要触摸病人的脸!4、漱口液用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者 头部微后仰，发“噢”声，让生理盐 水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯 收集洗液5、鼻洗液患者取坐姿，头微后仰，用移液 管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患 者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者 低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯 收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔四、标本收集注意事项 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我 保护 采集标本要有一定力度
4、标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存， 因为流感病毒对热很敏感 标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名， 性别， 采样日期 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒 分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放- 70 或以下 新鲜的临床采集标本应在4条件下，24小时内运送至全国流感监 测网络实验室；未能24小时内送至实验室的，应 置-70或以下保存 冻存的临床采集标本应在冻存的条件下，低温送至实验室五、临床标本的运送要求六、临床标本的处理原则 新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应 尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的 可置于4保存，如未能接种应置-70或以 下保存 冻存的标本送
5、到实验室后，24小时内能进行 病毒分离的，可以放置4保存。如未能分 离的标本应置-70或以下保存七、临床标本的处理方法 含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯 纤维的拭子在管壁反复挤压后取出 鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。置 4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。上清 液可直接接种或低温保存 鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在 无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎 粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟， 取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存 肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用 高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20% 悬液，2000rpm离心10min，取上
6、清加入抗生 素。接种细胞或鸡胚八、临床标本的的处理原则临床标本处理后，将原始标本分为 三份:一份（40）用于鸡胚接种，一 份（30）用于MDCK细胞接种，一 份（30）保存待复核用。对于病毒 分离阳性的标本70保存6个月 流感病毒株的运输寄送流感毒株标本的包装要求v病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑 料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口 细胞保存管保存和运输流感病毒标本 v直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也 将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单 ”内，送检单应单独放在防水的袋子里 v将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包） ，放入冰排
7、，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲 能力的材料 v标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法九、禽流感标本采集的生物安全防护1采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防 护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。 2. 人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国病原微生物实 验室生物安全管理条例（国务院424号令）的有关要求。 3人禽流感临床标本的处理、分装在生物安全二级的实验室里进 行，采用生物安全三级防护。 4人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在 生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。 5临床标本病毒核酸提取在生物安全二级（BSL-2级）实验室的 二级生物安全柜里进行，采用生物安全三级防护。 6用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒 核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。
