《白细胞介素2活化骨髓的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《白细胞介素2活化骨髓的实验研究（28页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、和D a u d i 产生凋亡。因此自体骨髓移植尤其是活化后的自体骨髓移植可以作为治疗肿瘤的一积极手段，而不应该只是作为放、化疗后的补救方式。关键词：活化骨髓白细胞介素2流式细胞仪凋亡E x p e r i m e n t a ls t u d yo nt h eI L - 2a c t i v a t e db o n em a r r o wH e m a t o l o g yI n s t i t u t eT o n g j iM e d i c a lU n i v e r s i t yG r a d u a t e ：Y o uY o n gT u t o r ：Z o uP
2、i n gA b s t r a c t ：A l l o g e n e i cB o n em a r r o wt r a n s p l a n t a t i o ni si nf a c tak i n do fa d o p t i v ei m m u n o t h e r a p y , b u tt h ep o t e n t i a lr o l eo fa u t o l o g o u sb o n em a l T O Wt r a n s p l a n t a t i o n ( A B M T ) o ni m m u n em o d u a l a t
3、 i o nh a sn o tb e e nr e c o g n i z e d A B M Ta f t e ra b l a t i v eC h e m o t h e r a p y R a d i o t h e r a p yW a su s e ds u c c e s s f u l l yt ot r e a tm a n yc a n c e r ss u c ha sl e u k e m i a , l u n gc a n c e ra n dp r o s t a t ec a n c e r s ，b e c a u s eo ft h ed r u gr e
4、 s i s t a n c ea n dm i n i m a lr e s i d u a ld i s e a s et h el o n gt e r md i s e a s ef r e es u r v i v a li sn o th i g h S o m en e wb i o l o g i c a lr e s p o n s em o d i f i e r sa r en e e d e dt oa u g m e n tt h ee f f e c to fA B M T B a s e do nt h i si d e a ，w ed e s i g n e d
5、t h et h i se x p e r i m e n t ，t h er e s u l t ss h o wt h a ti n t e r l e u k i n - 2 ( I L - 2 ) C a ns t i m u l a t es h o r tt e r mi nv i t r oc u l t u r e db o n em a r r o wm o n o n u c l e a rc e l l st op r o d u c el y m p h o k i n ea c t i v a t e dc y t o t o x i ck i l l e rc e
6、l l s ( L A X ) ，w h i c hi nt u mc a np r o m o t ec y t o t o x i ce f f e c to fa c t i v a t e db o n em a r r o wc e l l s1a g a i n s tt u m o rc e l ll i n eK 5 6 2a n dD a u d i ( P 0 0 5 ) ，证实活化骨髓对肿瘤细胞均有杀伤作用。2 细胞凋亡：经过2 4 例标本( 其中男1 1 例，女1 3 例，年龄范围1 8 - 4 5 岁) 的检测，结果见表1 ，证实经I L 2 活化的骨髓M N C 上
7、清液可以明显诱导K 5 6 2 和D a u d i 细胞产生凋亡，且与对照组相比，其差异有显著性( P 0 0 1 ) 。同时发现活化骨髓上清对D a u d i 细胞的致凋亡作用明显强于对K 5 6 2 的致凋亡作用，二者相比有显著性差异( P 0 0 5 ) 。图片1 ，显示活化骨髓上清诱导K 5 6 2 细胞出现凋亡的形态学改变。与周围正常细胞相比，凋亡细胞染色质压缩，呈块状致密染色区。图片2 、3 ，显示活化骨髓上清诱导D a u d i 细胞出现凋亡的形态学改变。与正常细胞相比，染色质压缩聚集成块状，同时可以看到细胞“发泡”现象。3 骨髓活化前后细胞表面标志的改变：测试了2 9 例
8、标本( 其中男1 4 例，女1 5 例，年龄1 8 4 5 岁) ，结果见表2 ，发现经I L 一2 刺激的骨髓中表示淋巴细胞活化标志的C D 2 5 + 、C D 7 l + 及C D 2 5 + C D 7 1 + 的细胞数明显增多，且与活化前相比，差异有显著性( P O 0 1 ) 。表1I L 2 活化骨髓上清对K 5 6 2 及D a u d i 细胞凋亡的影响( X s )标本数K 5 6 2D a u d i活化骨髓上清2 48 5 6 2 1 81 1 8 8 2 7 7未活化骨髓上清2 40 7 2 4 - 0 6 10 6 8 O 6 9活化骨髓上清组与未活化骨髓上清组比较
9、，P O 0 1 ，差异有极显著意义表2I L 2 激活骨髓细胞前后的免疫标志( 阳性细胞) 变化比较( X s )标本数C D 2 5 +C D 7 I +C D 2 C D 7 l +活化骨髓细胞2 97 6 6 + 1 43 8 9 6 1 1 1 15 9 2 1 2 3未活化骨髓细胞2 91 0 1 0 2 23 4 0 7 + 1 0 9 2O 6 3 O 2 1+ 活化骨髓细胞与未活化骨髓细胞比较，P 0 0 1 ，差异有极显著意义1 06 2 5 11 2 5 12 5 15 0 i1 0 0 1E T图1骨髓活化前后对K 5 6 2 细胞的杀伤力6 2 5 11 2 5 12
10、 5 I5 0 11 0 0 1E T图2 骨髓活化前后对D a u d i 细胞的杀伤力蚰们0蚤趸皇。p分求蚰0蚤131坷。芑冀。摹讨论活化骨髓细胞在抗肿瘤方面所起的作用己为众多的学者的所证实【1 1 。大量实验证明，骨髓细胞经过细胞因子如I L - 2 、I L - 1 、I N F 和T N F 的活化后，可以显著增强其对肿瘤细胞的杀伤作用，且活化后的骨髓细胞回输体内之后，只需要应用小剂量的细胞因子如I L 2 就可以较长时间维持骨髓细胞在体外被激发出的抗肿瘤活性。从而发挥消灭肿瘤微小残留病灶的作用，有学者称之为“体内净化”。I L 2 是免疫系统的重要因子，它不仅具有免疫调节功能，还具
11、有抗癌作用【2 】。研究表明：I L 2 在体外能刺激自体单个核细胞形成L A K 细胞而杀伤肿瘤细胞，对正常造血干、祖细胞则无明显抑制作用。动物实验已证实L A K 细胞能显著净化白血病骨髓，实验者将白血病鼠的骨髓在体外与I L 2 孵育2 4 小时后再输注回白血病鼠的体内，发现比L A K 细胞具有更强的选择性杀伤肿瘤细胞的作用 3 1 。还有学者证实，在用I L 一2 活化骨髓的同时合用I L 1 、值I F N 或T N F 能进一步增强骨髓细胞对肿瘤细胞的杀伤力【4 卅。近来更有研究发现，I L 2 还具有部分逆转白血病细胞多药耐药的作用【7 1 。因此用I L 2 作为骨髓活化的主
12、要刺激因子具有一定的实验基础和临床应用价值，尤其是是否能通过骨髓活化后的移植，达到克服自体骨髓移植应用于治疗白血病所存在的复发率高的问题。鉴于以上学者的研究成果，证实I L 2 的确对骨髓细胞具有活化作用。本实验的目的就在于以I L 2 在体外对骨髓细胞进行活化处理后，证实活化后的骨髓确实增加了对肿瘤细胞的杀伤力。我们用1 0 0 0 m l 的I L 2 对细胞数为2 5 1 0 6 m l 的骨髓单个核细胞进行了4 8 小时的活化处理，并检测了在不同的E T 比下活化前后骨髓M N C 对K 5 6 2 和D a u d i 细胞的杀伤力( 见图1 ，2 ) ，证明活化后的骨髓M N C
13、的杀伤力明显高于活化前，并有显著性差异，与众多学者的研究相一致 3 , 5 , 6 1 。由于实验结果发现活化后的骨髓细胞对两肿瘤细胞系的杀伤力之间无显著差异，说明活化骨髓对肿瘤细胞的杀伤是非特异性的。本实验还通过用F A C S 检测细胞表面标记进一步证实骨髓M N C 的活化及活化前后表面标记的变化。C D 2 5 ( 白细胞介素2受体) 主要见于活化T 及B 细胞，活化巨噬细胞，静止T 及B细胞表面无此抗原；C D 7 ，( 转铁蛋白受体) 可在活化T 及B 细胞、巨噬细胞表面表达。因此我们选用C D 2 5 阳性、C D ，1 阳性以及C D 2 5 、C D ，l 双阳性细胞数目在骨
14、髓活化前后的改变作为判断活化的指标，在实验中通过F A C S 计数1 0 0 0 0 个细胞，发现C D ，。阳性、C D 7 l 阳性以及C D 2 5 、C D 7 I 双阳性的细胞百分数分别由活化前的1 o o + _ o 2 2 、3 4 0 7 + 1 0 9 3 、0 6 3 0 2 1 上升到活化后的7 6 61 4 0 、3 8 9 6 1 1 1 l 、5 9 2 1 2 3 ，经统计学分析差异有显著性( P 0 0 1 ) 。因此我们认为检测骨髓活化前后C D 2 5 阳性、C D 7 l 阳性以及C D 2 5 、C D 7 l 双阳性细胞数目的改变，也证实了骨髓的活化
15、。活化骨髓究竟是由骨髓中哪种前体细胞刺激产生，目前尚未见系统的实验报道。A g a h 等对小鼠骨髓细胞的实验表明，活化骨髓的前体细胞大部分为T h y - 1 一细胞，小部分为Y h y - l + 细胞，一些活化骨髓集落具有N K 细胞标记，且C D 3 阳性，C D 4 、C D 8阴性。K e e v e r 等1 9 1 发现用I L 一2 刺激后C D 5 6 + 细胞由2 增至1 7 ，C D 拍是N K 细胞的表面标记，所以有学者将这种具有杀伤活力的细胞称为骨髓中的L A K 细胞。另有学者如M a z u m d e r 等【1 0 1 则认为活化骨髓与L A K 细胞完全不
16、同。所以活化骨髓是一种来源多样功能复杂的细胞。从理论上讲，I L 2 能活化骨髓是与它能促进骨髓中的前体细胞和各种淋巴细胞尤其是T 淋巴细胞增殖与分化分不开的。我们推测，这种T 淋巴细胞的激活，对于自体骨髓移植后可能产生一定的G V L 作用，这当然需要进行更为深入的研究。活化骨髓最终目的就是要发挥其抗肿瘤的作用，该实验首先证明了用I L 2 活化的骨髓单个核细胞具有更强的杀肿瘤细胞作用。但这一复杂作用并非仅通过一个环节即能完成或达到。基于有学者在研究中发现，培养处理后的L A K 细胞上清液对肿瘤细胞同样具有很强的杀伤作用，并推测是与L A K 细胞分泌了某种杀伤因子有关【l l 】。因此我们推断骨髓单个核细胞经I L 一2 刺激后也可能分泌了大量的细胞因子并释放到培养液，这些细胞因子从理论上分析应在抗肿瘤中发挥作用。为此我们作了如下
