《免疫性肝纤维化大鼠PPARγ的动态改变及罗格列酮对其的影响论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫性肝纤维化大鼠PPARγ的动态改变及罗格列酮对其的影响论文（36页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山西医科丈学壤士学位论文免疫性肝纤维化大鼠P P A RY 的动态改变及罗格列酮对其的影响 摘要目的探讨大鼠免疫性肝纤维化时过氧化物酶体增殖物激活受体Y ( P P A RY ) 的表达变化及意义，观察过氧化物酶体增殖物激活受体y ( P P A RY ) 的配体一罗格列酮对其表达的影响，研究其与肝纤维化发生、发展的关系，为肝纤维化的诊治提供实验室依据。方法大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化模型组和罗格列酮组。猪血清腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型，罗格列酮组于造模第五周开始予以罗格列酮灌胃。采用H E 和v G染色检测肝组织病理学改变；免疫组织化学技术检测P P A RY 、a 一平滑激动蛋白(
2、a s 姒) 和转化生长因子一B1 ( T G F - 1 31 ) 在肝内的表达及定位，原位杂交法检测P P A RY m R N A 在肝内的表达及定位，并应用图像分析系统对其阳性表达结果进行定量分析，比较各组间的变化特点。结果成功复制免疫性肝纤维化模型。造模4 周时肝内纤维组织增生不明显，与正常对照组比较无统计学意义( O 0 1 2 6 4 0 0 0 4 4 3 V S 0 0 0 5 5 4 0 0 0 3 3 1 ，P O 0 5 ) ，造模6 周及8 周时，肝内胶原增生，其胶原面积百分比与正常对照组比较差异有统计学意义( O 0 1 8 34 -0 0 0 8 1 0 V S
3、O ，0 2 4 6 O 0 5 ；0 2 3 9 9 4 -0 0 2 8 8 0 4 V S 0 2 4 9 3 4 - 0 0 3 3 3 I ，P O 0 5 ) ，第8 周时则显著下降( 0 0 1 1 4 士0 0 0 5 6 3V S O 0 2 4 6 士0 0 0 9 3 5 ，P 0 0 5) ，而肝组织T G F 一1 31 的表达显著降低( P O 0 5 ) T h ec o l l a g e ni nt h el i v e rp r o l i f e r a t e sb o t ha tt h es i x t hw e e ka n da tt h ee
4、i g h t hw e e k ，t h ep e r e e -n t a g eo ft h ea r e ao f c o l l a g ew a ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dc o m p a r e dw i t ht h en o r m a lc o n t r o l s( 0 0 1 8 3 士0 0 0 8 1 0 V S 0 0 2 4 6 0 0 0 9 3 5 V S 0 0 0 5 5 士0 0 0 3 3 1 ，P 0 0 5 ；O 2 3 9 9 - 士o 0 2 8 8 0 4 V S 0 2 4
5、9 3 士0 0 3 3 3 1 ，P 0 0 5 ) ，a tt h ee i g h t hw e e k ，t h ep e r c e n t a g eo f t h ea r e ao fc o l l a g ea n dt h ee x p r e s s i o no f T G F 一1 3 1i nl i v e rt i s s u ew e r ed e c r e a s e dc o m p a r e dw i t ht h ec o r r e s p o n d i n g m o d e lr a t s ( O 0 1 1 4 士0 0 0 5 6 3
6、V S 0 0 2 4 6 士0 0 0 9 3 5 ，P O 0 5 ) b u tt h ee x p r e s s i o no f T G F - 8 1i nl i v e rt i s s u ew a sd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y( P 0 0 5 ) ；第6 周时肝小叶内变性、坏死的细胞数减少，增生的纤维自中央静脉或汇管区向外延伸，增生程度不等。8 周时汇管区扩大，胶原纤维增牛显著，有的形成完整的纤维间隔，并分割肝小叶形成假小叶，纤维间隔内可见慢性炎细胞浸润。在模型复制6 周及8 周时，两组胶原面积百分比与正常对照组比
7、较差异均有统计学意义( p 0 0 5 ) 。( 见附表l 、2 ，图l 、6 、7 )2 免疫组织化学、原位杂交的方法检测肝脏P P A R 7 、P P A R T - m R N A 的表达免疫组织化学染色显示P P A R 7 在正常肝脏组织阳性表达分布广泛，阳性染色表现为均匀的棕黄色，无论小叶中央静脉周围、正常肝索、还是汇管区均见棕黄色阳性表达。高倍镜下，除有肝实质细胞、星状细胞胞浆分布外，窦内皮细胞、枯否细胞、淋巴细胞亦可见不同程度的表达。第4 周模型组与正常对照组比较无统计学意义( p 0 0 5 ) ，而到6 、8 周时与正常对照组相比，差异显著有统计学意义( P 0 0 5
8、) 。( 见附表3 ，图2 、9 )原位杂交法P P A R r - m R N A 阳性染色主要表现为在细胞质和胞核中可见棕黄色颗粒，阳性细胞成片状分布。在正常肝组织中，P P A R T m R N A 的着色均匀，在猪血清注射第4 、6 、8 周肝组织中，P P A R , t - m R N A 的表达减弱，第4 周模型组与正常对照组比较无统计学意义( P 0 0 5 ) ，而到6 、8 周时与正常对照组比较差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。( 见附表4 ，图3 、8 )3 免疫组织化学检测肝脏洳S M A 、T G F p l 的表达肝组织a - - S M A 在正常对照组
9、肝组织仅分布于血管壁，而猪血清注射后的模型组除血管壁外，汇管区、纤维间隔有大量表达，在肝细胞间血窦内也有分布，呈着色较深的条索状或片状。第4 周模型组与正常对照组比较无统计学意义( p O 0 5 ) ，而到6 、8周时与正常对照组比较差异有统计学意义( P O 0 5 ) ，8 周时较同期模型组降低( p 0 0 0 1 ) 。与第6 周罗格列酮组比较，第8 周时罗格列酮组大鼠肝组织中T G F 一1 3 1阳性表达显著降低( p O 0 1 ) 。( 见附表6 ，图5 、1 1 )4 肝组织P P A 脚表达水平与肝组织n S M A 、T G F - p l 表达水平的相关性分析S p
10、e a r m a n 秩相关分析表明，肝组织中P P A R y 的表达水平与肝组织中a S M A 的表达存在显著的相关性( r = O 7 1 4 ，P 0 0 0 1 ) ，与T G F 1 3 1 表达水平也存在相关性( r =0 4 9 2 ，P 0 0 t ) 。7山西医辩太掌磺士擎位论文讨论1 动物模型的建立在我国，肝纤维化、肝硬化患者大部分是由于肝炎病毒尤其是乙型肝炎病毒性感染引起肝脏持续性损伤，以胶原为主的细胞外基质过度沉积诱导而致【5 “，慢性肝病迁延不愈，其本质与免疫反应有关。针对这一病因，本文应用猪血清腹腔内注射复制免疫性肝纤维化模型，猪血清中的抗原物质经大鼠腹腔内吸
11、收后刺激其产生相应抗体，形成抗原抗体复合物，并可激活或结合补体。由于抗原的反复、长期刺激，过量的免疫复合物来不及被清除，沉积于肝细胞膜、血管壁和汇管区，引起慢性免疫性炎症，如此反复导致肝细胞变性、坏死、再生，同时激发静止的肝星状细胞( h e p a t i cs t e l l a t ec e l l ，H S C ，贮脂细胞) 向肌成纤维细胞( m y o f i b r o b l a s t ，M F B ) 转化，分泌胶原，致肝纤维化，最后发展为肝硬化，免疫性肝纤维化模型较接近人类肝炎后肝硬化形成的原因与表现l 7 1 ，与肝炎后肝纤维化发病机理相似，更接近临床病例发病特点，是理想
12、的肝纤维化模型，故此模型对于慢性肝炎所致肝纤维化的研究，更具有理论和实际意义。本研究发现，在模型复制过程中，模型组肝组织正常肝小叶结构逐渐被破坏消失，汇管区和中央静脉区胶原纤维增生，分割肝小叶形成大方形及小方形假小叶；在模型复制过程中，肝组织a - - S M A 表达显著高于正常对照组，而a - - S M A 被认为是活化H S C的标准引，通过观察a - - S M A 的表达分布情况，可以了解H S C 活化、增殖情况；且研究发现肝内T G F p 1 表达显著高于正常对照组，表明猪血清致大鼠肝纤维化模型复制成功。2 免疫性肝纤维化时P P A RY 的表达变化肝纤维化的发生是肝的纤维
13、组织形成和降解失衡的结果。研究发现H S C 的激活是肝纤维化形成的中心环节1 9 ，而H S C 增殖、活化及合成细胞外基质又与肝损伤时炎性细胞所产生的细胞因子密切相关。肝损伤时，K u p f f e r 细胞被激活，巨噬细胞浸润，此时K u p f f e r 细胞、受损伤而变性的肝细胞以及血小板等产生转化生长因子( t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - B e t a ，T G F B ) 、血小板源性生长因子( p l a t e l e t - d e r i v e dg r o w t hf a c t o r , P
14、D G F ) 、肝细胞生长因子( H e p a t o e y t eg r o w t hf a c t o r ，H G F ) ，肿瘤坏死因子- - a ( t u m o u r -8山西医科大学磺士学位论文n e c r o s i sf a c t o r - ，T N F - ) 以及未知的细胞因子。这些细胞因子在H S C 激活时表达相应的受体，此时静止期的H S C 向移行期过渡。移行期的H S C 在上述诸因子的作用下，通过旁分泌途径进一步激活H S C 。此时激活的H S C 自身产生T G F 1 3 、成纤维细胞生长因子一2 f f i b r o b l a s
15、 tg r o w t hf a c t o r - 2 ，F G F 2 ) 、血管内皮生长因子( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a e t o r , V E G F ) 等，通过自主分泌途径时H S C 进一步激活而进入活性期，a 一平滑肌动蛋白( a s m o o t hm u s c l ea c t i n ) 表达增强，使细胞向肌纤维母细胞转化，产生胶原合成过多，最终导致肝纤维化的形成D 0 l 。在此过程中，T G F B 1 、I L 1 、n 娅吨、I N F q 、P D G F 、表皮生长因子( e
16、p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r , E G F ) 、碱性成纤维细胞因子( b a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r ，b F G F ) ，结缔组织生长因子( c o n n e c t i v et i s s u eg r o w t hf a c t o r ，C T G F ) 和I G F l 、H G F等构成了一个相互作用且复杂的细胞因子网络，在肝纤维化的不同时期对肝纤维化的发生和发展起促进或抑制作用。近年来又有学者提出过氧化物酶体增殖物激活受体( P P A R s ) 是重要的肝脏代谢功能调节因子，其中P P A R r 对H S C 的激活有着重要的调节作用。P P A R 属于类固醇视黄醛衍生物核受体超家族成员，存在3 种亚型，即P P A R
