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1、 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 1NF-kB 在春季角结膜炎中的表达在春季角结膜炎中的表达 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科，430022 研究生：温臣婷 导 师：张明昌教授 摘 要 摘 要 目目 的：的： 研究核转录因子 NF-kB 在春季角结膜炎中的表达， 从而进一步了解春季角结膜炎的发病机制，为寻找春季角结膜炎有效治疗方法提供理论依据。 方方 法：法：将实验分为实验组和对照组，实验组为春季角结膜炎的结膜组，共 6 例，对照组为正常结膜组，共 6 例。分别取两组相同部位的结膜组织，运用免疫组化及免疫印迹法检测春季角结膜
2、炎患者病变的结膜组织和正常的结膜组织中 NF-B 的表达情况。 结结 果：果：观察正常结膜组织层次分明，无炎症细胞浸润，光镜下春季角结膜炎的结膜组织中，可见新生血管散在分布，大量炎症细胞浸润，其中以嗜酸性粒细胞为主。免疫组化显示，正常人结膜组织中 NF-B 几乎没有表达，在春季角结膜炎病变的结膜组织中 NF-B 的表达明显。Western blot 也显示春季角结炎病变的结膜组织中 NF-B 的表达明显增加， 与正常结膜中的表达量相比， 二者差异具有统计学意义（P0.05) 。 结结 论：论： 核转录因子 NF-B 在春季角结膜炎病变结膜组织中的明显表达， 提示作为炎症细胞反应诱发因素，其可能
3、参与春季角结膜炎病理损伤的发病过程，导致炎症细胞释放致炎物质。如何控制其表达，减轻炎症物质的释放，可能是春季角结膜炎的一种新的治疗方法。 关键词关键词 核转录因子；春季角结膜炎；人；免疫组化；免疫印迹法 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 2Expression of nuclear factor of kappa B in vernal keratoconjunctivitis Department of Ophthalmology , Union Hospital of Tongji Medical College, Huazho
4、ng University of Science and Technology Postgraduate: Wen Chenting Tutor : Zhang Mingchang ABSTRACT ABSTRACT Purpose: To study expression of nuclear factor of kappa B in vernal keratoconjunctivitis，learn to know the mechanism of vernal keratoconjunctivitis and provide theoretical basis to search for
5、 effective treatment method for vernal keratoconjunctivitis. Methods: Experiment was devided in two group .Test group is made of conjunctiva of vernal keratoconjunctivitis，it is 6 cases. Control group is normal conjunctiva group,it is 6 cases. Take the conjunctival tissue in similar site of eye ball
6、, respectively, expression of NF-B was measured in the tissue of vernal keratoconjunctivitis and normal conjunctiva by immunohistochemical method and Western blot. Results: Normal conjunctival tissue was observed in light microscope, there is very obvious limit and no infiltrating inflammatory cell
7、is found. Dispersed new vessels can be found and much inflammatory cell infiltrate conjunctiva in the conjunctival tissue of vernal keratoconjunctivitis by light microscope, Eosinophile granulocyte is main. By the immunohistochemistry we can find none of NF-B is expressed in normal human conjunctiva
8、, but it is expressed very much in the conjunctival tissue of vernal keratoconjunctivitis. Expression of NF-B was significantly higher in conjunctiva of vernal keratoconjunctivitis. than that in normal conjunctiva by Western blot, it was significant in statistics(p0.05). 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中
9、科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 3Conclusion: NF-B was expressed obviously in the conjunctival tissue of vernal keratoconjunctivitis, this hints NF-B acted as the factor of the inflammated cell，it maybe participate in pathological damage process and induce inflammated cell to release inflammated substance. How t
10、o control its expression, then decrease liberation of inflammated substance from inflammaed cell can be the new method for the therapy of vernal keratoconjunctivitis. Key words: nuclear factor of kappa B; vernal keratoconjunctivitis（VKC); human; immunohistochemistry; Western blot 独创性声明 独创性声明 本人郑重声明，
11、本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或
12、扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密 ，在_年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密。 （请在以上方框内打“” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 4前 言 前 言 春季角结膜炎是儿童和青少年常见的一种变态反应性眼表疾病，根据临床症状和体征即可正确诊断，但治疗颇为棘手，对日常生活造成严重困扰，严重影响生活质量。近年来，对VKC临床特点认识、病理机制研究和治疗方面取得一定进展。春季角结膜炎涉及到型体液免疫和型细胞免疫均参与的变态应性疾病；是一种与免疫
13、、神经、内分泌等多种因素有关并相互作用引起的慢性过敏性的结膜炎症1 。目前的治疗观点是局部治疗，以对症药物治疗为主，强调抑制肥大细胞脱颗粒和引起过敏的炎性介质的释放，对于严重者给予手术治疗。但是它的确切病因、发病机制目前尚不完全清楚，因此影响到疗效。 NF-B蛋白是一种核转录因子蛋白， 是在研究免疫球蛋白基因表达调节中发现的，能与免疫球蛋白链基因的增强子B序列特异性结合的核蛋白因子，与多种把基因的转录启动有关2 。NF-B几乎存在于所有细胞中，哺乳动物中有五种家族成员，其中含有转录活化区域的是P65，在正常情况下其位于胞浆中与其抑制性蛋白（IB）组成三聚体。在受到刺激因素作用后，IB磷酸化，N
14、F-B 的定位信号得以暴露，成为激活形式， NF-B解离出来后进入胞核，与靶DNA的启动序列B位点结合，启动相应靶基因转录激活。 有报道 NF-B 在哮喘、类风湿性关节炎、肠道炎症性疾病、动脉粥样硬化、老年痴呆、肿瘤等的病机中发挥重要因素：激活免疫和炎症反应中的因子表达；介导控制细胞增殖和凋亡的因子；刺激有助于炎症过程的酶的表达3。 目前，关于 NF-B 在春季角结膜炎中的作用国内外尚未见报道。基于 NF-B 在免疫和炎症及细胞增殖和凋亡因子的调控中的核心调节作用，我们通过检测春季角结膜炎中 NF-B 的表达情况， 进一步探讨春季角结膜炎的可能发病机制， 为春季角结膜炎寻找更有效的治疗手段提供
15、理论依据。 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 5材料与方法 材料与方法 1. 实验材料实验材料 1.1 主要仪器设备主要仪器设备 （1）组织匀浆器 (2) 石蜡切片机 (3) -20低温冰箱、-70低温冰箱 (4) 微量加样枪 (5) Bio-mad 电泳仪 (6) Bio-mad 蛋白质转膜仪 (7) 紫外分光光度计 (8) Olympus 数码照相机 (9) HMIAS-2000 型全自动医学彩色图像分析系统 同济医学院提供 (10) 低温离心机 1.2 主要试剂主要试剂 (1) NF-B 抗体 Santa cruz 公司 (2) 鼠 SP kit 武汉博士德生物工程有限公司 (3) 硝酸纤维素膜 Sigma 公司 (4) Pepstatin A、Leupeptin Sigma 公司 (5)N,N,N,四甲基乙二胺（TMEMD） 丙烯酰胺 Sigma 公司 (6) 2SDS 加样缓冲液、5%脱脂奶粉、溴酚兰、异丁醇等 (7)辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠二抗 武汉博士德生物工程有限公司 1.3 样本样本 1.3.1 样本的获取 实验组材料来自华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科行春季角结膜炎病华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕
