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1、分类号：R 7 2 5UDC ：6 16 15 3 9 6 冒密级：一般 编号：0 2 0 37 9广州医学院 硕士学位论文多器官功能不全综合征患儿血浆 氨基酸的变化研究生：姚梦霖导师：陈耀勇教授刘丽教授申请学位级别：医学硕士年级：二零零二级学科专业：儿科学研究方向：小儿内鹏i 彭“ 翻蝙论文提交日期：2 0 0 5 年5 月论文答辩日期：2005 - f f - - 6 月学位类型：医学科学学位学位授予单位：广州医学院答辩委员会主席评议人2 0 05 年5 月28 目多器官功能不午综合征患儿血浆氯摧酸的变化广医埘 学位皓文常用英文缩写一览表M u l t i p l eO r g a nD
2、y s f i m c t i o nS y n d r o mA m i n oA c i dG l u t a m i n eA r g i n i n eC i t r u l l i n e0 r i n t h i n eA s p a r t i cA c i dG l u t a c i dA s p a r a g i n eS e r i n eG l y c i n eH i s t i d i n eT h r c o n i F i eA l a n i n eT a u r i n eT y r o s i n eV a l i n eM e t h i o n i
3、F i eT r y p t o p h a nP h e n y l a l a n i n eI s o l e u e i n eL e u c i n eL y s i n eP r o l i n eE t h y l e n e d i a r n i n e t e t r a a c e t i cA c i dH i g h P e r f o m a n c e L i q u i dC h r o m a t o g r a p h y0 一p h a t h a l a l d e h y d e多器官功能不全综合症氨基酸谷氨酰胺精氢酸胍氨酸鸟氨酸天冬氨酸谷氨酸天冬酰胺
4、丝氨酸时氨酸组氨酸苏氨酸丙氨酸牛磺酸酪氧酸缬氢酸蛋氨酸色氨酸苯丙氨酸异亮氨酸亮氢酸赖氨酸脯氨酸乙二胺四乙酸高效液相色谱法邻苯二甲醛一M叽她吼嘶却帆m断呻差；莹胁虽研坤吐m伽唧帆叭多器官功能小全综合征患儿血浆氨基酸的变化多器官功能不全综合征患儿血浆氨基酸的变化硕士研究生：姚梦霖导师：陈耀勇教授刘丽教授中文摘要目的探讨多器官功能不全综合征( M O D S ) 患儿血浆谷氨酰胺、精氨酸及其相关代谢产物胍氨酸、鸟氨酸的变化，为疾病的进展、治疗和预后提供参考。同时，建立儿童血浆氨基酸诈常参考值，为遗传代谢性疾病的诊断和治疗提供参考。方法利用反相高效液湘色谱法( R T - H P L C ) 检测4
5、0 例多器官功能不全综合征患儿入院后第1 天及第8 天血浆氨基酸值，并与2 4 6 例正常儿童进行对照。结果1 正常儿童血浆氨基酸值分别如下：天冬氨酸9 7 4 - 9 1 9 m o l L ，谷氨酸1 0 0 6 a ：5 3 4 9 m o l L ，天冬酰胺3 9 8 + 2 4 0 1 t m o l L ，丝氨酸1 3 6 1 士3 1 9 9 m o l L ，谷氨酰胺5 0 9 3 + 9 7 6 p m o l L ，甘氨酸2 1 4 7 士5 7 9 l a m o l L ，组氨酸6 8 2 + 1 2 5 9 m o l L ，苏氨酸11 6 4 4 - 5 2 0 “
6、m o l L ，胍氨酸2 3 8 士7 7 1 a m o l L ，丙氨酸3 2 8 6 士9 8 6 a m o l L ，牛磺酸1 1 4 5 a ：6 1 ，3 9 m o l L ，精氨酸5 0 0 a ：1 8 3 9 m o l L ，酪氨酸8 1 5 4 - 2 7 4 1 a m o l L ，缬氨酸2 1 8 0 - a ：5 4 3 9 m o l L ，蛋氨酸3 2 4 - 4 - 1 0 3 p 。m o l L ，色氨酸5 3 1 + 1 3 9 1 t m o l L ，苯丙氨酸6 1 3 士1 3 6 9 m o l L ，异亮氨酸6 7 4 + 2 1 1
7、9 m o l L ，鸟氨酸4 3 0 士1 9 8 1 t m o l L ，亮氨酸1 2 2 5 士3 5 4 p , m o l L ，赖氨酸1 3 6 0 + 5 6 6 9 m o l L ，脯氨酸2 2 0 9 ：b 8 1 4 9 m o l L 。2 M O D S 患儿入院后第1 天谷氨酰胺值为3 6 4 2 圭1 9 3 3 9 m o l L ，精氨酸值为3 2 0 士2 2 ，7 t m o l L ，胍氨酸值为1 3 1 ：i ：1 1 9 9 m o l L ，鸟氨酸值为2 4 2 a ：1 6 6 1 a m o l L ，均较正2多器官功能1 i 拿综合缸患儿血
8、浆氨基酸的变化广医硕士学位论文常儿章显著下降( P 0 0 5 ) ；胍氨酸较入院第l 天亦有明显增高( P 0 0 5 ) T h ec i t r u l l i n el e v e lw a sh i g h e rt h a nt h a to fa td a y1a f t e rh o s p i t a l i z a t i o n ( P 2 0持续8 h 以k 需【恤管活性药物：多巴胺+m l ( k g 8 h ) 。持续8 h 以上给予札管活多巴酚丁胺 1 0 吲( k g 。r a i n ) 或肾 ：腺8 h ) ，或严重器官功髓m i n k ，灌注适宜，但器官
9、功能小全 3 。不全 3 个。自主呼吸+ 辅助通气S a 0 2 9 0 或p H 7 2 5X 线胸片表现为A R D S ，A a D O ： 3 72 5 1 d机械通气F i O 旁O7 或F i 0 2 0 4 ，1 2 h和( 或) S a 0 2 07 ) ，来应用“卜。N O 、F H O 、E C M O 。少尿 正常1 5 2m 小板间) 、P T T ( 部分凝血倍，纤维蛋白原 币常豹15倍。8表2 本组M O D S 患儿原发病及脏器受累情况病例序号原发病，壁矍鐾墨堕堡肺肝脏肾胃肠道血液神经心血管内分泌 一一1新生儿肺炎2缺氧缺血性脑病。3颅内出血o。4先天性巨结肠。5
10、 硬膜外血肿44o6新生儿肺炎o。7新生儿肺炎。”8粘连性肠梗阻。9急性肠套叠1 0 化脓性脑膜炎。1 1 急性肠套叠。1 2 脓毒血症。1 3 急性脑膜炎4。 v _ 1 4 右r 肢烫伤。11 5 结肠闭锁术后 1 6 肠扭转不良并坏步E 1 7 支气管肺炎 1 8 急性腹泻病 1 9 颅内山血 2 0 肺透明膜病 2 1 结肠造瘘术后 2 2 支气管肺炎 2 3 脑脊膜炎 2 4 间质性肾炎 2 5 系统性红斑狼疮 2 6 溺水复苏后 2 7 重症肺炎 2 8 间质性肾炎 2 9 脑脊髓炎 3 0 支气管肺炎 3 1 矗顶叶脑挫伤 3 2 脑干脑炎 3 3 窜息复苏后 3 4 病毒性脑脊
11、髓炎 3 5 支气管肺炎 3 6 骥型支炎 3 7 法乐氏四联症术J i 彳 3 8 塑型支炎 3 9 感染性休克 4 0 支气管肺炎。一 注：死亡病例。9多器官功能小全综含征忠儿血浆氨基酸的变化广医硕十学位论文【方法l一标本采集分别抽取上述入选者E D T A 抗凝血各2 m l ，立即离心，分离血浆，置E p p e n d o r f 管内，并放入一8 0 冰箱待测。二主要试剂1 氨基酸标准溶液( 购自S I G M A 公司)氨基酸对照品准确称量后用O 1 m o F LH C L 溶液溶解并稀释配成含每种氨基酸2 0 、5 0 、1 0 0 、1 5 0 、2 0 0 、2 5 0
12、和3 0 0n m o l m l 的系列混合标准溶液。2 衍生试剂邻苯二甲醛( O P A ，购自S I G M A 公司)3 9 一芴甲氧羰基氯胺苯醇( 9 F l u o r e n y l m e t h lc h l o r o f o r m a t e ，F M O C ) ( 购自S I G M A 公司)4 3 一巯基丙酸( 购自S I G M A 公司)5 N a 2 H P 0 4 1 0 H 2 0 、N a H 2 P 0 4 2 H 2 06 无水乙醇7 四氢呋喃8 乙腈9 甲醇三主要仪器1 8 0 冰箱：R o t o f i x3 2 型。2 高效液相色谱仪：美
13、国惠普公司，H P l 0 5 0 型，由H P l 0 5 0 四元梯度泵、H P l 0 5 0 自动进样器、H P 柱温箱、H P l 0 4 6 A 荧光检测器组成。3 色谱工作站：美国惠普公司，H P C h e m s t a t i o n f o r L CR e v A 0 4 0 1 型。4 高速冷冻离心机：日本R 立公司，G L 2 0 A 型。5 c 1 3 超滤设备。四色谱条件1 色谱柱：H y p e r s i lO D S ，1 2 5 x 4 0 r n m ，粒径5 u m 。2 流动相A ：取1 0 0 0 m l 硫酸缓冲液+ 5 m l 四氢呋喃。3
14、。流动相B ：取5 0 0 m l 硫酸缓冲液+ 适量甲醇和乙腈。4 检测波长：0 m i n 时，激发3 4 0 n m ，发射4 5 0 n m ，检测一级氨基酸的O P A 衍生物；2 0 !m i n 后，将波长切换致至激化波长2 6 0n l n ，发射波长3 0 5n l l l 检测二级氨基酸( 脯氨酸：1 0多器官功能小全综合征患儿血浆氨基酸的变化广医硕J 学位论义的F M O C 衍生物。5 柱温：4 0 。6 线性梯度：在0 2 5 m i n 内，流动相B 以线性从O 上升到1 0 0 。7 流量：l m l m i n 。五血浆氨基酸检测采用邻苯二甲醛柱前衍生反相H P
15、 L C 法，样本经去蛋白处理后，用邻苯二甲醛( O P A )进行衍生作用，利用c 1 8 色谱柱进行反相高效液湘色谱柱前衍生法分离各种氨基酸，采用荧光检测器分析检测。本方法中用保留时间定性，用外标法定量。各氨基酸检测重复性变异系数 9 5 。【统计方法】采用S P S S l l 0 软件对各项监测指标进行正态分布检验。1 利用单因素方差分析分别比较M O D S 患儿急性期、恢复期血浆谷氨酰胺、精氨酸、胍氨酸、鸟氨酸与正常儿童相应氨基酸有无统计学差异。2 利用配对t 检验比较M O D S 忠儿( 剔除死亡病例) 急性期、恢复期血浆氨基酸有无统计学差异。多器官功能小全综台征患儿血浆氨基酸的变化广医硕上学位论文结果1 正常儿童血浆氨基酸值分别如下：天冬氨酸9 7 圭9 1 p , m o l L ，谷氨酸1 0 0 6 士5 3 4 u m o l f L ，天冬酰胺3 9 8 - 4 - 2 4 0 9 m o l L ，丝氨酸1 3 6 1 + 3 1 ，9 9 m o l L ，谷氨酰胺5 0 9 3 土9 7 6 I _ t m o I L ，甘氨酸2 1 4 7 士5 7
