《血浆和尿中苯并二氮杂类药物及其代谢物的电子捕获气相色谱筛选分析法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血浆和尿中苯并二氮杂类药物及其代谢物的电子捕获气相色谱筛选分析法（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、血浆和尿中苯并二氮杂 类药物及其代谢物的 电子捕获气相色谱筛选分析法姚丽娟3谭家镒 姜兆林 邢丽梅(中国刑警学院法医系,沈阳110035)摘 要 建立了血浆和尿中11种苯并二氮杂 类药物及其9种代谢物的电子捕获检测气相色谱分析方法。血浆及加 2葡萄糖醛酸酶水解后的尿在碱性条件下用苯2异戊醇(98. 51. 5)提取,提取物非衍生化或三甲硅烷基衍生化后进行色谱分析。分析采用两根极性不同的色谱柱。检材中分析物的检出限大多数低于10g/L ,本方法还可用于定量分析。自愿者服口服治疗量药物,其血浆、 尿中药物和代谢物的分析结果表明:本方法实用于麻醉抢劫案中的药物分析。关键词 苯并二氮杂 类药物,气相色
2、谱法,血浆,尿2003201227收稿;2003209210接受 本文系国家 “九五” 重点科技攻关项目资助课题(No.96291920120524)1 引 言苯并二氮杂 类药物,常见于成瘾滥用和麻醉后犯罪以及过量服用自杀,尤以三唑仑、 阿普唑仑、 氟 硝西泮、 氯硝西泮和地西泮等在麻醉抢劫案中使用较多。血、 尿等生物检材中,该类药物及其代谢物的分析在司法鉴定中具有重要的意义。 已报道的该类药物的分析方法有免疫分析法1、 薄层色谱法2、 气相色谱法35、 气2质联用法6和高效液相色谱法7等。本实验建立了血浆和尿中的11种该类药物及其9种代谢物的非衍生化和三甲 硅烷基(TMS)衍生化的电子捕获检
3、测气相色谱分析方法。2 实验部分2. 1 色谱仪及色谱条件HP26890气相色谱仪(美国惠普公司) ,配置 2ECD检测器和HP2化学工作站。HP25柱: 30 m0.32 mm i. d. (膜厚0.25m) ;柱温200(1 min)20/ min280(15 min) ,气化温度250,检测器温度300;不分流进样(阀关闭时间0. 7 min) ,载气高纯氮(恒压,压力116. 7 kPa) ,尾吹高纯氮(60 mL/ min)。HP250+柱: 30 m0.32 mm i. d. (膜厚0.1m) ,柱温200(1 min)20/ min280(15 min) ,载气高纯氮(恒压,压力
4、121.1 kPa) ,其余条件同HP25柱。2. 2 试剂和材料地西泮、 硝西泮、 奥沙西泮、 艾司唑仑、 阿普唑仑、 三唑仑、 氯硝西泮、 利眠宁、 氟西泮(国家麻醉品实 验中心)、 氟硝西泮、 劳拉西泮(美国新泽西州司法鉴定研究所)、12羟基三唑仑、12羟基阿普唑仑和去甲 西泮(美国Sigma公司) ,72氨基氟硝西泮、72氨基氯硝西泮、 去甲氟硝西泮、 羟乙基氟西泮、 去烃基氟西泮 和去甲氧西泮(瑞士Hoffman La Roche公司)。以上试剂分别用甲醇配制成100 mg/L标准储备液,临用时稀释成10及1 mg/L标准工作液,并根据在所用色谱条件下的tR分布,配制成各分析物浓度均
5、为10mg/L的混合标准液数种。 2葡萄糖醛酸酶(美国Sigma公司) :临用时加水配制成10000单位/ mL溶液;N ,O2双三甲硅烷基三 氟乙酰胺(BSTFA ,美国Supelco公司) :含1 %三甲基氯硅烷(TMCS) ;苯、 异戊醇、 二氯甲烷、 正己烷、 甲醇 等溶剂:分析纯试剂,蒸馏后使用;衍生化用无水乙酸乙酯:分析纯试剂,按文献8方法处理。pH 418缓冲溶液:乙酸钠(不含结晶水)41.0 g ,加36 %乙酸83.3 mL ,加水至500 mL ;pH 10.8缓冲溶液:碳酸钠(不第32卷2004年1月分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journ
6、al of Analytical Chemistry第1期913含结晶水)53.0 g ,碳酸氢钠42.0 g ,加水溶解至500 mL。实验用水为二次蒸馏水;空白血浆购自沈阳市 中心血站,含柠檬酸钠抗凝剂,新鲜;空白尿:近期未服药物健康人体排泄,新鲜。2. 3 样品处理 取待检尿1 mL放入试管中,加pH 4.8缓冲溶液50L ,加 2葡萄糖醛酸酶溶液100L ,置37 水浴 中水解14 h(过夜) ,放冷,加pH 10.8缓冲溶液0.5 mL ,或取待检血浆1 mL放入试管中,加pH 10. 8缓冲溶液0.5 mL ,加苯2异戊醇(98.51.5)5 mL ,涡旋2 min ,3000 r
7、/ min离心6 min ,分取有机相置于带1 mL 刻度尾管的20 mL鸡心瓶中,置100110 甘油浴中挥干,加无水乙酸乙酯50L溶解剩余物,抽取1L 进样,直接进行分析。剩余溶液中加入BSTFA 20L ,加塞密闭,尾管插入60 甘油浴中进行衍生化反 应30 min ,然后在缓慢的氮气流下60 挥干(除去剩余BSTFA) ,加无水乙酸乙酯50L溶解剩余物,抽取1L进样,进行衍生化而后的分析。3 结果和讨论3. 1 色谱分离 非衍生化及TMS衍生化HP25柱分析空白尿及添加标准对照品尿的色谱图如图1和图2所示。用HP250+柱分析尿的色谱图及用两支柱分析血浆的色谱图略。图1 尿液提取物色谱
8、图(非衍生化分析,HP25色谱柱)Fig.1 Chromatograms of urine extracts(underivatized analysis on HP25 column)A.空白尿(blank urine) ; B、C.空白尿添加200g/L各分析物(blank urine spiked with analytes each at level of200g/L)。色谱峰(chromatographic peaks) :1.奥沙西泮(oxazepam) ; 2.劳拉西泮(lorazepam) ; 3.地西泮(di2azepam) ; 4.去烃氟西泮(desalkylfluraze
9、pam) ; 5.去甲西泮(nordiazepam) ; 6.利眠宁(chlordiazepoxide) ; 7. 72氨基氟硝西泮(72aminoflunitrazepam) ; 8.氟硝西泮(flunitrazepam) ; 9.羟乙基氟西泮(hydroxyethylflurazepam) ; 10.去甲氧西泮(demoxepam) ; 11.去甲氟硝西泮(desmethylflunitrazepam) ; 12.氟西泮(flurazepam) ; 13.硝西泮(ni2trazepam) ; 14.12羟基阿普唑仑(12hydroxyalprazolam) ;15. 72氨基氯硝西泮(72
10、aminoclonazepam) ; 16.氯硝西泮(clonazepam) ;17.12羟基三唑仑(12hydroxytriazolam) ; 18.艾司唑仑(estazolam) ;19.阿普唑仑(alprazolam) ; 20.三唑仑(triazolam)。图2 尿液提取物色谱图(TMS衍生化分析,HP25色谱柱)Fig.2 Chromatograms of urine extracts(trimethylsilyl (TMS) derivatized analysis on HP25 column)A、B、C和峰120同图1(A ,B ,C and peak 1 to 20 are
11、the same as in Fig.1)。从表1和表2所列分析物tR数据及空白检材和添加标准对照品检材分析所得色谱图可知,在所用色谱条件下,分析物可以很好的分离,未发现杂质色谱峰干扰,国内常用巴比妥类、 吩噻嗪类等安眠镇静01 分 析 化 学第32卷药物标准品分析也未发现对本类药物及代谢物分析的干扰。3. 2 检出限 以检材中分析物色谱峰高相当于基线噪音强度3倍(S/ N= 3)的检材分析物浓度为分析物的检出 限(limit of detection或LOD) ,如表1和表2所示。表1 非衍生化分析测得的提取率、 保留时间和检出限 Table 1 The extraction efficie
12、ncy , retention time and limit of detection of underivatized analysis分析物 Analyte提取率( %) Extraction efficiency尿 Urine血浆 Plasma保留时间( min) Retention timeHP25HP250+检出限Limit of detection (g/L)尿UrineHP25HP250+血浆PlasmaHP25HP250+ 奥沙西泮Oxazepam83.380.65.655.465100436 劳拉西泮Lorazepam87.782.16.126.12742624 地西泮Dia
13、zepam86.679.86.266.35620718 去烃氟西泮 Desalkylflurazepam87.284.46.316.78320220去甲西泮Nordiazepam89.381.06.647.37425312 利眠宁Chlordiazepoxide87.780.06.707.55852806016072氨基氟硝西泮 72Aminoflunitrazepam80.377.47.097.3566944580氟硝西泮Flunitrazepam89.382.17.358.282414 羟乙基氟西泮 Hydroxyethylflurazepam90.486.67.719.008866去甲氧
14、西泮Demoxepam86.187.17.727.41950440 去甲氟硝西泮 Desmethylflunitrazepam84.683.27.9610.4141047氟西泮Flurazepam83.378.68.528.70610613 硝西泮Nitrazepam85.576.68.5511.90352512羟基阿普唑仑 12Hydroxyalprazolam83.384.18.7411.861414121272氨基氯硝西泮 72Aminoclonazepam83.377.69.2215.478767氯硝西泮Clonazepam83.685.19.3113.79676712羟基三唑仑 12
15、Hydroxytriazolam81.182.19.8618.3111161215艾司唑仑Estazolam89.090.39.9015.715332 阿谱唑仑Alprazolam87.791.110.4116.353333 三唑仑Triazolam90.090.611.7019.692822表2 TMS衍生化分析的保留时间和检出限 Table 2 The retention time and limit of detection of TMS derivatized analysis分析物 Analyte保留时间(min) Retention timeHP25HP250+检出限Limit o
16、f detection (g/L)尿UrineHP25HP250+血浆PlasmaHP25HP250+ 去甲西泮Nordiazepam5.264.475858 去甲氧西泮Demoxepam5.494.3491268 奥沙西泮Oxazepam5.794.4961046 去烃氟西泮Desalkylflurazepam6.264.39612512 劳拉西泮Lorazepam6.425.10814412 羟乙基氟西泮Hydroxyethylflurazepam7.597.034846 去甲氟硝西泮Desmethylflunitrazepam7.625.744102672氨基氯硝西泮72Aminoclonazepam7.856.20101084 硝西泮Nitrazepam8.525.956757 氯硝西泮Clonazepam9.287.048106412羟基阿普唑仑12Hydroxyalprazolam11.2614.35223212羟基三唑仑12Hydroxytri
