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1、Y5 U 2 9 8 8分类号R 姻单位代日:1 0 1 5 9 号:2 【】0 2 1 5 。3 6寸回鳝升失拳,博士学位论文题目多巴胺D 2 、D 3 和D 4 受体基因多恋性与精神分袋症关联性及法医学和 类遗传学意义n ea g 宴。出d o ndD A 2 ,D A 3 ,D A 4m 。e P f o rg e “op o 哼m o 叩h o l o 盯”l 【hs c h 【加p h r c n l a “n m c 出c dj u d 8 p m d e n c e a n dh u g e n e t i 【u d i e 8研究生:兰圭叠一导师:王琏兰学科专业:壁旦生一论文课
2、题起止时间:塑塑生二兰盟圭王旦一 论文完成时间:垫堕土生L嗍匦搿1中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。论文作者签名:中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知
3、识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ,以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名:指导教师签名:多巴胺D 2 、D 3 和D 4 受体基因多态性与 精神分裂症关联性及法医学和人类遗传学研究前言精神分裂症( 8 c h i z o p h r e n i a ) 是一种常见的病因未明的精神疾病,在精神病中是最具代表性和最常见的一组症状群。在精神
4、病院住院病人中占8 0 9 0 以上,在司法精神病学鉴定的案例中占首位。本病病因不明。遗传有一定的关系,环境因素可以成为发病诱因。中枢神经系统生亿代谢的研究发现,本病患者脑内多巴胺在神经突触部位有功能亢进现象,一般认为多巴胺功能亢进可能导致精神分裂症。因此,精神分裂症与多巴胺受体的遗传多态性具有一定关系。多巴胺受体被分为D R D l 、D R D 2 、D R D 3 、D R D 4 和D R D 5 五种类型,目前研究较多的是D R D 2 、D R D 3 和D R D 4 。目的目前国内外的研究,多局限于单一基因座多态性与精神分裂症相关性的比较,而忽视了不同基因座之间的关联性作用。本
5、研究对D R 工 2 、D R D 3和D R D 4 受体基因座具有多态性的变异点进行分析,通过比较正常群体与精神分裂症患者组,分别得到单一基因座多态性与精神分裂症相关性的数据,最后综合分析三个基因座多态性组合型与精神分裂症的关系,同时探讨了D R D 2 、D R D 3 和D R D 4 基因多态性在法医学和人类遗传学上的应用意义。材料与方法1 样品1 1 群体数据:1 2 7 例中国汉族血液样品来自中国医科大学法医学院法医血清学教研室。1 1 2 正常对照组:1 0 5 例汉族血液样品来自沈阳市血液中心的献血者,本人无精神疾病,家族中无精神疾病及自杀患者。其中男性5 3 名,女性5 2
6、名,年龄2 l 一5 8 岁,平均2 5 岁。1 3 病例组:l O l 例汉族血液样品来自沈阳市精神卫生中心。明确诊断精神分裂症患者。精神分裂症的诊断需同时符合美国精神障碍诊断与统计手册第4 版( D S M 一) 和中国精神疾病分类与诊断标准第3 版( c c M D 一3 ) ,其中男性5 1 名,女性5 0 名,年龄2 2 5 5 岁,平均年龄2 6 岁,两组年龄经t 检验,无显著性差异( P 0 0 5 ) 。2 实验方法2 1 模板D N A 制备采用酚氯仿法抽提D N A 。2 2P C R 扩增目的D N A 片段:对D m ) 2 基因一1 4 l C 和D R D 3 基因
7、S e r 9 G b 的S N P 位点用限制性内切酶分别进行消化,D R D 2 产物片段大小为3 0 4 b p ,引物序列:F5 一A C T G G C G A G C A G A C G 鳓狐C C 一37 ;R5 一 T G c G c G C G T G A G G C T G C C G G 订C G G 3 。D R D 3 扩增产物片段大小为4 6 2 b p ,弓I 物序列:F5 一G C T C T A T C T C C A A C 7 r C T C A C A 一3 ;R5 一A A G T C -T A C T C A C C T c c A G G l l
8、A 一3 。以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离结合银染显带的方法进行分析。2 3D R D 4 基因4 8 b p 位点采用扩增片段长度分析法,扩增引物序列为F5 一G C G A C T A C e 珂G G T C T A C T C G 一3 :R5 一A G G A C C C r C A T G G C C r r G一3 ,P C R 扩增后以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离结合银染显带的方法进行分析。2 4 统计学处理方法记录全部个体的分型结果,计算各等位基因与基因型频率,进行 I a r d yw e i n b e r g 平衡检验。数据分析采用统计程序软件包( s P S s l 0 0 )
9、进行方差分析,等位基因频率用直接计算法。P 值小于0 0 5 差异具有显著性。按F i 8 h e r 法计算个 识别率( P 0 w e ro fD i s c r i l i l I 蚯o n ,D P ) ,按e r 法计算非父排除率( P o w e ro fE x 妇i o n ,P E ) ,等位基因频率用直接计算法。结果lD I u ) 2 基因一1 4 1c 多态性与精神分裂症相关性通过患者组与对照组D 砌) 2 基因一1 4 1C 多态性分析。两组基因型比2 较( r = 1 9 4 9 ,P = O 3 7 7 ) ,无显著性差异;两组等位基因比较( x 2 = 1 6 7
10、 ,P= 0 3 4 ) ,亦无显著性差异。2D R D 3 基因S e r 9 G l y 多态性与精神分裂症相关性通过患者组与对照组D R D 3 基因S e r 9 G l y 多态性分析。两组基因型分布频率比较有显著性差异( x 2 = 1 5 9 6 ,P O 0 5 ) 。4I n l I l s + S e r S e r + 4 4 、I I l s D e l + S e r G l y 为易感基因组型;I n s I I I s +S ,G l y 、I n s I n s + G l y G l y + 4 4 为非易感基因组型。 5 本研究获得了D R D 2 基因一1
11、 4 l C 、D R D 3 基因S e r 9 G l y 和D R D 4 基因4 8 b p 的基因型、基因频率,个人识别率、非父排除率在中国汉族群体中法医学的应用数据。6 本研究利用所获得D R D 2 基因一1 4 1 C 、D R D 3 基因s e r 9 G l y 和D R D 4基因4 8 b p 遗传多态性数据与国外黑人、自人等群体进行了比较,制成了遗传系统树,获得了中国汉族与其它民族比较的人类遗传学数据。结论1 本研究发现D R D 2 基因一1 4 1 C 、D m ) 3 基因鲫G l y 多态性位点在中国汉族群体中具有较高的个人识别率和非父排除率;D R D 4
12、 基因4 8 b p 位点具有一定的个人识别率和非父排除率。2D R D 2 基因一1 4 1 C 位点多态性与精神分裂症无显著相关性。D R D 3 S e l 9 G 1 y 位点多态性与精神分裂症有显著相关性。D R D 4 基因4 8 b p位点多态性与精神分裂症无显著相关性。3I n I n s + S e r S e r + 4 4 、I n D e l + S e r G l y 为精神分裂症易感基因组型;h l s h s + S e r G l y 、I I I n s + G l y G l y + 4 4 为精神分裂症非易感基因组型。4 通过绘制的遗传系统树分析表明,比较
13、V N T R 类遗传标记,s N P 类对研究人类的进化是稳定、可靠及重要的遗传标记。- 3 本研究的创新性的自我评价l 首先报道了D R D 2 基因一1 4 1 C 、D R D 3 基因S e l 9 G l y 多态性位点在中国汉族群体中具有较高的个人识别率和非父排除率。2 首次提出I n s l n 8 + S e r S e r + 4 4 、I n 8 D e l + S e r G l y 为精神分裂症易感基因组型;I l I s I 鹏+ S e r G - l y 、I n s I 璐+ G r l y G l y + 4 4 为精神分裂症非易感基因组型。避免了单一基因座
14、研究容易造成结论前、后矛盾的结果。3 明确指出比较V M m 类遗传标记,S N P 类对研究人类的进化是稳定、可靠及重要的遗传标记。关键词D N A ( 脱氧核糖核苷酸) ;P C R ( 聚合酶链式反应) ;D R D 2 ( 多巴胺受体2 ) ;D R D 3 ( 多巴胺受体3 ) ;D R D 4 ( 多巴胺受体4 ) ;基因多态性;精神分裂症4 1 1 1 ea 辎o c i a t i o no fn A 2 、D A 3 、n 斛r e c e p t o rg e n ep o l y m o r p h o l o 留试t l ls c h j z o p l l r e n
15、 i aa l s oi nm e d i lj u r i s p n l d e n c ea n dh 岫粕g e n e t i c ss t I I d i e sI n 仃o d u c t i o nS c h i z o p h r e n i ai saf 抽i l i a rp s y c h o t i cd i s e a s ew i t l lu n c l e a re t i o l o g y di st l l er n o s tr e p r e 8 e 眦a t i v e 甜l dt h em o s tc o m m o ns y n d r o
16、m ei np s y c h o t i cd i s e e T h e r ei s8 0 一9 0 S c 王l i z o p h r e n i ap a t i e n ti I lp s y c h o t i ch o s p i t a l 觚d 嘲0 n gc a s e sw i t hp s y c h o t i cj u r i s p r u d e n c ei d e n t i f i c a t i o ni to c c u p i e dt l l ef i r s tp o s i t i o n n ee t i 0 1 0 盱山i sd i s e a L s ei sn o tV e r yc l e a r ,a n dh a ss o m er e l a t i o n 稍出i n h e r i t a n c