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1、实验九 玻璃器皿的清洗包扎，培养基的配制及灭菌一、目的要求 l 1、明确培养基的配制原理。 l 2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制 培养基的一般方法和步骤。 l 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 l 4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 l 5、了解紫外线灭菌的原理和方法。 l 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作。二、基本原理l 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基 。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏 为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主 要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体 培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
2、琼脂 在常用浓度下96时溶化，一般实际应用时在 沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼 脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物 分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂 的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此， 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性 ，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨 培养基的配方如下：牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂1520g 水 1000ml pH 7476干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。l紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长 为200300nm的紫外线都有杀菌能力， 其中以260nm的
3、杀菌力最强。为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外 线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内 ）喷洒35的石炭酸溶液，一方面使 空气中附着有微生物的尘埃降落，另一 方面也可以杀死一部分细菌。超净工作台内紫外灯（线）灭菌三、器材 l牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5590）， 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 l培养皿，试管，吸管，电烘箱等。 l牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套一包） ，手提式高压蒸汽菌锅等。 l紫外线灯，35石炭酸或23来苏尔 溶液
4、，牛肉膏蛋白胨平板 。四、操作步骤l一、称量 l准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错 药瓶盖 l二、溶化 l水的加法、加热搅拌 l三、调pH l忌调过头后来回调培养基的制备l四、过滤 l五、分装 l1、液体分装：试管高度的1/4左右 l 三角瓶容积的1/2 l2、固体分装：试管高度的1/5左右（制斜面 ） l 半固体：1/3左右（垂直穿 刺） l马丁氏培养基定容；瓶口棉塞培养基的制备l 六、加塞 l 七、包扎 l 八、灭菌 l 一般15磅（121）20分钟 l 九、摆斜面 l 温度、斜面长度（试管的1/2） l 十、无菌检查 l 37培养2448小时常用培养基l 一、牛肉膏蛋白胨培养基 l 应
5、用最广泛的细菌基础培养基。 l 配方： l 牛肉膏 3.0g l 蛋白胨 10.0g l NaCl 5.0g l 水 1000ml l pH 7.4-7.6 常用培养基l二、高氏号培养基 l用于培养、观察放线菌形态特征； l加入适量的抗菌物质（抗生素、酚）用于 分离放线菌（选择性培养基）。常用培养基l 高氏号培养基配方： l 可溶性淀粉 20g 按配方顺序依次溶解否则 l NaCl 0.5g 产生沉淀 l KNO3 1.0g l K2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素现用现加,温度不宜 l MgSO4.7H2O 0.5g 过高否则易分解 l FeSO4.7H2O 0.01g l 琼脂 15-
6、25g l 水 1000ml l pH 7.4-7.6 常用培养基l 三、马丁氏培养基 l 用于分离真菌的选择性培养基 l 配方： l KH2PO4 1.0g 另加孟加拉红和链霉素 l MgSO4.7H2O 0.5g 抑制细菌、放线菌生长 l 蛋白胨 5g l 葡萄糖 10g l 琼脂 10-20g l 水 1000ml l pH 自然试管分装摆斜面摆斜面实物图五、实验报告l结果检查培养基灭菌是否彻底。试管清洁如何 ，培养基制备的合不合理。玻璃器皿的清洗器皿包扎器皿包扎六、思考题（1）培养微生物的培养基应具备哪些条件？为 什么？（2）在配制培养基的操作过程中应注意些什么问 题？为什么？图5通气塞 A配制时纱布塞法；B灭菌时包牛皮纸；C 培养时纱布翻出（3）培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何 检查灭菌后的培养基是无菌的？l（4）干热灭菌完毕后，在什么情况下才能 开箱取物？为什么？ l（5）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将 锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待 压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？ l紫外线杀菌的原理是什么？ 全自动高压蒸汽灭菌锅
