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1、Y8 3 4 5 1 5徐州医学院硕士学位论文届专刖：三旦里兰量业：苎墨!研究方向研究生姓名宁师姓名起止日期：苎堕苎璺堂型煎! ! 垦墨苎丝塑塾整丝! 堂! 旦兰垫堕! 旦2 0 0 5 年5 月徐州医学院硕士研究生学位论文壳寡糖对S 瑚肉瘤细胞生长的影响研究生：刘清华导师：孔庆兖教授柳红教授中文摘要目的探讨壳寡糖对S ，。肉瘤细胞的生物学效应，为其治疗肿瘤提供新的理论基础。方法1 、体外实验( 1 ) S 。肉瘤细胞腹水型荷瘤鼠肿瘤细胞腹腔传代。无菌抽取荷瘤鼠腹水，洗涤，淋巴细胞分离液分离提取肿瘤细胞，分为五组，分别与壳寡糖0ug m l ( 阴性对照组) ，1 0 0ug m 1 、2 0
2、 0 pg m l 、4 0 0 I Jg m 1 ( 实验组) ，顺铂1 0ug m ( 阳性对照组) 共同孵育七天。每2 4 小时用细胞汁数法计数各组细胞，观察壳寡糖对S 。肉瘤细胞生长的作用。( 2 ) 每2 4 小时取出培养板中覆有s 。肉瘤细胞的玻片1 0 中性甲醛固定，苏木精一伊红染色后光镜下观察细胞生长情况。( 3 ) S 。细胞与壳寡糖共同孵育9 6 小时，收集细胞，P I 染色经流式细胞仪检测壳寡糖对S 。肉瘤细胞周期、细胞凋亡的影响。2 、体内实验( 1 ) 建立s 。肉瘤小鼠皮下移植瘤模型，随机分为五组，每组1 2 只，雌雄各半。分别腹腔给予生理盐水( 阴性对照组) 、壳
3、寡糖5 0 m g k g d 、l O O m g k g d 、2 0 0 m g k g d ( 实验组) 和颇铂4m g k g d ( 阳性对照组) ，每天一次，连续给药7 天。停药2 天处死小鼠，剁离皮下肿瘤，测量瘤重、瘤体积，计算抑瘤率。( 2 ) 应用免疫组织化学技术检测肿瘤组织中B a x ，B c l 一2 的表达情况。( 3 ) 解剖小鼠。取小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏称重并制作H E 切片，观察实验浓度范围内各组给壳寡糖作用后小鼠重要脏器的形态学改变。结果l 、体外实验( 1 ) 在体外经细胞计数法发现实验组细胞数较阴性对照组细胞数减少，且具有剂量和时间依赖性：经H
4、 E 染色可见实验组肿瘤细胞生长密度较阴性对照组稀疏。( 2 ) 与壳寡糖共同培养9 6 小时后4 0 0pg m 1 壳寡糖组S ”肉瘤细胞周期发生明显改变，表现为G 0 G 1 期细胞比例上升( 7 2 4 3 2 8 1 v s 阴性对照组徐州医学院顿 l 研究生学讯论文6 3 7 9 1 1 6 ，P Ix1 0 4 C O S 高。M a e d aY 等”1 研究发现2 1 K D 的水溶性壳聚糖和壳寡糖在l O O m g k g 体重和3 0 0 m g k g 体重组灌胃可减轻小鼠，肉瘤；4 6 K D 的水溶性壳聚糖l O O m g k g 体重组可减轻癯重而3 0 0
5、m g k g 体重组对小鼠瘤重没有影响：而1 3 0 K D 的壳聚糖对组对小鼠瘤重没有影响。2 1 K D 和4 6 K D 的壳聚糖( 1 0 m g L ) 可以提高肠上皮或脾脏内N K 细胞的活性，低分子量的壳聚糖( 2 1 K D 和4 6 K D ) 作用下比高分子量壳聚糖( 1 3 0 K D 和6 5 0 K D ) 作用下N K 细胞的活性增强。而且，在体内低分子量壳聚糖( 2 I K D 和4 6 K D ) 作用下可增强s ，。荷瘤小鼠的细胞毒性作用。因此，甲壳低聚糖的抗肿瘤活力与其在体内的吸收情况及分子链长短密切相关。3 2 构效关系S u z u k i 胪”证实聚
6、合度为4 7 的甲壳低聚糖( G I c N A c ) 4 7 对B A L B C 鼠中的腹膜渗出液细胞显示了强烈的吸引效应，而对于完全脱乙酰化的甲壳低聚糖( G L c N ) 2 6 ，则没有该作用。薛培华等阱1 研究认为不同脱乙酰和分子量的壳聚糖对超氧阴离子自由基和弧油酸脂类自由基具有明显的抑制作用，这种作用随着壳聚糖脱乙酰度的增加和分子量降低而有所增加。4 抗肿瘤作用的应用4 1 甲壳质的抗肿瘤药物的应用目前壳聚糖已作为药用辅料及医用材料在国内外有较广泛的研究和应用。特别是与一些抗肿瘤药物如阿霉素、N 一琥珀酰等形成结合物后，改善药物药代动力学性质，使药物局限在棣州医学院硕士研究生
7、学位论义肿瘤位霉缓慢释放，能明摄提高疗效，降低毒副作用，延长病人的生存期。“1 。另外在激光免疫治疗癌症、中子捕获治疗癌症汹1 和辐射免疫治疗癌症。”等方法中用作免疫调节荆。4 2 壳聚糖的安全性K i m 等“”研究了壳寡糖对大鼠的亚急性毒性，分别采用5 0 0 、1 0 0 0 、2 0 0 0 m g ( k g d ) 给药4 周后，结果显示，对照组和实验组不仅在行为、外表、体重、食物消耗等方诬无显著性差异，而且在尿分析、血液学和组织病理学等方面也无显著性差异，提示壳寡糖的甄急性毒性作用非常小。壳聚糖。”的亚急性毒性实验连续投药三个月未发现病理异常；急性毒性实验证明经口腔、皮下和腹腔给
8、药，对大黑鼠、老鼠的毒性极低。5 存在的问题与展望综上所述，有关甲壳素壳聚糖及其衍生物抗肿瘤作用的研究正由单纯增加宿主免疫功能的方向转向对肿瘤细胞的直接作用以及影响其抗肿瘤作用的因素的方向深入：由细胞水平向分子水平、基因水平深入：由单独应用向与细胞因子、肿瘤杀伤效应细胞、放疗、化疗的联合应用深入：壳聚糖的硫酸化与硒化、壳聚糖脂质体、生物素化壳聚糖微球等新技术在研究中逐步应用。近年来，人们已经注意到细胞凋亡与肿瘤的关系，对细胞凋亡的调控基因与凋亡控制机制都有新的发现，对肿瘤的发生、发展和治疗盘有了新的理解。甲壳素壳聚糖及其衍生物是否可引起细胞凋亡，这是有待进一步研究的问题。, 1 3 徐州医学院
9、硕士研究生学位论文参考文献 1 温玉麟等甲壳素及其衍生物在药物制剂中的应用 J 中国海洋药物，1 9 8 9 ，( 1 ) ：3 3 3 5 2 王爱勤等水溶性甲壳素、甲壳胺及其衍生物的制备和应用 J 中国海洋药物，1 9 9 6 ，( 3 ) ：3 1 3 4 3 R i n aS ，D e s hD ，A n a k s b iK ，e ta 1 An o v e lp e n t a s a c c h a r i d ef r o mi m m u D o s t i m u a n to l i g o s a c c h a r i d ef r a c t i o no fb u
10、 f f a l om i l k J B i o c h e m c ae tb i o p h y s i c aA c t a ，1 9 9 9 ，1 4 2 8 ( 2 - 3 ) ：4 3 3 4 3 5 4 Y uZ ，Z h a oL ，K eH P o t e n t i a lr o l eo fn u c l e a rf a c t o r k a p p a Bi nt h ei n d u c t i o no fn it r ico x i d ea n dt u m o rn e c r o s i sf a c t o r a l p h ab yo l i g
11、 o c h i t o s a ni nm a c r o p h a g e s J ，I n tI m m u n o p h a r m a c o l ，2 0 0 4 ，4 ( 2 ) ：1 9 3 2 0 0 5 M o r iT ，M u r a k a m iM ，O k u m u r a 虢，e ta 1 M e c h a n i s mo fm a c r o p h a g ea c t i v a t i o nb yc h it i nd e r i v a t i v e s J JV e tM e dS c i ，2 0 0 5 ，6 7 ( 1 ) ：5
12、1 - 5 6 6 T o k o r oA ，T a t e w a k iN ，S u z u k iK ，e ta 1 G r o w t h i n h i b i t o r ye f f e c to fh e x a N a c e t y lc h i t o h e x a o s ea n dc h i t o h e x a o s ea g a i n s tM e t h AS O l i dt u m o r C h e mP h a r mB u l1 ，1 9 8 8 ，3 6 ( 2 ) ：7 8 4 7 9 0 7 S u z u k iT ，W a t a
13、 n a b l e I m m u n o e n h a n c i n ge f f e c t so fN - a c e t y lc h i t o h e x a o s e ，A d v a n c e di nh it i na n dC h i t o s a n ，E l s e v i e r ，L o n d o n ，1 9 9 2 ，9 6 1 0 5 8 N i s h i m u r aK ，N i s h i m u r aS ，S e eH ，e ta 1 M a c r o p h a g ea c t i v a t i o nw i t hm u l
14、 t i p o x O U Sb e a d sp r e p a r e df r o mp a r t i a l l yd e a c e t y l a t e de h i t i n JB i o m e dM a t e rR e s ，1 9 8 6 ，2 0 ( 9 ) ：1 3 5 9 1 3 7 2 9 王芳宇，何淑雅，李邦良等水溶性壳聚糖抗肿瘤作用的实验研究 J 中国生化药物杂志，2 0 0 1 ，2 2 ( 1 ) ：2 卜2 2 1 0 T o k o r oA ，S u z u k iK ，M a t s u m o t oT ，C h e m o t a c
15、t i cr e s p o n s eo fh u m a nn e u t r o p h i l St oN - a c e t y lc h i t o h e x a o s ei nv i t r o M i c r o b i o lI m m u n o l ，1 9 8 8 ，3 2 ( 4 ) ：3 8 7 3 9 5 1 1 张澄波壳多糖抑制腹水癌有关的若干因素研究 J 中国实验临床免疫学杂志，1 9 9 2 ，4 ( 5 ) ：1 4 1 6 1 2 杜昱光，张铭俊，张虎等海洋寡糖工程药物一壳寡糖制备分离新工艺及其抗癌活性研究 J 中国微生态学杂志，2 0 0 1 ，2 ( 1 3 ) ：5 - 7 1 3 余有宁甲壳质学术报告 C 辽宁省甲壳质研究会，1 9 9 8 4 - 1 2 “徐州医学院硕士研究生学位论文 1 4 T o k o rA ，S u z u k iK ，M a t s u m o t oT ，e ta 1 C h e m o t a c t i cr e s p o n s eo fh u m a nn e u t r o p h i lSt oN a c e t y l c h i t o h e x a o s ei nv i t r o M i c r o b i e lI m m u n o l ，1 9 9 8
