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1、硕士学位论 文:中文摘要中文摘要A L A D 基因多态性与铅毒性关系的研究专业劳动卫生和环境卫生学研究生孙品指导教师杨跃林 教授研究目的: 长期接触铅可导致机体多种器官组织出现明显的不良效应。 铅中毒仍是当前严重的公共卫生学难题。 在相同铅接触条件下， 部分个体对 铅毒性更敏感，表明个体间存在铅毒性易感性。s - 氨基乙酸丙酸脱水酶 0 .0 5 ) :血压、脉搏、 体重指数 ( B MI ) 及肝功在不同A L A D 基因型工人间无显著性差异; A L A D I - I基因型工人血铅和血小板水平高于A L A DI - 2 基因型组 ( P 0 .0 5 ) ; B U N 、 尿肌醉
2、, N A G ,估计肌配清除率在不同 A L A I ) 基因型组间未见显著性差异 ( P 0 .0 5 ) ， 但 A L A D 1 - I 基因型工人血肌醉水平高于A L A D I - 2 基因型，多元线性回归分 析表明血肌醉与血铅呈负相关，与B MI 成正相关 ( P 0 .0 5 ) . T h e re w e r e n o s i g n i fi c a n t d i ff e re n c e s in b l o o d p re s s u r e , p u l s e , b o d y m a s s i n d e x ( B MI ) a n d l i
3、 v e r fu n c t i o n b e t w e e n A L A D I 一 1 g e n o t y p e a n d A L A D I - 2 g e n o t y p e . T h e b l o o d l e a d l e v e l s a n d P L T i n A L A D I - 1 g e n o 勺 T e w e r e s i g n i fi c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t in A L A D I - 2 g e n o t y p e ( P 2 1 .3 k P a ( 1 6
4、 0 m m H g ) 或舒张 压 _ 1 2 .6 k P a ( 9 5 m m H g ) 6 e分组方法:根据A L A D 基因多态性分析结果将铅接触工人进行分组， 因此次研究未能检测到A L A D 2 - 2 基因型，故仅分为A L A D 1 - 1 基因型组与A L A D 1 - 2 基因型组两组人群进行研究。2 . 1 .2 研究内容与方法2 . 1 .2 . 1 问卷调查问卷调查由统一培训的调查员对体检的铅接触工人进行详细询问， 问卷调查项目由调查员填写。调查内容包括: 铅接触工人的一般情况调查， 项目 包括: 性别、民 族、 年龄、 工龄、 接铅工龄、 工种、 教育
5、程度、 吸烟史、 饮酒史、 疾病史、家庭史等: 自 觉症状调查， 项目 主要包括神经系统表现和消化系统表现。2 . 1 . 2 . 2临床体检http:/ L A D纂因型健康现状调查采用临床体检调查表对铅接触工人健康状况进行调查。 体检由四川大 学华西第四医院的专职医师进行。 体检项目主要包括一般内科检查和铅毒性专科检查。机体脂肪水平采用计算体重指数 ( B MI )进行评价，计算公式如下:体 重指数( k g / c m ) 二2 . 1 .2 .3实验室检测( 1 )血样的采集用1 % H N 伪的酒精棉球在铅接触工人左臂采血部位由内向外清洗2 - 3次，常规消毒后使用一次性注射器采血。
6、每位研究对象抽取肘静脉血 l O m l o ，其中用于血铅测定和基因多态性分析的血样5 m l 分装于E D T A 抗凝管内混匀，4 以下尽快运至实验室，并于2 4 小时内完成血铅测定后，保存于一 2 0 用于基因多态性分析。其余血样分装于非抗凝管用于常规临床 检验，所有检测项目 于采血后2 4 小时内 完成。( 2 )临床检验包括血常规( 红细胞R B C ， 血红蛋白 H G B 、 白细胞WB C 、 血小板P L T ) ,尿常规( 尿蛋白、 红细胞、 白细胞、 上皮细胞) 和肝脏功能( 总胆红素T B I L ,谷丙转氨酶A L T 、 谷草转氨酶A S T 、 总蛋白 T P
7、、 白蛋白 A L B ， 球蛋白 G L O , 白 球 比A / G )检验，由四川大学华西第四医院的专职检验人员执行。( 3 )血铅测定1 )主要试剂和仪器铅标准试剂四川大学华西第四医院毒检室提供极谱仪J P 3 0 3 ，成都分析仪器厂2 )血铅浓度测定 ( 极谱法)取E D T A 抗凝血l m l 于1 0 0 m l 三角瓶中，采用热硝化法对血样进行处http:/ 5 年组。进一步分析，发现工龄在5 年以下组工人中9 4 . 8 %为蓄电池工，而该工类工人全部来自 私营企业，这提示现阶段我国 蓄电池厂中铅污染情况较严重， 企业对铅接触工人的防护存在不足。 工龄在5 年以下多为蓄电
8、池工其原因可能是该类工人流动性大，且一旦出现健康损害时可能被迫脱离企业或不再从事铅作业工作所致。此次现况调查结果表明，铅对不同A L A D 基因型工人健康状况的影响， 在临床症状方面不存在显著性差别， 一般性常规检查指标对铅的造血系统，肝功和心血管系统早期损害作用反映不够灵敏。尽管在不同A L A D基因型组铅接触工人间观察到血铅水平存在显著性差异， 但要明确A L A D 基因多态性与铅毒性易感性关系仍需在控制混杂因素条件下， 进行更深入地研究。硕 : 学位论文:A L AD墓因多态性对铅毒性的影响3 A L A D基因多态性对铅毒性的影响3 . 1 实验材料及方法3 . 1 . 1 研究
9、对象研究对象同2 . 1 . 1 03 . 1 .2 实验方法3 . 1 .2 . 1 样本采集血样:抽取方法，分装处理方法同于2 . 1 .2 .3 第1 条。尿样: 采集合格铅作业工人晨尿1 4 8 份， 每份尿样用塑料瓶收集2 0 0 m l 尽快送至实验室，4 冰箱保存，待检测。除基因多态性检测指标外，其余检测指标均于2 4 小时内进行测定。3 . 1 .2 .2 检测指标( 1 )检测的生物标志物:包括血铅 ( B P b ) 、血清钙 ( C a ) 、 血清铁 ( F e ) .血清锌 ( Z n ) 、血肌配 ( B - C r ) 、尿素氮 ( B U N) 、锌原叶琳 (
10、Z P P ) .尿铅 ( U B b ) 、 尿8 一 氨基乙 酞丙 酸 ( A L A ) 、 尿 N 一 乙 基一 p - D - 葡萄 糖胺酶 ( N A G ) 、尿肌配 ( U - C r ) .( 2 )体检指标:包括身高，体重， 血压和脉搏。( 3 ) 估测指标: 体重指数 ( B M I ) 和估计肌Af清除值 ( C r e a t i n i n e c l e a r a n c ee s t i ma t i o n ) .B MI 计算方法同2 . 1 .2 .2 ,估计肌配清除率的计算公式如下D 7 1 .硕士学位论文:A L A D基因多态性对铅毒性的嫉响估计肌
11、Iff 清除率( M I / m i n )A x ( 1 4 0 一 年龄) x 体重( k g )系数:当为女性时 A = 0 .8 5年龄: 使用范围为1 8 - 1 1 0 岁;体重:范围为3 5 - 1 2 0 k g ;血肌醉:范围为。 . 6 -y 7 m g / d l a7 2 x 血肌ff ( m g / d l )为男 性时A =1 :3 . 1 .2 . 3 血铅、尿铅含量的检测 ( 极谱法)血样、 尿样处理方法， 血铅、 尿铅浓度测定方法、 试剂及仪器同2 . 1 .2 .3第3 条。3 . 1 .2 .4 尿5 - A L A 含量的 检测 ( 比 色法) 1 8
12、1( 1 )主要试剂及仪器S - A L A 标准四川大学华西第四医院毒检科提供分光光度计( 2 ) 检测方法采用劳动卫生与职业病学 ( 第四版)尿中S - A L A测定方法( WS / 1 2 3 - 1 9 9 6 )检测。3 . 1 .2 .5 血中 锌原 外 琳 ( Z P P ) 的 检 测 18 1( 1 )主要试剂及仪器Z P P 标准四川大学华西第四医院毒检科提供血液锌原叶琳测定仪Z P P -3 8 0 0 ，广东省康达发展公司( 2 )血中 Z P P 检测方法采用劳动卫生与职业病学 ( 第四版 )血中 Z P P测定方法 ( WS / 1 9 2 - 1 9 9 6 )
13、检测。顿 上 学位论文:A L A D基因多态性对铅毒性的毕响3 . 1 .2 .6 血清钙、铁、锌、B U N、肌配、N A G 含量的检测 ( ( 比色法)( 1 )主要试剂血清钙检测试剂盒 ( 包含钙标准品)四川省迈克科技有限责任公司血清铁钡 9 定试剂盒 ( 包含铁标准品)伊利康生物技术有限公司， 温州血清锌检测试剂盒 ( 包含锌标准品)伊利康生物技术有限公司， 温州尿素试剂盒 ( 包含尿素标准品)伊利康生物技术有限公司， 温州肌醉试剂盒 ( 包含肌醉标准品)伊利康生物技术有限公司，温州N A G 试剂盒 ( 包含N A G 标准品)3 V 生物工程有限公司， 潍坊( 2 )主要仪器全
14、自 动生化分析仪O L Y M P U S A U 4 0 0 ，日 本( 3 )检测方法根据血清钙、血清铁、 血清锌、尿素氮、肌醉和尿N A G 检测试剂盒 要求， 分别对样品进行预处理后， 采用比色法由全自动生化分析仪自 动完成测定。各生化指标粉测i t K n . P,1 3 .表 1 3 比 色 法 检 测 生 化 指 标 所 需 波 长 ( n m ) k 奢蔫一 R K (nn)570558340510血清钙 血清铁、血清锌、尿N A G 尿素氮 肌配3 . 1 . 2 . 7 基因组D N A 分离及多态性检测试剂、仪器及具体方法同 2 . 1 .2 .3 第4 条。硕 I :
15、学位论文:A L A D基因多态性对铅毒性的影响31 . 3 统计分析采用E X C E L 软件录入建立数据库，数据采用统计学软件S P S S 1 1 .0 进行统计分析，计量资料的组间差异比较采用t 检验，分类变量资料组间比 较 采用 犷 检 验， 因素 相关 性 采 用 相 关 法分 析， 多 因 素 分 析 采 用多 元 线 形回 归分析。 在多元线性回归模型中， 性别以0 代表女性，1 代表男性:工种类 型以 0 代表电缆工种， 1 代表蓄电池工种; 基因型以 0 代表A L A D I - I 基因型， 1 代表A L A D 1 - 2 基因型;吸烟以 0 代表否，1 代表是;
16、饮酒以0 代表否，1 代表是。硕士学位论文A L A D基因多 态性对铅毒性的影响3 . 2 结果3 .2 . 1 A L A D基因多态性对机体铅水平的影响表1 4 为不同A L A D 基因型工人血铅水平和尿铅水平。结果显示A L A D 1 - I 基因型工人血铅和尿铅水平均高于A L A D 1 - 2 基因型人群。经t 检 验，结果表明血铅水平在两基因型间存在统计学差异 ( P 0 .0 5 ) .蓄电池工种A L A D 1 - I 基因型血铅水平明显高于A L A D I - 2 基因型，经t 检验，发现其差异处于临界显著性( P=0 . 0 5 2 ) 0以 工种类型分组比 较， 结果显示蓄电 池工的血铅为1 . 8 9 ( 1 .0 5 - 2 . 8 1 ) p m o l / L ， 尿铅为 0 .6 2 ( 0 .0 5 -1 .4 1 ) lx m o
