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1、心川火学博J j 学位论文：中文摘要中文摘要环境雌激素的色谱测定方法研究博士研究生博士生导师指导小组成员曾红燕黎源倩教授孙成均教授杨经国教授目的：选择三种有代表性的环境雌激素：真菌类毒索( 玉米赤霉烯酮及其代谢物及赭曲霉毒素A 、黄曲霉毒素B 1 ) 、农药类持久性污染物( 6 6 6 、D D T ) 和化工原料类雌激素( 双酚A 、壬基酚) 为对象，分别研究它们的检测方法，为监控环境激素和研究它们与疾病之间关系提供灵敏、可靠的分析方法和实验依据。方法；优化了上述环境雌激素在粮食和生物样品中的前处理和测定条件，分别建立了四种色谱分析方法：1 采用甲醇水超声波提取，c 1 8 小桂净化，直接荧
2、光检测反相高效液相色谱法测定玉米、面粉、小麦样品中的玉米赤霉烯酮( Z e a r a l e n o n e ，z O N ) 及其代谢物a 玉米赤霉烯醇( e t - Z e a r a l e n o i ，a z o L ) ，B 一玉米赤霉烯醇( p - Z e a r a l e n o l ，I j - z o L ) 和黄曲霉毒素( A f l a t o x i nB 1 , A F r B l ) 。2 样品经超声波提取，C 1 8 小柱净化后，胶柬电动毛细管电泳法( M E K C ) 测定粮食中玉米赤霉烯酮及其代谢物a 玉米赤霉烯醇，B 玉米赤霉烯醇和赭曲霉A ( O
3、c h r a t o x i nA ，O A ) 、黄曲霉毒素B 1 等真菌、 毒索。3 用正己烷超声波提取人血清样品中6 6 6 ( h e x a c h l o r o c y c l o h c x a n e ，B H C ) 和D D T ( d i c h l o r o d i p h e n y lt r i c h l o r o e t h a n e ) ，磺化处理后，用气相色谱p a g e lo f l 4 2本论文由图券自然科学基金( 3 0 0 7 0 6 7 8 ) 和重点项目脚0 3 0 1 2 0 ) 资助四川大学博上学位论文：中文摘要法，电子捕获检测器
4、测定。4 人血清样品中的双酚A ( b i s p h e n o lA , B P A l 和4 壬基酚( 4 - n o n y l p h e n o l ，4 - - N P ) ，经正己烷超声波提取，C 1 8 小柱净化后，用高效液相色谱法直接荧光检测。结果：1 对粮食样品预处理和高效液相色谱测定真菌毒素的条件进行了优化，玉米赤霉烯酮( Z O N ) ，玉米赤霉烯醇 Z O L ) ，B 玉米赤霉烯醇( p Z O L ) 和黄曲霉毒素B 1 ( A F Ta 1 ) 分别在1 4 n g m l - 1 4 6 吵g m l ，14 n g m 1 2 0 0 H g m l ，
5、8 0 n g m l 一1 6 0 9 9 m 1 ，0 2 r i g m 1 2 0 g m l 范围内线性良好，线性相关系数0 9 9 9 。检出限分别为1 4n g g 、1 4n g g 、8 0n g g和0 0 2 n g g ，日间相对标准偏差为4 5 - 9 2 ，日内精密度2 7 一7 4 ，加标回收率在8 0 O 一1 1 0 O 范围内。对市售粮食样品和针对性采摘的麦穗和麦粒样品进行了测定并与A O A C 的测定结果对比，相对误差为- 8 3 3 - 5 2 6 。2 对真菌毒素的毛细管电泳分析条件进行了优化。玉米赤霉烯酮及其代谢产物m 玉米赤霉烯醇，p 玉米赤霉烯
6、醇和黄曲霉B l 、赭曲霉毒素A 的检出限分别为：3 0n g g 、6 0n g g 、5 0n g g 、O 1 6n g g 、4 0 1 l g 倌，分别在0 0 3 1 x g m l 一2 3 2 3 9 9 m l 、0 0 6 9 9 m l - 3 2 O O v t g m l 、0 0 5 p , g m l一2 5 6 0 9 9 m l 、0 0 0 2 1 x g m l - - 0 3 2 9 # m l 和0 0 3 l , t g m l - 1 6 0 0 1 u g m l 范围内线性相关系数达到0 9 9 9 。日内相对标准偏差0 6 3 一2 8 5
7、，日间精密度为2 6 8 - 5 8 3 ，样品加标回收率在8 , 1 0 一1 0 2 5 范围内。并对玉米、小麦、面粉等样品进行了测定，其结果与所建立的H P L C 相比，相对误差- 9 0 9 - 7 4 6 。3 采用气相色谱电子捕获检测器( G C - B c D ) 测定人血清中4 种6 6 6 和4 种D D T 有机氯农药含量，方法日内精密度在2 1 6 一6 8 3 范围内，日间精密度为2 5 0 一7 4 0 ，加标回收率在8 9 9 一1 0 2 O 之间。p a g e2 0 f 1 4 2蛸川火学僻上学位论文：中文摘要a 一6 6 6 、y - 6 6 6 、6 -
8、 6 6 6 及P , P D D E 在O 2 n g m l - 0 5 0 9 9 m l 范围内线性良好，1 B - 6 6 6 和P , P 一D D D 的线性范围在0 4 n g m l - - 0 5 0 I _ t g m l 之间，o , p 一D D T和p , p - D D T 的线性范围分别为0 T n g m l - - 0 5 0 I t g m l 和1 0 n g m lO 5 0 p t g m l 。线性相关系数均在0 9 9 以上，检出限0 0 7 n g m l 0 5 2 n g m l 。对6 7 例血清样品进行了测定，其中对照组5 2 例。乳腺
9、癌病例组1 5 例。4 采用H P L C 直接荧光检测人血清中双酚A 和壬基酚的含量。日内精密度4 0 1 5 0 1 ，日间精密度5 4 8 一7 6 5 。双酚A 线性范围为1 4 n g m I - - 1 0 。o M g m l ( r - 0 9 9 9 9 ) ，壬基酚则在2 2 n g m I 1 5 o g m l范围内相关系数可达到0 9 9 9 9 。双酚A 的检出限为0 3 6 n g m l ，壬基酚为0 5 4 n g m l 。方法回收率范围；B P A 为9 2 0 9 8 。8 ，4 N P 为9 4 ：7 9 7 1 。对8 0 份人血清样品进行了测定(
10、5 1 例乳腺癌，2 9 例对照) 。结论：1 建立的超声波提取，c 1 8 小柱净化，H P L C 。荧光检测同时测定粮食样品中玉米赤霉烯酮及其代谢物和黄曲霉毒素B l 的方法，目前在国内尚未见报道。与A O A C 的方法相比，改进了样品的处理方法，采用固相萃取净化，简化了操作，改善了净化效果而且增加了测定对象。所建立的方法灵敏、准确，易于推广，适用于粮食中玉米赤霉烯酮及其代谢物和黄曲霉毒素甄四种真菌毒紊的检测。测定结果与A O A C 的基本一致。2 将毛细管电泳分析法应用到粮食样品中Z O N 及其代谢物和常见的真菌毒素黄曲霉B 1 和赭曲霉A 的测定。目前国内尚未见这方面的研究报道
11、，国外文献少且未涉及实际样品的测定。本法具有试剂用量少，分析成本低，分析周期短的特点，同时测定5 种真菌毒素，并用于实际粮食样品的分析，获得了满意的结果。测定结果与建立的H P L C 法相比，相对误差小于1 0 。3 建立了人血清中有机氯的气相色谱电子捕获检测器测定方法，凹川人学博一二学位论文：中文摘要并在国内首次与流行病学的研究相结合，对5 2 例对照及1 5 例乳腺癌病例的人血清进行了测定。实验结果显示，病例组血清中8 种有机氯的均值有7 种高于对照组。经t 检验，病例组中P , P ，D D T 、o , p ，D D T 和P , P ，D D E 的均值和检出率均比对照组高( P
12、C I C I - - C t l- 一U D Tm3 一D D T图2D D T 六种异构体的化学结构式F i g 2T h ec h e m i c a ls t r u c t u r e so fD D Ti s o m e r sp 嚣醚占五。o。：i K r =辞肾。瑞。凹川大学蜉士学位论文人衄 I ! 中6 6 6 ，D D T 的气翱也满测定方让研究市售6 6 6 为n 一6 6 6 、Y 一6 6 6 、B 一6 6 6 和6 6 6 6 4 种异构体的混合物，其中以Y 一6 6 6 杀虫作_ 【 I 虽强。其它几种异构体的杀虫能力较弱。在农药中起主要作用的是P ，p 一D
13、D T 和o ，P 一D D T 两种，在工业品中P ，P 一D D T占7 0 - 8 0 。6 6 6 和D D T 都不溶于水，易溶于丙酮、石油醚、正己烷、乙醚等有机溶剂，也易溶于脂肪。对光、热、酸均稳定，甚至在浓硫酸中也不分解。但遇碱容易分解。6 6 6 、D D T 进入体内后，由于它们的强脂溶性而蓄积在脂肪含量较高的皮下和肠系膜，其次是肝脏、肾脏和血液。6 6 6 经生物体作用生成三氯苯酚。P ，P - D D T 在体内生成两种衍生物P ，p - D D D 和P ，P 一D O E l 6 l ：HC 1p D D Tl c t O - - O - - c ，II l，F l倒
14、耐I 二氯二苯二氯z 蟪)lI ILc - d Q c t C I C C l砌对I 二氰二苯二氯乙两)圈3p p 一D O T 的代谢产物F i g 3T h em e t a b o l i t e so fP P 一D D T2 0 世纪4 0 年代，人类丌始使埘D D T 和6 6 6 两种有机氯杀虫剂。由于它们防治面广，药效比当时的其他杀虫剂好，急性毒性低，而残留毒性尚未被发现，因而被广泛用于秘治作物、森林和牲畜的虫害。作为一个农业大国，我国在2 0 世纪6 0 8 0 年代大量生产和使用的农药主要是有机氯农药。据统计，1 9 7 0 年我国共使用6 6 6 、D D T 、毒杀芬等
15、有机氯杀虫剂1 9 1 7 1 0 4 吨，占农药总用量的8 0 1 I 。”。8 0 年代初，在调查统计P a 铲6 0 0 f 1 4 2四川大学l I 孽士学位论文人J 0 【清中6 6 6 、D D T 的气相色谱测定方法研究的全国2 2 5 8 个县( 市) 中，有机氧农药使用量仍然占农药总用量的7 8 t s l 。3 0 多年来，我困累计施_ 【 ；ID D T 约4 0 多万吨，占国际上总量的2 0 【7 】口随着这些杀虫剂残毒的发现，从2 0 世纪7 0 年代开始，许多国家禁止或限制它们的使用。1 9 8 2 年我国开始实施农药登记制度以后，已先后停止了氯丹、七氯和毒杀芬的生产和使用，但日前仍保留有少量6 6 6和D D T 农药的生产。前者主要用于生产农药三氯杀螨醇的原料：后者主要J ；I j 于生产农药五氯酚( 川于木材防腐剂) 和五氯酚钠( 主要用于防治血吸虫的杀钉螺药剂) 。有机氯除了具有慢性毒作用、影响免疫功能和生殖机能及致畸、致突变、致癌作用【5 J 之外，现在被人们关注的主要是其对内分泌系统的影响。体外试验表明nD D T 及其代谢产物P , P - D D E 、P , P 一D D D 等能够与雌激素受体结合，模拟雌激素效应，促进人类乳腺癌细胞M C F - 7 的增殖
