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1、MV_RR_CNG_0217 酶标分析仪检定方法 1 酶标分析仪检定规程说明 编号 JJG 8611994 名称 （中文）酶标分析仪检定规程 （英文）Verification Regulation of ELISA analytical instruments 归口单位 黑龙江省技术监督局 起草单位 黑龙江省计量科学研究所 主要起草人 叶军安（黑龙江省计量科学研究所） 批准日期 1994 年 1 月 6 日 实施日期 1994 年 6 月 1 日 替代规程号 适用范围 本规程适用于新制造、使用中和修理后的各类酶标分析仪器的检定。 主要技术 要求 1.外观 2.稳定度 3.波长准确度及透光率特性
2、 4.吸光度准确度 5.吸光度重复性 6.线性误差 7.换挡偏差 8.测试速度 9.绝缘电阻 是否分级 否 检定周期（年） 1 附录数目 3 出版单位 中国计量出版社 检定用标准物质 相关技术文件 备注 2 酶标分析仪检定规程摘要 一 技术要求 1 外观 2 稳定度 2 . 1 仪器吸光度值在1 0 m i n 内因漂移引起的变化量应符合表1 要求。 2 . 2 电源电压2 2 0 V 变动1 0 时，仪器吸光度值变化量应符合表1 要求。 表 1 仪器类别 A B C D E 稳 定 度 0.005 A 1.0% 3 波长准确度及透光特性 波长准确度及透光特性应符合表2 要求。 表 2 仪 器
3、 类 别 A B C D E 波长准确度(nm) 3.0 4.0 5.0 半 宽 度(nm) 12 15 峰值透射比(%) 35 30 4 吸光度准确度 仪器吸光度准确度应符合表3 要求。 表 3 仪器类别 A B C D E 准确度(A) 0.03 0.05 0.07 0.09 5 吸光度重复性 仪器吸光度重复性应符合表4 要求。 表 4 仪器类别 A B C D E 重复性(%) 1.0 1.2 2.0 6 线性误差 仪器线性误差应符合表5 要求。 表 5 仪 器 类 别 测量范围(A) 误 差(%) A 01.5 2.5 B 01.5 2.5 C D(数字显示) 01.5 5.0 E 0
4、1.5 10.0 7 换挡偏差 仪器选择开关( 或按键) 换挡所引起的仪器吸光度值偏差应不超过0 . 0 0 5 A 。 注：此款指有T / A 转换挡的仪器。 表 6 仪器类别 时 间(min) 样品(个) A 1 96 B(非手动式) 4 96 C(非手动式) 4 96 D(泵吸速度) 1/15 1 E 8 测试速度 9 绝缘电阻 仪器常温常湿时，电源插头与机壳间的绝缘电阻不小于2 0 M 。 二 检定条件 ( 一) 检定用设备及测试溶液 1 0 检定用设备及测试溶液见表7 。 表 7 序 号 名 称 规 格 备 注 1 调压变压器 输入 220 V 输出 0250 V 1 kW 2 交流
5、电压表 150/300 V准确度 1.0 级 万用表即可 3 频 率 表 4565 Hz, 0.5 级 4 秒 表 分度值不大于 0.1 s 5 兆 欧 表 实验电压 500 V 6 专用测试板 7 微孔酶标板 96 孔 8 分光光度计 波长准确度优于0.5 nm 经检定合格的 9 测试溶液 200 g/mlK2Cr2O7溶液 所需设备见附录 1 1 1 标准物质 1 1 . 1 标准干涉滤光片 峰值波长4 0 5 ，4 5 0 ，4 9 2 ，5 4 0 及6 2 0 2 n m 的标准干涉滤光片，半宽度不大于8 n m ，峰 值透射比不小于4 5 。 注：标准干涉滤光片的值必须在波长准确度
6、不超过0 . 5 n m 的分光光度计上标定。 1 1 . 2 光谱中性玻璃滤光片 其标称值分别为0 . 5 和1 . 0 A 。 ( 二) 检定环境条件 1 2 检定环境条件应符合以下要求。 1 2 . 1 温度 5 3 5 ；相对湿度不大于8 5 。 1 2 . 2 供电电源：2 2 0 V 电源电压变化不超过1 0 ；频率变化不超过5 0 1 H z 。 1 2 . 3 仪器应置于水平无震动的工作台上，操作时不得有摇动现象。 1 2 . 4 检定时不得有强光直射。仪器周围无强磁场、电场干扰，无强气流影响，不应有 易燃、易爆和腐蚀性气体。 三 检定项目和检定方法 1 3 检定项目和检定方法
7、要求如下。 1 3 . 1 检定前仪器应预热2 0 m i n 。 1 3 . 2 新制造的指针式仪器应进行第1 5 、7 9 条的检定；使用中和修理后的仪器进行 1 5 、7 8 条的检定，必要时可增加第9 条的检定。 新制造的数显、打印仪器进行第1 9 条的检定；使用中和修理后的仪器，进行1 8 条的 检定，必要时可增加第9 条的检定。 1 4 外观检查 外观按第1 条要求进行检查。 1 5 稳定度的检定 1 5 . 1 选用4 9 2 n m 波长，A ，B 类仪器在吸光度0 . 0 A 处，C ，D ，E 类仪器在1 . 0 A 处( 测量标 称值为1 . 0 A 的光谱中性滤光片)
8、，记录仪器示值( 详细操作步骤见仪器使用说明书) ，1 0 m i n 后再次记录仪器示值。求出二次吸光度值之差A( 自动测量仪器单次测量值以平均值计 算) 。A ，B 类仪器按式( 1 ) ；C ，D ，E 类仪器按式( 2 ) 计算。 1 5 . 2 波长选择同上，将调压器接入外电路与仪器进线间，用调压器输入2 2 0 V 电压，A ， B 类仪器在吸光度0 . 0 A 处，C ，D ，E 类仪器在1 . 0 A 处( 测量标称值为1 . 0 A 的光谱中性滤光片) ， 记录仪器示值，将电压降至1 9 8 V 后，再次测量，记录仪器示值。然后，将电压回升至2 2 0 V ， 稍停片刻再升至
9、2 4 2 V ，第三次测量，记录数据。计算1 9 8 V ，2 4 2 V 分别同2 2 0 V 所测数据之差 A。A ，B 类仪器按式( 1 ) ，C ，D ，E 类仪器按式( 2 ) 计算。 1 5 . 3 稳定度计算公式： rA ( 1 ) rAA100% ( 2 ) 式中 A仪器吸光度初始值( 或第一次打印的平均值) 。 1 6 波长准确度及透光特性的检定 1 6 . 1 对C 类仪器，用峰值波长为4 0 5 ，4 9 2 及6 2 0 n m 的三片标准干涉滤光片，分别置于仪 器出光孔前( 干涉滤光片平面与入射光束垂直) ， 自短波向长波逐点测出滤光片的波长吸 光度示值，求出相应的
10、峰值波长Mi。连续测量3 次。按式( 3 ) 计算波长准确度： 1 3i? 3 1MiS ( 3 ) 式中 Mi第i次波峰测量值； S波长标准值。 1 6 . 2 其它类仪器用表7 中规定的分光光度计检定仪器所附干涉滤光片在各波长下的透 射比( 检定时，干涉滤光片的平面应与入射光束垂直) ，绘制透射比- 波长特性曲线( 如图所 示) 。干涉滤光片峰值波长误差为： M ( 4 ) 式中 滤光片峰值波长标称值； M峰值透射比TM对应的波长。 滤光片半宽度为： W21 (5) 式中 1，2透射比为1 2 TM 时对应的波长。 峰值透射比： 峰值透射比- 波长特性曲线的顶点所对应的透射比值为峰值透射比
11、。 T TM-1 2TM 1 7 吸光度准确度的检定 1 7 . 1 选用4 0 5 ，4 9 2 和6 2 0 n m 波长，以空气为参比，分别测量标称值为0 . 5 和1 . 0 A 的光谱 中性玻璃滤光片，A ，B ，C ，E 类仪器用专用测试板代替酶标板。连续测量3 次( 详细步骤见仪 器说明书) ，依次记录其示值( 自动测量仪器单次测量值以平均值计算) 。 1 7 . 2 对于吸收池固定的仪器，先用空吸收池调整仪器零点，然后将光谱中性滤光片放 入样品室中，连续测量3 次。 1 7 . 3 吸光度准确度A按下式计算： A1 3i? 3 1AiAS ( 6 ) 式中 Ai第i次测量的吸光
12、度值； AS吸光度标准值。 1 8 吸光度重复性的检定 1 8 . 1 D 类仪器，选用4 5 0 n m 波长，将空白溶液( 二次蒸馏水) 注入吸收池中，调零后，抽 出空白溶液，再注入浓度为2 0 0 g / m L 的重铬酸钾测试溶液，测量其吸光度，重复测量5 次。 1 8 . 2 其它类仪器，波长选择同上，在酶标板第一排加注空白溶液，第二排加注浓度为 2 0 0 g / m L 的重铬酸钾测试溶液，重复测量5 次。记录每次测试的第二排吸光度值。取第二排 任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。 1 8 . 3 重复性A计算公式： max| Ai1 5i? 5 1Ai | A 1 5i? 5
13、1Ai 100% ( 7 ) 式中 Ai第i次吸光度测量值。 1 9 线性误差的检定 1 9 . 1 D 类仪器( 不包括指针式) 选用 5 4 0 n m 波长，以空气为参比，调整仪器零点，将标 称值0 . 5 ，1 . 0 A 中性滤光片分别放入样品室中，重复测量3 次，依次记录仪器示值。 1 9 . 2 将以上两片中性滤光片叠加后置入样品室中，重复测量3 次，依次记录仪器示值。 1 9 . 3 A ，B ，E 类仪器波长选择同1 9 . 1 款，将标称值0 . 5 ，1 . 0 A 中性滤光片分别放入专用 测试板样品位置中，以空气为参比，各重复测量3 次( 自动测量仪器单次测量值以平均值
14、计 算) 。 1 9 . 4 将以上两片中性滤光片叠加后置入专用测试板的同一孔位中，重复测量3 次( 测量 值计算方法同上) 。 1 9 . 5 线性误差aA按下式计算： A-1A-2A-1.2 aA A-1A-2 100% ( 8 ) 式中 A-1 第一片中性滤光片吸光度平均值； A-2 第二片中性滤光片吸光度平均值； A-1 . 2两片中性滤光片叠加后的吸光度平均值。 2 0 换挡偏差的检定 带有T - A 转换挡的仪器， 选用4 9 2 n m 波长， 调节有关旋钮， 经透射比1 0 0 ( 数显仪器1 0 0 . 0 ) 和吸光度0 . 0 0 0 ；透射比1 0 ( 数显仪器1 0 . 0 ) 和吸光度1 . 0 0 0 校正后，调节有关旋钮，使透射 比示值为5 0 ( 数显仪器5 0 . 0 ) ，按下吸光度测量开关，记录吸光度数值。按下式计算换挡偏 差： TAA0 . 3 0 1 0 ( 9 ) 2 1 测试速度的检定 2 1 . 1 D 类仪器，选用4 9 2 n m 波长，将空白溶液注入吸收池中
